免疫組織化學檢驗技術(shù)-資料下載頁
2025-08-05 03:17本頁面
【正文】 和素 生物素方法（ LSAB）。 ? LSAB法的特點 :① 特異性強；②分子量小，穿透力強，放大效應(yīng)遠超 ABC法，故其敏感性更強；③等電點中性更適合組織，可明顯減少非特異性染色，低背景著色使特異性著色更清晰；④操作時間縮短，更簡便。 人民衛(wèi)生出版社 人民衛(wèi)生出版社 四、凝集素法 ? 一種凝集素具有專一性結(jié)合某種特異性糖基的能力，同時所有生物膜都含有一定量的糖類，后者主要以糖蛋白和糖脂的形式存在。因此，凝集素可作為一種探針來研究細胞膜上特定的糖基。另一方面，凝集素具有多價結(jié)合能力，能與熒光素、生物素、酶、膠體金和鐵蛋白等示蹤物結(jié)合，從而在光鏡或電鏡水平顯示其結(jié)合部位。 人民衛(wèi)生出版社 ? 一般認為細胞膜上特定的糖基可用以區(qū)別細胞的類型并反映細胞在分化、成熟和細胞病變中的變化。 ? 標記了相應(yīng)示蹤物的凝集素可用來： ①作為細胞分化和成熟的標記 ②作為細胞特殊類型的標記 ③腫瘤細胞伴有細胞膜的改變，細胞膜上的糖基也會產(chǎn)生相應(yīng)的變化，也可用凝集素檢測出腫瘤細胞。 人民衛(wèi)生出版社 ? 常用下列染色法： ①直接法 — 標記物直接標記在凝集素上，使之直接與切片中的相應(yīng)糖蛋白或糖脂相結(jié)合 ②間接法 — 將凝集素直接與切片中的相應(yīng)糖基結(jié)合，而將標記物結(jié)合在抗凝集素抗體上 ③糖 — 凝集素 — 糖法 — 本法是利用過量的凝集素與組織切片中特定的糖基相結(jié)合，經(jīng)沖洗后，凝集素上還存在未被占用的結(jié)合部位，未結(jié)合部位與有過氧化物酶標記的特異性糖基相結(jié)合，形成一個 “ 三明治樣 ” 的糖 — 凝集素 — 糖的結(jié)合物。 人民衛(wèi)生出版社 第五節(jié) 其他免疫組織化學檢驗技術(shù) 一、金免疫組織化學技術(shù) ? 免疫膠體金技術(shù)是以膠體金作為標記物。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白，對蛋白的生物學活性沒有明顯的影響。因此，用膠體金標記一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子 (如 SPA)等作為探針，能對組織或細胞內(nèi)的抗原進行定性、定位或定量研究。 人民衛(wèi)生出版社 （一）免疫金（銀）光鏡染色技術(shù) 基本原理是通過免疫反應(yīng)沉積在抗原位置的膠體金顆粒起著一種催化劑作用，用對苯二酚還原劑將銀離子 (Ag＋ )還原成銀原子(Ag)，被還原的銀原子圍繞金顆粒形成一個“ 銀殼 ” ， “ 銀殼 ” 一旦形成，本身亦具有催化作用，從而使更多銀離子還原并促使“ 銀殼 ” 不斷變大，最終使抗原位置得到更清楚的放大，在光鏡下就可觀察到被放大的抗原位置呈現(xiàn)黑色或黑褐色。 人民衛(wèi)生出版社 人民衛(wèi)生出版社 （二）免疫金電鏡染色技術(shù) 膠體金與鎳網(wǎng)上待檢標本的相應(yīng)蛋白質(zhì)發(fā)生結(jié)合，由于膠體金具有高電子密度，故金標蛋白結(jié)合處，電鏡下可見黑褐色顆粒，從而可對細胞膜上或細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)進行定性與定位分析。 人民衛(wèi)生出版社 二、酶標記免疫電鏡技術(shù) 酶標記免疫電鏡技術(shù)是用酶標抗體與組織或細胞抗原發(fā)生特異性結(jié)合后，加酶底物顯色，在電鏡下觀察顯色反應(yīng)的強度。它是將電鏡的高分辨力與酶免疫技術(shù)的特異性結(jié)合，在亞細胞和超微結(jié)構(gòu)水平上對抗原物質(zhì)進行定性分析的一種高度精確、靈敏的方法。 人民衛(wèi)生出版社 三、免疫膠體鐵細胞組織化學技術(shù) 膠體鐵是一種陽離子膠體，將抗體分子標記上膠體鐵，通過普魯藍反應(yīng)呈色，膠體鐵顆粒有一定大小和電子密度，可用在電鏡和光鏡水平的抗原（抗體）的定位研究。
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