【正文】 形成的雞胚進(jìn)行病毒分離。 二、病毒的形態(tài)學(xué)檢查 （1）電子顯微鏡 借助電子顯微鏡, 可在感染細(xì)胞內(nèi)觀察到病毒顆粒，根據(jù)顆粒的大小及形態(tài)可初步判斷。（2）光學(xué)顯微鏡 light microscope 有些病毒生長(zhǎng)繁殖時(shí)，可在細(xì)胞內(nèi)形成一種異常染色斑塊稱為包涵體(inclusion body)。包涵體多為園形或卵園形，位于胞漿(如狂犬病毒)、胞核（如皰疹病毒）或核內(nèi)、漿內(nèi)均有(如麻疹病毒) 。 第二節(jié)、 檢測(cè)病毒成分（Detection of viral ponents)一、檢測(cè)病毒抗原1．免疫熒光檢測(cè)（immunofluorescence assay, IFA）病毒抗體標(biāo)記熒光素后, 與病毒抗原結(jié)合，使抗原被熒光抗體著色， 免疫組織化學(xué)檢測(cè)（immunohistochemical staining） 用酶取代熒光素來(lái)標(biāo)記抗體，檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)病毒抗原，通過(guò)酶催化底物形成有色產(chǎn)物，用肉眼清晰易辨。 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzymelinked immunosorbent assay, ELISA）此法采用酶標(biāo)記抗體，在試管內(nèi)與抗原結(jié)合，通過(guò)酶催化底物顯色，抗原的量與顯色深淺成正比，故可以進(jìn)行抗原的定性與定量。 Western blotting Western印跡法，是先將樣品（抗原）電泳后，轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，將膜按泳道切成細(xì)條后，分別浸于酶標(biāo)記抗體液中反應(yīng)，洗滌后加底物在膜上顯色。 　病毒凝集試驗(yàn)hemagglutination assay二、檢測(cè)病毒核酸 1．核酸分子雜交技術(shù)(nucleic acid hybridization) 斑點(diǎn)雜交 (Dotblot)　 原位雜交 (in situ)　2．多聚酶鏈反應(yīng)(polymerae chain reaction，PCR) （biochips, microassay)三、檢測(cè)病毒酶類檢測(cè)病毒基因編碼的酶，可以進(jìn)行病毒感染的輔助診斷。乙肝病毒(HBV)具有自身編碼的DNA多聚酶；逆轉(zhuǎn)錄病毒(HIV)含有逆轉(zhuǎn)錄酶；皰疹病毒(HSVI、VZV和CMV)具有脫氧胸腺嘧啶核苷激酶(dTK)。檢測(cè)不同的病毒酶，可做出相應(yīng)的診斷。 第三節(jié)、免疫反應(yīng)檢測(cè)(Detection of immune responses)一、體液免疫檢測(cè)（IgM, IgG抗體）（1）中和試驗(yàn)（2）血凝抑制試驗(yàn) （3）瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) （4）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (ELISA)二、細(xì)胞免疫檢測(cè)用kit檢測(cè)CTL、細(xì)胞因子等(少用）（1）中和試驗(yàn) neutralization assay特異性的抗病毒中和抗體與病毒作用，能夠抑制病毒對(duì)敏感細(xì)胞的吸附、穿入。從而阻止了病毒的增殖，使其失去了感染力，是一種鑒定病毒和抗體診斷的可靠方法。 （2）血凝抑制試驗(yàn) hemagglutinin inhibition assay 有些病毒（血凝素）能凝集人和某些哺乳動(dòng)物的紅細(xì)胞，這就是紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象或血凝現(xiàn)象。當(dāng)加入特異性抗體，這種凝集現(xiàn)象就被抑制，稱為紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)。第27章 病毒感染的防治第一節(jié) 病毒感染的預(yù)防一、人工被動(dòng)免疫 passive1．天然被動(dòng)免疫 主要依靠能通過(guò)胎盤的IgG抗體及初乳中的IgG抗體。2．人工被動(dòng)免疫 （1）人胎盤球蛋白或丙種球蛋白immunoglobulin （2）康復(fù)期病人血清或高效價(jià)免疫血清 二、人工主動(dòng)免疫 active 主要是接種減毒活疫苗、滅活疫苗、基因工程等疫苗，使機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫，以預(yù)防病毒感染。 (1) 滅活疫苗（inactivated vaccines） 系采用甲醛等滅活劑滅活病毒, 使其失去感染性而不影響抗原性。目前常用的有流行性乙型腦炎疫苗、狂犬病疫苗、流感滅活疫苗等。 (2)減毒活疫苗（attenuated live vaccines） 系用自然或人工選擇法篩選的、對(duì)人毒力低的病毒變異株。常用的有牛痘苗、脊髓灰質(zhì)炎活疫苗(糖丸) 等。 (3) 亞單位疫苗（subunit vaccines） 用化學(xué)試劑裂解病毒，除去其核酸，提取病毒包膜或衣殼蛋白等亞單位制成的疫苗。 (4) 合成肽疫苗（synthetic peptide vaccines）根據(jù)病毒結(jié)構(gòu)蛋白基因核苷酸排列，推測(cè)氨基酸序列，繼而合成肽段，制成疫苗。 (5) 基因工程疫苗（rebinant vaccines） 使用DNA重組技術(shù)，將病毒結(jié)構(gòu)抗原基因?qū)爰?xì)菌、酵母菌或哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)，純化表達(dá)產(chǎn)物，制成疫苗。 (6) 獨(dú)特型疫苗(idiotypic vaccines) 也稱抗獨(dú)特型抗體疫苗，是根據(jù)免疫網(wǎng)絡(luò)學(xué)說(shuō)設(shè)計(jì)的一種新型疫苗。 (7) DNA疫苗（DNAbased vaccine） 又稱基因疫苗或核酸疫苗，是能夠表達(dá)重組蛋白抗原的質(zhì)粒DNA。注射人體后，在宿主體內(nèi)表達(dá)病毒抗原蛋白，能誘導(dǎo)人體免疫應(yīng)答。第二節(jié) 病毒感染的治療（Treatment for viral infections)化學(xué)治療 chemotherapy生物治療 – interferons amp。 cytokines therapy中草藥治療 – traditional Chinese herbs基因治療 – gene therapy 第28章 肝炎病毒（Hepatitis Virus）肝炎病毒分為5種：甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus, HAV)乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)丙型肝炎病毒( HCV )丁型肝炎病毒( HDV )戊型肝炎病毒( HEV )第一節(jié) 甲型肝炎病毒 （一）形態(tài)結(jié)構(gòu) ：球形(spherical)，無(wú)包膜，20面體立體對(duì)稱(cubic symmetry)，直徑2732nm，屬小RNA病毒科 HAV兩種形式：完整病毒顆粒； 缺陷病毒顆粒（二）HAV基因組結(jié)構(gòu)與功能單正鏈RNA，有感染性(infectivity)，分三部分：HAV基因組的ORF分3個(gè)功能區(qū)P1 衣殼蛋白（VP1VP4）（HAV Ag） P2 轉(zhuǎn)錄及基因調(diào)控蛋白 P3 非結(jié)構(gòu)蛋白（酶類、調(diào)節(jié)蛋白等）（三）HAV感染動(dòng)物模型與細(xì)胞培養(yǎng) HAV增殖速度緩慢，無(wú)明顯CPE（細(xì)胞病變癥狀）（四）HAV抵抗力 (resistance) 耐脂溶劑、耐酸（pH 3）；60℃ 1小時(shí)仍存活；100℃ 5min滅活病毒；甲醛溶液 or 漂白粉浸泡二、HAV致病性與免疫性（一）傳染源與傳播途徑傳染源：潛伏期后期和急性期病人；受感染的非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物傳播途徑 ：糞口傳播 日常生活接觸——散發(fā)性流行污染的水和食物——爆發(fā)流行 （二）HAV致病性與免疫致病機(jī)理：HAV經(jīng)口在口咽部或唾液腺中增殖174。腸粘膜和局部淋巴結(jié)增殖174。 病毒血癥174。侵害肝臟。致病特點(diǎn)：多為隱性感染 ；潛伏期46周，自限性急性肝炎；無(wú)慢性化，少重癥；多見(jiàn)于兒童和青年 三、微生物學(xué)檢查ELISA (enzyme linked immunosorbent assay)檢測(cè)血清中抗HAV IgM早期診斷檢測(cè)血清中抗HAV IgG流行病學(xué)調(diào)查HAV微生物學(xué)檢查：免疫電鏡 ：HAV顆粒 核酸雜交、RTPCR：HAV RNA 四、HAV防治原則管理好糞便；保護(hù)水源；加強(qiáng)飲食業(yè)衛(wèi)生管理；注意個(gè)人飲食衛(wèi)生甲肝疫苗接種第二節(jié) 乙型肝炎病毒一、HBV生物學(xué)特性（一）HBV形態(tài)與結(jié)構(gòu)HBV為有包膜病毒，有三種形態(tài)大球形顆粒(virion) 小球形顆粒(spherical particles) 管形顆粒(filamentous forms) （Dane particle）完整的HBV病毒體，具有感染性，結(jié)構(gòu)組成：雙層外衣殼脂質(zhì)雙層 和 膜蛋白：（HBsAg；PreS1； PreS2）單層內(nèi)衣殼20面體立體對(duì)稱 HBV核心抗原（HBcAg）HBV e抗原（HbeAg）內(nèi)芯不對(duì)稱雙鏈環(huán)狀DNA和DNA聚合酶 2．小球形顆粒(spherical particles) 缺陷性顆粒，不含病毒核酸，無(wú)感染性成份為HBsAg。(filamentous forms) 小球形顆粒串聯(lián)而成（二）HBV基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn)基因組較小， ；雙鏈環(huán)狀DNA有裂隙；一條長(zhǎng)鏈(負(fù)鏈)，一條短鏈(正鏈)；長(zhǎng)鏈含4個(gè)ORF：（S區(qū)C區(qū)P區(qū)X區(qū)）HBV基因組長(zhǎng)鏈的4個(gè)ORF:S基因 PreS1基因 PreS2基因 S抗原（判斷乙肝的主要標(biāo)志）；PreS1抗原 ；PreS2抗原。均為HBV外衣殼蛋白構(gòu)成HBV表面抗原（HBsAg）的三種形式：小分子量HBsAg（S抗原）中分子量HBsAg（S抗原、PreS2）大分子量HBsAg（S抗原、PreSPreS2）HBV四個(gè)基本血清型 ：adr、adw、ayr、aywHBsAg含a抗原決定簇：兩組互相排斥的亞型抗原決定簇d/y,w/r血清型分布特點(diǎn)：歐美各國(guó)以adw為主，中東以ayw為主我國(guó)漢族主要是adr，少數(shù)民族多為ayw：C基因 編碼HBV核心抗原（HBcAg）：顆粒性抗原，很強(qiáng)抗原性。不易在血中檢出 。PreC基因 編碼HBeAg前體加工后成為成熟HBeAg（分泌型蛋白，較強(qiáng)抗原性，游離存在于血中）：編碼RNA依賴性DNA聚合酶** 具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性： 編碼X蛋白 （HBxAg），反式激活作用，與HBV引起肝癌有關(guān)（三）HBV動(dòng)物模型與細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物模型 黑猩猩、HBV轉(zhuǎn)基因小鼠，土撥鼠、地松鼠、鴨細(xì)胞培養(yǎng) 尚未成功HBV DNA轉(zhuǎn)染系統(tǒng)(四) HBV抵抗力對(duì)低溫, 干燥, 紫外線均有耐受性, 對(duì)乙醇, 酚, 乙醚有抵抗性。高壓滅菌、100℃ 10分鐘、環(huán)氧乙烷、%過(guò)氧乙酸、 3%漂白粉液可滅活之。二、HBV致病性與免疫特點(diǎn) 傳染源 ：乙型肝炎患者和無(wú)癥狀HBV攜帶者傳播途徑： 血液、血制品傳播 母嬰垂直傳播 性接觸傳播HBV感染臨床表現(xiàn)呈多樣性： 無(wú)癥狀：病毒攜帶者 急性肝炎；慢性肝炎；重癥肝炎；肝硬化 肝細(xì)胞癌 HBV致病機(jī)制 肝細(xì)胞的直接損害作用免疫病理?yè)p害三、HBV微生物學(xué)檢查法血清學(xué)方法 ELISA進(jìn)行HBV抗原抗體系統(tǒng)檢測(cè)，俗稱：“兩對(duì)半”檢測(cè) HBsAg: HBV感染的重要指標(biāo) antiHBs：免疫狀態(tài) HBeAg: HBV復(fù)制,傳染性高 antiHBe：HBV減少或消失 antiHBc：提示有HBV復(fù)制 HBV抗原抗體系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果的臨床分析（見(jiàn)書）HBV微生物學(xué)檢查法血清HBV DNA檢測(cè)：核酸雜交、PCR 、斑點(diǎn)雜交可檢測(cè)或定量檢測(cè)HBV DNA 血清DNA多聚酶檢測(cè) 四、HBV感染的防治原則(一)預(yù)防加強(qiáng)對(duì)獻(xiàn)血員的篩選加強(qiáng)對(duì)血液及制品的檢測(cè)和管理防止醫(yī)療器械導(dǎo)致的醫(yī)源性感染HBV感染的特異性預(yù)防 1）主動(dòng)免疫:乙肝血源疫苗乙肝基因工程疫苗（酵母菌表達(dá)）乙肝HBsAg多肽疫苗或HBV 核酸疫苗（研制中）2）被動(dòng)免疫:注射含高效價(jià)抗HBs的人血清免疫球蛋白（HBIG）緊急預(yù)防，效果較好（二）抗HBV治療尚無(wú)特效療法拉米夫定(lamivudine)、干擾素 (interferon)、中草藥等，對(duì)部分病例有一定療效。第三節(jié) 丙型肝炎病毒 一、HCV生物學(xué)性狀（一）形態(tài)與結(jié)構(gòu)球形顆粒 (spherical particle )有包膜病毒（enveloped virus）核心含病毒基因組 （二）HCV基因組結(jié)構(gòu)與功能單正鏈RNA病毒， ，只有一個(gè)ORF。（三）HCV基因變異與分型變異率高,貫穿整個(gè)基因組二、HCV致病性與免疫特點(diǎn)（一）傳染源與傳播途徑傳染源：丙型肝炎患者和無(wú)癥狀HCV攜帶者傳播途徑 ：（1）血液、血制品傳播*（2）母嬰垂直傳播（3）性接觸傳播HCV感染臨床表現(xiàn)呈多樣性：HCV感染免疫特點(diǎn)：體液免疫— 依次出現(xiàn) IgM 和 IgG型抗體細(xì)胞免疫— 細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）三、微生物學(xué)檢查法四、HCV感染防治原則第四節(jié) 丁型肝炎病毒 一、HDV生物學(xué)特性HDV呈球形，直徑35—37 nm基因組為單負(fù)鏈環(huán)狀RNA()是已知?jiǎng)游锊《局凶钚〉幕蚪M 只編碼一種HDV Ag(核衣殼蛋白)HDV是缺陷病毒(defective virus), 需HBV或 其他嗜肝DNA病毒輔助才能復(fù)制。乙肝病毒的衛(wèi)星病毒。HDV外衣殼由HBsAg構(gòu)成，保護(hù)HDV RNA，對(duì)HDV的致病起重要作用。二、HDV致病性與免疫性 1） HDV傳染源、傳播途徑—與HBV相同 2） 我國(guó)各地乙肝病人中HDV感染率為0%10% 3 ） HDV感染的兩種方式聯(lián)合感染（coinfection）：同時(shí)發(fā)生急性乙肝 和急性丁肝重迭感染（superinfection）:慢性HBsAg攜帶者發(fā)生急性HDV感染 4）HDAg刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗HDV，依次出現(xiàn) IgM和IgG型抗體 第五節(jié) 戊型肝炎病毒 一、HEV生物學(xué)特性（一）形態(tài)結(jié)構(gòu)Spherical particle,直徑3234 nm，無(wú)包膜，表面有環(huán)行山樣凹陷，形似杯狀，歸屬杯狀病毒科（二）HEV動(dòng)物模型與細(xì)胞培養(yǎng) 黑猩猩、獼猴、食蟹猴 組織細(xì)胞培養(yǎng)尚在研究