【正文】 F〕 第五十九頁(yè)，共七十四頁(yè)。 “ Sample in. Answer out.〞 ? 全自動(dòng)操作 ? 完全封閉系統(tǒng) ? 污染可能性小 ? 減少人為錯(cuò)誤 ? 結(jié)果精確度高 ? 檢測(cè)時(shí)間短 無(wú)需專業(yè)技術(shù)人員和特殊實(shí)驗(yàn)室 第六十頁(yè)，共七十四頁(yè)。 研究人數(shù) 1,700 Patients ? 秘 魯 、南非、阿塞拜疆、印度 ? 涂片陽(yáng)性樣品： ? 靈敏性 %,特異性 % ? 涂片陰性 , 培養(yǎng)陽(yáng)性樣品： ? 三次檢測(cè)靈敏性 % ? 一次檢測(cè)靈敏性 % ? 對(duì)利福平耐藥性檢測(cè)： ? 靈敏性 %,特異性 % 第六十一頁(yè)，共七十四頁(yè)。 結(jié)論 ? GeneXpert檢測(cè) Mtb簡(jiǎn)單、易于操作，對(duì)操作者技術(shù)要求不高：只需要把痰液、反響液參加儀器即可得出診斷報(bào)告； ? GeneXpert檢測(cè) Mtb快速：整個(gè)過(guò)程大約 2小時(shí)。 ? GeneXpert檢測(cè) Mtb對(duì)操作人員平安：整個(gè)檢測(cè)過(guò)程全封閉、一次性完成。 ? 高靈敏性： BCG— 176 cfu/ml； H57Rv— 112 cfu/ml ? 耐藥性診斷：可對(duì)利福平耐藥性進(jìn)行檢測(cè) 第六十二頁(yè)，共七十四頁(yè)。 現(xiàn)代免疫學(xué)診斷技術(shù) ? 體液免疫診斷技術(shù)：是利用結(jié)核分枝桿菌或其提取物抗原檢測(cè)結(jié)核病患者血清抗體的方法。目前，通過(guò)檢測(cè)抗結(jié)核桿菌的抗體 (IgG)診斷結(jié)核病的商品化試劑盒已較多。采用的方法包括：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)〔 ELISA)和免疫金標(biāo)記技術(shù)的免疫層析法和膠體金標(biāo)記的滲濾法等，采用的抗原也各不相同。 第六十三頁(yè)，共七十四頁(yè)。 體液免疫學(xué)診斷技術(shù)的意義 在國(guó)內(nèi)應(yīng)用較廣泛，是結(jié)核病的輔助診斷方法之一 ,尤其對(duì)肺外結(jié)核、菌陰肺結(jié)核的診斷具有應(yīng)用價(jià)值。 缺乏之處：?jiǎn)为?dú)使用時(shí)，其檢測(cè)的特異性和靈敏度都有些缺點(diǎn)。 目前國(guó)際上反對(duì)使用該項(xiàng)技術(shù)的呼聲在增加。原因主要是特異性問(wèn)題。 第六十四頁(yè)，共七十四頁(yè)。 細(xì)胞免疫學(xué)診斷技術(shù) ? 細(xì)胞免疫診斷技術(shù)應(yīng)用較少，過(guò)去主要應(yīng)用 PPD皮試技術(shù) ， 近年來(lái)英國(guó)和澳大利亞研制了 ELISpot 、 TSpot技術(shù)和 QFTGold 。 ? 此項(xiàng)技術(shù)用于感染情況的檢測(cè)是一項(xiàng)特異性較強(qiáng)、靈敏度較高很有希望的新技術(shù)。 第六十五頁(yè)，共七十四頁(yè)。 ? 酶聯(lián)免疫斑點(diǎn) (ELISpot)技術(shù) 是檢測(cè)細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的一種實(shí)驗(yàn)方法，采用可定量的夾心 ELISA方法，利用結(jié)核分枝桿菌特異性抗原 ESAT6 CFP10刺激和激活免疫活性細(xì)胞使其產(chǎn)生 IFN?，并 檢測(cè) IFN?的濃度變化進(jìn)行診斷的方法。通過(guò) ELISpot酶聯(lián)斑點(diǎn)分析系統(tǒng)對(duì)加底物后形成的斑點(diǎn)分析后得出結(jié)果。 ELISpot具有較高的特異性和敏感性。 第六十六頁(yè)，共七十四頁(yè)。 ELISPOT技術(shù)原理 ? 細(xì)胞免疫主要由 T淋巴細(xì)胞發(fā)動(dòng)， T淋巴細(xì)胞分成效應(yīng) T淋巴細(xì)胞和記憶 T淋巴細(xì)胞。記憶 T淋巴細(xì)胞在首次感染病原體后長(zhǎng)期存在免疫系統(tǒng)中。當(dāng)再次受到感染刺激后。這些記憶 T淋巴細(xì)胞發(fā)出信號(hào)分子并增殖成為效應(yīng) T淋巴細(xì)胞，效應(yīng) T淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子，如 干擾素 (INFγ ) 。所以無(wú)論是否有臨床病癥，檢測(cè)效應(yīng) T淋巴細(xì)胞在血中的水平可作為機(jī)體是否被感染的指標(biāo)。 第六十七頁(yè)，共七十四頁(yè)。 ELISPOT在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用 在 MTB潛伏感染診斷中的應(yīng)用 早期診斷 MTB潛伏感染對(duì)控制結(jié)核病意義重大。目前診斷 MTB潛伏感染仍沿用 100年來(lái)使用的 TST，但 TST不能區(qū)分 MTB感染患者和接種 BCG的健康人以及感染環(huán)境中的分枝桿菌患者。 Lalvani在土耳其檢查了暴露于肺結(jié)核家庭環(huán)境中的 908名健康兒童。皮試結(jié)果說(shuō)明 580名兒童患有潛伏性肺結(jié)核 ,需要進(jìn)行藥物治療 ,以免轉(zhuǎn)化為活動(dòng)性肺結(jié)核 。而 ELISPOT結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有 380名兒童患有潛伏性肺結(jié)核。通過(guò) ELISPOT檢測(cè) ,只需要治療 380名兒童 ,而不是 580名 ,但卻能夠預(yù)防同樣數(shù)量的活動(dòng)性肺結(jié)核病例發(fā)生。因此， ELISPOT 比 TST篩選結(jié)核潛伏感染更有效 ,而且 ELISPOT檢測(cè)結(jié)果與 MTB的接觸程度相關(guān)性更強(qiáng)。 第六十八頁(yè)，共七十四頁(yè)。 ELISPOT早期技術(shù)評(píng)估 英國(guó) Ewer等用 ELISpot檢測(cè)對(duì)結(jié)核分枝桿菌分泌的抗原有特異性反響的 T淋巴細(xì)胞來(lái)診斷早期結(jié)核病。這項(xiàng)研究共納入了結(jié)核流行區(qū)有不同程度結(jié)核病接觸史的 535名學(xué)生，結(jié)果顯示結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn) (TST)和ELISpot的一致性達(dá) 89%(P)。但 ELISpot與研究對(duì)象結(jié)核病接觸程度之間的正相關(guān)性顯著強(qiáng)于 TST。在接種過(guò) BCG的兒童中， TST假陽(yáng)性的可能性較大，而 BCG接種對(duì) ELISpot結(jié)果沒有影響。作者認(rèn)為 ELISpot可開始替代 TST，這將使更多的人能在感染仍處于隱匿期時(shí)就可進(jìn)行預(yù)防，而不至于開展成為嚴(yán)重的結(jié)核病。 第六十九頁(yè)，共七十四頁(yè)。 ELISPOT法的優(yōu)點(diǎn) ? (1)靈敏、特異，能從 100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中測(cè)出 1個(gè)分泌 INF細(xì)胞；只有MTB和少數(shù)非結(jié)核分枝桿菌才會(huì)出現(xiàn)陽(yáng)性反響，而 BCG及多數(shù)非結(jié)核分枝桿菌因不分泌 ESAT6和 CFP10蛋白，因此本法能區(qū)別BCG接種出現(xiàn)的陽(yáng)性反響。 ? (2)快速：能早期診斷結(jié)核感染，檢測(cè)全過(guò)程 2天。 ? (3)應(yīng)用面廣：在肺結(jié)核、肺外結(jié)核及免疫抑制的結(jié)核患者均能檢測(cè)。 ? (4)療效評(píng)估：當(dāng)結(jié)核菌被消滅后，效應(yīng) T淋巴細(xì)胞即消失，測(cè)定效應(yīng) T淋巴細(xì)胞也可檢測(cè)機(jī)體是否去除了結(jié)核菌，進(jìn)行臨床療效評(píng)估 。 第七十頁(yè)，共七十四頁(yè)。 ELISPOT技術(shù)的缺點(diǎn) ? 細(xì)胞培養(yǎng)及抗原刺激時(shí) ,有發(fā)生細(xì)菌污染的可能 ,以致實(shí)驗(yàn)失敗 。 ? 實(shí)驗(yàn)過(guò)程步驟較多 ,實(shí)驗(yàn)人員需有一定的理論根底并經(jīng)屢次操作的培訓(xùn)方能勝任 。 ? 目前試劑價(jià)格比較昂貴。 第七十一頁(yè)，共七十四頁(yè)。 結(jié)束語(yǔ) ? 結(jié)核病準(zhǔn)確、快速的診斷是結(jié)核病防治人員多年期盼的。隨著科技不斷進(jìn)步，今天企盼已經(jīng)成為可能。經(jīng)過(guò)不斷的對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的優(yōu)化和繼續(xù)努力開發(fā)更新的技術(shù)，相信未來(lái)的結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷，一定可以最大限度的滿足臨床和防治工作的需要。 第七十二頁(yè)，共七十四頁(yè)。 謝謝！ 第七十三頁(yè)，共七十四頁(yè)。 內(nèi)容總結(jié) 結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化與新診斷技術(shù)進(jìn)展。 重復(fù)緩慢吸氣動(dòng)作或平靜呼吸片刻，準(zhǔn)備再次咳嗽的動(dòng)作。如使用的載玻片一端有磨砂面，可使用 2B鉛筆在磨砂面上直接書寫 )。以現(xiàn)場(chǎng)和非現(xiàn)場(chǎng)督導(dǎo)為主要方式。〔 1〕定性誤差包括高假陽(yáng)性和高假陰性。 5）重新購(gòu)置質(zhì)量合格的染料并重新配制染液。與 Southern雜交和酶促化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測(cè)的靈敏度相似 ,但要比酶促比色法提高 10倍。固體 /液體培養(yǎng)物 **。謝謝 第七十四頁(yè)，共七十四頁(yè)。