標(biāo)準(zhǔn)菌種確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程-資料下載頁
2025-07-15 02:48本頁面
【正文】 胺瓊脂培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng)18～24h后，觀察結(jié)果：呈扁平、無定形、周邊擴(kuò)散、表面濕潤，灰白色，周圍時(shí)有藍(lán)綠色素?cái)U(kuò)散。 革蘭染色、鏡檢 革蘭染色（） 鏡檢結(jié)果：銅綠假單胞菌為革蘭陰性、無芽孢桿菌。單個，成對或成短鏈排列。 氧化酶試驗(yàn)取潔凈濾紙片置于平皿內(nèi)，用無菌玻璃棒取斜面培養(yǎng)物涂于濾紙片上，滴加新配制的1%二鹽酸二甲基對苯二胺試液，在30秒內(nèi)若培養(yǎng)物呈粉紅色并逐漸變?yōu)樽霞t色為氧化酶試驗(yàn)陽性，否則為陰性。若斜面培養(yǎng)物為非革蘭陰性無芽孢桿菌或氧化酶試驗(yàn)陰性，均判供試品未檢出銅綠假單孢菌。否則，應(yīng)進(jìn)行綠儂菌素試驗(yàn)。(Pyocyanin)試驗(yàn) 取斜面培養(yǎng)物接種于PDP瓊脂培養(yǎng)基斜面上，培養(yǎng)24小時(shí)，加三氯甲烷3~5ml至培養(yǎng)管中，攪碎培養(yǎng)基并充分振搖。靜置片刻，將三氯甲烷相移至另一試管中，加入1mol/L鹽酸試液約1ml，振搖后，靜置片刻，觀察。若鹽酸溶液呈粉紅色，為綠儂菌素試驗(yàn)陽性，否則為陰性。同時(shí)用未接種的PDF瓊脂培養(yǎng)基斜面同法做陰性對照，陰性對照試驗(yàn)應(yīng)呈陰性。若上述疑似菌為革蘭陰性桿菌、氧化酶試驗(yàn)陽性及綠儂菌素試驗(yàn)陽性，判斷供試品檢出銅綠假單胞菌。上述疑似菌為革蘭陰性桿菌、氧化酶試驗(yàn)陽性及綠儂菌素試驗(yàn)陰性，應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行適宜的鑒定試驗(yàn)，確認(rèn)是否為銅綠假單胞菌。 生孢梭菌的確認(rèn) 取生孢梭菌新鮮培養(yǎng)物2份，其中1份置80℃保溫10分鐘后迅速冷卻。上述2份供試液直接后處理后分別接種至100ml的梭菌增菌培養(yǎng)基中。置厭氧條件下培養(yǎng)48小時(shí)。，分別涂抹接種于含慶大霉素的哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基平板上，置厭氧條件下培養(yǎng)48~72小時(shí)。若平板上有菌落生長，應(yīng)選2~3個菌落分別進(jìn)行革蘭染色和過氧化氫酶試驗(yàn)。 革蘭染色（） 過氧化氫酶試驗(yàn)取上述平板上的菌落，置潔凈玻片上，滴加3%過氧化氫試液，若菌落表面有氣泡產(chǎn)生，為過氧化氫酶試驗(yàn)陽性，否則為陰性。若上述可疑菌落為革蘭陽性梭菌，有或無卵圓形或球形的芽孢，過氧化氫酶試驗(yàn)陰性，判斷供試品檢出梭菌，否則判供試品未檢出梭菌。第 7 頁， 共 7
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