【正文】 在大學(xué)四年生活中，不斷得到各位老師、同學(xué)的關(guān)心與幫助，使我在學(xué)習(xí)和生活中不斷得到友誼的溫暖與關(guān)懷，最重要的是一種精神上的激勵(lì)，讓我非常感動(dòng)。對(duì)蔗糖酯類陽離子類脂合成反應(yīng)中蔗糖二酸二月桂醇酯的鹵化反應(yīng)進(jìn)行單因素探索和正交探索，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明最佳工藝條件即為：料液比為 8:1，反應(yīng)時(shí)間 h，反應(yīng)溫度 80℃產(chǎn)率為 %。最優(yōu)水平為 A2B1C2即料液比為 8:1，反應(yīng)時(shí)間 h，反應(yīng)溫度 80 ℃。將其 13CNMR譜結(jié)合 1HNMR譜數(shù)據(jù)進(jìn)行歸屬，鑒定化合物為蔗糖1’,4’ 二甲酸月桂醇二酯 碘化物。蔗糖酯類陽離子類脂中間體合成研究（Ⅴ）論文19 合成工藝流程蔗糖酯類陽離子類脂的合成工藝如下圖所示：干燥蔗糖N,N二甲基甲酰胺對(duì)甲苯磺酸原乙酸三甲酯蔗糖 4,6原乙酸酯 水?dāng)嚢?150min 攪拌 30min叔丁胺 蔗糖6乙酸酯除雜質(zhì)后的蔗糖6乙酸酯 殘餾物溶解有產(chǎn)品的溶液有晶體析出的溶液溶液 蔗糖6乙酸酯晶體 A蔗糖6乙酸酯蔗糖4乙酸酯調(diào) pH=7減壓蒸餾 加入適的量氯仿過濾過 濾濾加入氯仿、冰醋酸（2:1）蔗糖6乙酸酯溴化鈉TEMPO滴加 氫氧化鈉至pH=10反應(yīng)液 濾液冰水浴， 8h次氯酸鈉 濾液用 4M HCL 調(diào) pH 為4洗脫液 濃縮液 上聚酰胺色譜柱80%乙醇水溶液洗脫旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮 8 濃縮蒸干 產(chǎn)物 B 蔗糖酯類陽離子類脂中間體合成研究（Ⅴ）論文20產(chǎn)物 B甲苯對(duì)苯甲磺酸加適量甲醇、甲醇鈉反應(yīng)液 濃縮液加熱 60℃至全部溶解對(duì)苯二酚加入 2 倍體積石油醚反應(yīng)液 反應(yīng)液 70℃水浴加熱回流80%乙醇水溶液洗脫 80℃水浴加熱并攪拌 濃縮蒸干產(chǎn)物 C 月桂醇升溫至 120℃ 44旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮加適量 DMF、三苯基膦、咪唑、典加適量甲苯 咪唑三苯基膦DMF反應(yīng)液 80℃攪拌加熱加入 10 倍蒸餾水渾濁液體 靜 置 有晶體析出過濾終產(chǎn)品 D碘圖 15 蔗糖類陽離子類脂的合成工藝圖咪唑蔗糖酯類陽離子類脂中間體合成研究（Ⅴ）論文21 實(shí)驗(yàn)裝置圖蔗糖酯類陽離子類脂合成裝置圖如圖 17 所示。加 20 mL 甲醇重結(jié)晶，得微黃色晶體。2 1＇，6＇位羥基氧化蔗糖6乙酸酯 10 mmol(20 mmol 伯羥基) ，TEMPO（ mmol, g）以及 NaBr ( mmol,)溶于水（50 mL）中成溶液，以 4M HCl 溶液調(diào)節(jié) 15%次氯酸鈉溶液（ mmol 次氯酸鈉/mmol 伯羥基， 100%過量）至所需值，加至上溶液中，兩溶液均調(diào)至所需溫度，反應(yīng)溫度控制在 0 ℃，pH 值用 pHstat 控制在 10 以加入 NaOH（反應(yīng)時(shí)間10 h，為避免酯水解反應(yīng)時(shí)間應(yīng)盡量短） ，產(chǎn)品純化視性質(zhì)定（B） 。向溶液中加入 250 mL 蒸餾水，靜置，產(chǎn)品一直處于渾濁狀態(tài)， 70 ℃烘干加水重新分離，過濾得微黃色晶體。稱取產(chǎn)品 C2 g，咪唑 g，三苯基膦 g，碘 g 溶于 20 mL DMF 中， 80 ℃水浴加熱并攪拌反應(yīng) 3 h，溶液始終為橘紅色并含有殘?jiān)^濾得橘紅色液體。向溶液中加入 250 mL 蒸餾水，靜置 24 h 后出現(xiàn)針狀晶體，過濾揮干得產(chǎn)品 E2。以丙酮：甲醇(1：1) 為展開劑，用薄層色譜法進(jìn)行鑒定，結(jié)果如下圖所示，由圖得E1 疑似未被鹵化。 鹵化反應(yīng)的探索稱取產(chǎn)品 C2 g，咪唑 g，三苯基膦 g，碘 g 溶于 20 mL DMF 中， 80 ℃水浴加熱并攪拌反應(yīng) h。加 20 mL 甲醇重結(jié)晶得微黃色晶體。以丙酮：甲醇(1：4) 為展開劑，用薄層色譜法進(jìn)行鑒定，結(jié)果如下圖所示，確認(rèn)產(chǎn)品C2 與 C3 應(yīng)為同一物質(zhì)。蔗糖酯類陽離子類脂中間體合成研究（Ⅴ）論文14圖 8 化合物 C2 的 TLC 圖考察月桂醇的用量對(duì)酯化反應(yīng)的影響稱取產(chǎn)品 B5 ，月桂醇 g，對(duì)二苯酚 g，對(duì)苯磺酸 g 溶入12 mL 甲苯中，60 ℃溶解后 120 ℃加熱并攪拌反應(yīng) 4 h。溶液由淺黃色逐漸變?yōu)榛液谏?。過濾得澄清淺黃溶液，加入 20 mL 石油醚旋蒸出去甲苯和石油醚。過濾得澄清淺黃色溶液，加入 20 mL 石油醚旋蒸出去甲苯和石油醚。圖 6 化合物 B5 的 TLC 圖總結(jié)：在考慮到生產(chǎn)成本問題可省去超聲，NaOCl 的用量 2 倍量即可，但溫度必須在 0 ℃條件下進(jìn)行。在此期間用 NaOH 調(diào)節(jié) pH 維持在 10。以丙酮：甲醇(1：4) 為展開劑，用薄層色譜法進(jìn)行鑒定，結(jié)果如下圖所示，確認(rèn)產(chǎn)品B4 比 B1 和 B2 的氧化程度高，溶于水微溶于甲醇。在此期間用 NaOH 調(diào)節(jié) pH 維持在 10。以丙酮：甲醇(1：4) 為展開劑，用薄層色譜法進(jìn)行鑒定，結(jié)果如下圖所示，確認(rèn)產(chǎn)品B3 不是要合成的目的產(chǎn)物。在此期間用 NaOH 調(diào)節(jié) pH 維持在10。以丙酮：甲醇(1：4) 為展開劑，用薄層色譜法進(jìn)行鑒定，結(jié)果如下圖所示，確認(rèn)產(chǎn)品B2 為被氧化物且與 B1 為同一物質(zhì)，溶于水微溶于甲醇。在此期間用 NaOH 調(diào)節(jié) PH 維持在10。以丙酮：甲醇(1：4) 為展開劑,用薄層色譜法進(jìn)行跟蹤試驗(yàn) B1 的極性大于 A， 、并用質(zhì)譜與核磁確定其結(jié)果，經(jīng)譜圖解析，確認(rèn)產(chǎn)品 B1 為二羧酸，溶于水微溶于甲醇。在此期間用 NaOH 調(diào)節(jié) pH 維持在 10。圖 1 化合物 B1 的 TLC 圖通過質(zhì)譜和核磁，外加用標(biāo)準(zhǔn)品(來源于大連民族學(xué)院)通過 TLC 板比對(duì)，確認(rèn)產(chǎn)品A 為蔗糖6乙酸酯總結(jié)：試驗(yàn)結(jié)果與原設(shè)定步驟符合。 鹵化在物質(zhì) C（ mmol）的 DMF（20 mL）溶液中加入三苯基膦 PH3P( g, 7mmol)以及咪唑（ g, mmol）和碘 I2( g, mmol),混合物水浴加熱至 80 ℃并攪拌，反應(yīng)時(shí)間為 h,經(jīng)處理得產(chǎn)物（E） ，產(chǎn)物視性質(zhì)純化處理。每隔 20 min 用酸度計(jì)測量反應(yīng)溶液的 pH 值，并用 的氫氧化鈉控制 pH 在 反應(yīng)之間為 6 小時(shí)（為避免酯水解反應(yīng)時(shí)間應(yīng)盡量短） 。2 ℃，每隔 30 min 用酸度計(jì)測量反應(yīng)溶液的 pH值，并用 的氫氧化鈉控制 pH 在 10 反應(yīng)之間為 10 小時(shí)（為避免酯水解反應(yīng)時(shí)間應(yīng)盡量短） 。 OOHHO OHOOCORHOROCH I2P(h)3imidazoleDMF OIHO OHOOCORHOROCHE 初步設(shè)計(jì)吹 HCL 法的 C6 位羥基選擇性鹵化反應(yīng)酯化物( mol)與三甲基氯硅烷 TMSCl( mol， g)混合液中加如 DMSO( mol, g),反應(yīng)用 HCl 吹掃 1 分鐘，繼續(xù)攪拌反應(yīng) 10 分鐘，產(chǎn)物視性質(zhì)純化處理。而蔗糖酯類陽離子類脂的合成目前國內(nèi)還沒有相關(guān)的報(bào)道，本課題應(yīng)用蔗糖為原料進(jìn)行蔗糖酯類陽離子類脂的合成，要經(jīng)過蔗糖三羧酸酯中間體的合成，然后再進(jìn)行酯交換鹵化等步驟 [9]。自那時(shí)以來，一些出版的報(bào)紙對(duì)用于基因傳遞的陽離子脂質(zhì)體的合成方案進(jìn)行了報(bào)道，引起了社會(huì)的廣泛關(guān)注。非病毒載體中的載體有一系列工藝優(yōu)勢，比如制備簡單，儲(chǔ)存穩(wěn)定，耐熱壓滅菌和冷凍干燥等等。然而裸露的治療基因容易被核酸酶降解，表現(xiàn)出很差的細(xì)胞攝取效率。因此陽離子類脂在作為基因載體在基因治療方面必將具有廣闊的應(yīng)用前景。就陽離子類脂的合成目前國內(nèi)外的研究現(xiàn)狀，還不能得到較高的產(chǎn)率，而且原料蔗糖酯類陽離子類脂中間體合成研究（Ⅴ）論文2也不太容易獲得，而本課題采用蔗糖為原料來合成蔗糖酯類陽離子類脂，不僅原料易得而且也能獲得一個(gè)較好的收率。在如何獲得陽離子類脂方面，人們提出了許多合成方案，但還不甚完善，需要進(jìn)一步探討和研究。實(shí)質(zhì)上，在包含陽離子類脂和陽離子脂質(zhì)體的基因轉(zhuǎn)染研究過程中，通常需要從組織培養(yǎng)浴中移去血清。此外，目前可用載體在體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染方面的應(yīng)用也是有限的。其中包括被稱作“載體法” 的方法，此方法包括使用載體促進(jìn)生物活性劑胞內(nèi)傳遞到特定靶細(xì)胞如疾病細(xì)胞內(nèi)。脂質(zhì)體在所有已用于臨床試驗(yàn)的基因載體中僅次于病毒載體，居第二位，是最有發(fā)展前景的非病毒載體。蔗糖酯類陽離子類脂中間體合成研究（Ⅴ）論文III目 錄摘 要 ..........................................................IABSTRACT ........................................................II目 錄 ..........................................................III1. 緒 論 ........................................................1 課題的目的和意義 ............................................1 國內(nèi)外文獻(xiàn)綜述 ..............................................2 ..........................................2 實(shí)驗(yàn)研究內(nèi)容 ................................................32 合成路線設(shè)計(jì) .............................................