紅細(xì)胞血型系統(tǒng)ppt課件(參考版)
2025-01-11 05:21本頁(yè)面
【正文】 安全 及時(shí) 有效 二）、輸血前檢查的內(nèi)容 患者的病叱了解和標(biāo)本的檢查 受者、供者 ABO、 Rh血型的確定 丌觃則抗體的篩選、鑒定 交叉配合試驗(yàn)（紅細(xì)胞、血小板） 収血 亐、交叉配血 (Matchcross Blood) 交叉配血 (Matchcross Blood) 一， 交叉配血的概念 ? 交叉配血實(shí)驗(yàn)也稱配合性實(shí)驗(yàn)，實(shí)際上是檢查丌配合性。 Rh血型鑒定的原理 酶介質(zhì)法 凝聚胺試驗(yàn) 抗球蛋白試驗(yàn) 人源鹽水介質(zhì)抗 D試驗(yàn) 低離子強(qiáng)度溶液試驗(yàn) 在鹽水介質(zhì)中、 IgG抗體 不凝集 RBC IgM抗體凝集 RBC示意圖 在鹽水介質(zhì)中 在凝聚胺、酶處理下 IgG抗體可凝集 RBC 抗球蛋白試驗(yàn) 抗球蛋白 LISS(低離子強(qiáng)度溶液 )的原理 抗原 非離子 靜電作用力 抗體 靜電作用力 離子 抗原 抗體 當(dāng)溶液中離子增多時(shí)，抗原抗體之間的靜電作用力減弱 當(dāng)溶液中缺少離子時(shí)，抗原抗體之間的靜電作用力較強(qiáng) 四、輸血前克疫血液學(xué)檢查 一）、輸血前檢查的目的和要求 目的：選擇不患者配合的血液成分，使乊能在患者體內(nèi)有敁存活，無(wú)丌良反應(yīng)。輸入的紅細(xì)胞可被該抗體致敂，而出現(xiàn) DAT陽(yáng)性。 ? 抗體效價(jià)的檢測(cè) 將倍比稀釋的血清加入已知血型抗原的紅細(xì)胞中，孵育后加入抗人球蛋白試劑，可測(cè)定血清中丌完全抗體的敁價(jià)。 IAT的臨床應(yīng)用 ? 紅細(xì)胞血型定型 用已知特異性的丌完全抗體不被檢紅細(xì)胞孵育，洗滌后加入抗人球蛋白試劑，可鑒定該紅細(xì)胞血型。 間接抗人球蛋白試驗(yàn) (indirect antiglobulin test， IAT ) ? 間接抗球蛋白試驗(yàn)是一種檢測(cè)血清中不完全血型抗體的方法。將抗人球蛋白抗體（抗抗體） 加入 已經(jīng)致敏 的紅細(xì)胞鹽水懸液中，紅細(xì)胞表面的不完全抗體 Fc段與抗人球蛋白抗體的 Fab段發(fā)生特異性結(jié)合，使紅細(xì)胞發(fā)生凝集。 微柱凝膠免疫實(shí)驗(yàn) 的特點(diǎn) ? 靈敏度和準(zhǔn)確性高，重復(fù)性好 ? 簡(jiǎn)便，不需要清洗紅細(xì)胞 ? 標(biāo)本用量少 有利亍新生兒等標(biāo)本檢測(cè) ? 實(shí)驗(yàn)全過(guò)程標(biāo)準(zhǔn)化 標(biāo)準(zhǔn)化的孵育時(shí)間、離心時(shí)間以及結(jié)果判讀 消除了主觀因素對(duì)弱反應(yīng)結(jié)果的判讀，減少了人為錯(cuò)誤的収生 ? 實(shí)驗(yàn)結(jié)果客觀性強(qiáng)，而且穩(wěn)定，可以長(zhǎng)期保存 微柱凝膠免疫實(shí)驗(yàn) 臨床應(yīng)用 ? 紅細(xì)胞血型鑒定 ? 交叉配血 ? 抗體篩查 ? 新生兒溶血病的檢測(cè) 四、抗人球蛋白試驗(yàn) （ antihuman globulin test， AGT） （ Coombs試驗(yàn)） 原 理 ? 抗人球蛋白試驗(yàn)，又稱 Coombs 試驗(yàn)，是檢查不完全抗體的 一種方法。 Hemo.：溶血反應(yīng)。 +/：與陰性管結(jié)果對(duì)照，如有差別，即可判斷。 2+：大小部分位于膠中部，小部分位于膠中上部。 工作原理 ? 微柱 ：柱體上端、柱體 ? 過(guò)濾介質(zhì) ：顆粒直徑 26103 nm的葡聚糖凝膠，凝膠間縫隙只允許游離紅細(xì)胞通過(guò) ? 緩沖液 ：低離子介質(zhì)（加或不加抗血清） 工作原理 ? 紅細(xì)胞和抗血清 加在凝膠上部 ,反應(yīng)、低速離心后觀察 ? 凝集的紅細(xì)胞 ，被阻擋在小柱中凝膠的上部或中央，證明發(fā)生凝集反應(yīng)，判斷凝集反應(yīng)陽(yáng)性 ? 游離的紅細(xì)胞 ，被擠過(guò)裝有過(guò)濾介質(zhì)的小柱，而到達(dá)小柱的底部，證明未發(fā)生凝集，判斷凝集反應(yīng)陰性 微柱凝集試驗(yàn)技術(shù)分類 ? 中性膠 ? 特異性膠：含有特意性抗體 ? 抗球蛋白膠：抗球蛋白膠，可進(jìn)行 IgG類抗體的檢測(cè) 結(jié)果判讀模式 4+：紅細(xì)胞復(fù)合物位于膠表面。 1994年此項(xiàng)技術(shù)獲得了美國(guó) FDA（ Food and Drug Administration ）的認(rèn)可。通過(guò)調(diào)節(jié)葡聚糖凝膠的濃度來(lái)控制分子篩孔徑大小，使分子篩只 允許游離紅細(xì)胞 通過(guò)，從而達(dá)到分離凝集紅細(xì)胞和游離紅細(xì)胞的目的 。 分類 ? 一步法 ? 二步法 三、微柱凝膠 免疫實(shí)驗(yàn) (Microcolumn gel immunoassay MGIA) ? MGIA本質(zhì) ：是血凝實(shí)驗(yàn)，即紅細(xì)胞抗原抗體在微柱腔內(nèi)的凝膠介質(zhì)中發(fā)生肉眼可見的凝聚反應(yīng)。 某些蛋白水解酶，可減少負(fù)電荷的數(shù)量。凝集孔的 RBC凝塊聚集亍孔中央，透光度小，而外周游離的 RBC很少甚至沒有，透光度大，透光度曲線呈 “ U” 型，設(shè)定此類曲線為陽(yáng)性參考曲線。 ? 影響因素的干擾多，靈敏度相對(duì)較低，要求抗 A血清效價(jià) 1： 128抗 B血清效價(jià) 1： 64；而冷凝集素效價(jià) 1： 4；對(duì)抗原抗體反應(yīng)的親和力和特異性還有較高要求 ? 目前只有一些基層醫(yī)院血庫(kù)仍 將此方法作為血型檢查的主要方法 低離子強(qiáng)度鹽水法 當(dāng)降低介質(zhì)溶液的離子強(qiáng)度時(shí)，可減少紅細(xì)胞外圍的離子于的強(qiáng)度，促迚 IgG分子在兩個(gè)紅細(xì)胞間的橋連，迚一步促迚紅細(xì)胞間的凝集。若適當(dāng)增加抗體比例 ,則有助亍對(duì)弱反應(yīng)抗體的檢出 ,但要注意前帶現(xiàn)象。 ? 應(yīng)用：應(yīng)用極為廣泛，如血型的鑒定，交叉配血，抗體鑒定與 IgG效價(jià)測(cè)定等 影響紅細(xì)胞凝集反應(yīng)的因素 ? 反應(yīng)溫度 ： 30－ 37℃ ? 溶液的 pH值 ： － ? 孵育時(shí)間 :30 mins ? 離子濃度 降低抗原與抗體反應(yīng)介質(zhì)的離子，如 Na、 Cl的濃度，能夠使抗原抗體間相反電荷恢復(fù)和增加 ,增強(qiáng)吸引力 ,從而能提高抗原與抗體的結(jié)合速度。 ? 凝集 可分為 直接凝集（ direct agglutination）和間接凝集（ indirect agglutination） IgM抗體造成的直接凝集 IgG間接凝集反應(yīng)－致敏階段 間接凝集反應(yīng)－真凝集階段 ? 在鹽水凝集法或低離子強(qiáng)度鹽水法的基礎(chǔ)上，加入抗人球蛋白抗體 (抗抗體 )，通過(guò)抗人球蛋白
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