【正文】 宮頸，在達(dá)到子宮體時(shí)注射。因精液冷凍方法不同，有冷凍顆粒、細(xì)管等，輸精器也不一樣，但輸精基本要求都相同。在輸精管通過(guò)陰門(mén)時(shí)要注意保持其操作的干凈，若輸精管沒(méi)有套管保護(hù)，在伸入陰道時(shí)，要用手掌包住輸精管頭慢慢導(dǎo)入子宮頸口，然后握住輸精管，將它推到子宮體，再將精液注入子宮。 (1)精液解凍 用顆粒精液時(shí)，先在小試管內(nèi)加l毫升解凍液，使溫度上升到38—40℃，然后將顆粒精液放到試管內(nèi)，不停地?fù)u動(dòng)，使之融化，即可使用。細(xì)管凍精，可將細(xì)管放入40℃的水浴中解凍。以上2種凍精融化后都要做精子活力檢查，只有活力在0．4，精子很好地前進(jìn)運(yùn)動(dòng)時(shí)，才能使用。(2)解凍液 在使用顆粒精液時(shí)，用以下解凍液：①2．9％檸檬酸鈉液；②3％葡萄糖加1．4％檸檬酸鈉液；③復(fù)合解凍液：在100毫升蒸餾水中溶解檸檬酸鈉1．7克，蔗糖1．15克，磷酸二氫鉀0．235克，氨苯磺胺0．3克。這些解凍液都必須經(jīng)過(guò)滅菌。 (3)解凍后使用時(shí)間 精液解凍后宜立即輸精，此時(shí)受胎率可達(dá)75％一80％，存放半天受胎率會(huì)下降到60％以下，24 小時(shí)后降低到50％。使用解凍12小時(shí)以后的精液，胎兒的早期死亡率上升，大多數(shù)的死亡發(fā)生在受孕后90天之內(nèi)。故提倡使用新鮮的解凍精液。如果同時(shí)配種的牛多，最好是隨使用隨解凍。 (4)冷凍精液的提取無(wú)論何種形式保存的精液，從液氮罐提出時(shí)都應(yīng)迅速，取出必要數(shù)量后，應(yīng)立刻將其余的沉入液氮中，繼續(xù)保存，如果放回時(shí)聽(tīng)到尖鳴聲、霹雷聲、炸裂聲或看到明顯的液氮?dú)饣F(xiàn)象，則被放回的精液已受到嚴(yán)重?fù)p失，精子的活力會(huì)大大降低，甚至完全死亡。3．人工授精站的必要設(shè)備人工授精站必須有一套必要的設(shè)備，包括：(1)授精用器材 開(kāi)陰(腔)器、輸精器、陰道照明器等。(2)精液質(zhì)量檢查器具 600倍顯微鏡、保溫箱、載玻片、蓋玻片、細(xì)玻璃棒、血球計(jì)數(shù)器、100毫升小量杯。(3)精液保存用具 液氮罐、恒溫箱、蒸餾器、注射器等。(4)消毒設(shè)備 干燥箱、消毒鍋、酒精燈、電爐或適用于本地的爐子，以及棉花、紗布等。(5)一般的玻璃器皿 如大小試管、離心管、滴管、燒杯(100一500毫升)、大玻璃瓶(10000毫升)、漏斗。(6)其他用品 天平(1／100—1／1000)、藥品柜、洗滌架、 污物桶、剪刀、大小鑷子、漏斗架、膠皮管、各種瓶刷、搪瓷盆、濾紙等等；以及必要的化學(xué)試劑。4．適時(shí)輸精時(shí)期精子在母牛生殖道的正常壽命是12—24小時(shí)，而大多數(shù)母牛發(fā)情持續(xù)時(shí)間是18小時(shí)左右，排卵前后最有利于受孕，一般在發(fā)情結(jié)束后7—12小時(shí)，所以最佳的輸精時(shí)機(jī)是在接近排卵時(shí)輸精。但排卵需要通過(guò)直腸檢查才能判斷，一般情況是先觀察發(fā)情征象。在進(jìn)行人工授精時(shí)，對(duì)來(lái)站配種的母牛，不能牽來(lái)就配，而應(yīng)該讓其站在預(yù)候處，觀察一段時(shí)間，可以按以下表現(xiàn)確定輸精時(shí)間： (1)發(fā)情開(kāi)始的8小時(shí)為進(jìn)入發(fā)情旺期之前，征候是：哞叫比平常多，離群，靠著圍欄走，企圖跳到相鄰的牛群中去；企圖爬跨其他牛；尾巴在靠近外陰的部位濕潤(rùn)；外陰光滑腫脹，濕而且紅，分泌出清亮的粘液；嗅聞其他母牛的尾根；但不讓其他母牛爬跨；食欲減退。(2)發(fā)情旺期通常在發(fā)情第18小時(shí)，征候是：站立接受爬跨；愿爬跨其他母牛；陣叫頻繁，神經(jīng)過(guò)敏，易怒；拒食。發(fā)情旺期過(guò)后8l0小時(shí)為輸精適期。 (3)發(fā)情過(guò)后發(fā)情后的12小時(shí)，征候是：不讓其他母牛爬跨；企圖爬跨其他母牛；嗅聞其他母牛；食欲正常；外陰有亮粘液。這時(shí)可追配。在結(jié)束發(fā)情的第二天，可發(fā)現(xiàn)有稀薄血水排出，大多數(shù)母牛都有此征候；受孕母牛也有此征候，不應(yīng)視為異常。因此在錯(cuò)過(guò)輸精的情況下，應(yīng)在此后的l 6—20天留意母牛是否又發(fā)情。在適時(shí)輸精的情況下，過(guò)一周期仍未發(fā)情，此母牛即被列入未返情母牛。有很多母牛是在半夜開(kāi)始發(fā)情的，而清晨才被發(fā)現(xiàn)，因此觀察發(fā)情應(yīng)該在傍晚和黎明。在實(shí)際生產(chǎn)中，要早晚各觀察一次發(fā)情中的母牛，中午再行檢查，才能避免漏檢。對(duì)農(nóng)民送到人工授精站的母牛，到站后必須做直腸檢查，才能提高受胎率。從表l 5的統(tǒng)計(jì)可以看出輸精時(shí)間的重要性。實(shí)行每次發(fā)情兩次輸精，有較好的效果。若早晨發(fā)現(xiàn)母牛發(fā)情，當(dāng)天傍晚可做第一次輸精；若中午看到發(fā)情，可在第二天早晨輸精。再如有一頭牛下午發(fā)情。另一頭次日早晨發(fā)情，兩頭牛都可以在次日下午輸精。目前對(duì)精子和卵子在母牛生殖道內(nèi)能維持多長(zhǎng)時(shí)間的生命力還不完全清楚，已知大多數(shù)卵子從卵巢釋放后其生殖力只能維持幾小時(shí)，而精子卻能維持較長(zhǎng)時(shí)間，為l2—24小時(shí)。正確的輸精時(shí)間能保證雌雄生殖細(xì)胞在生殖力旺盛階段內(nèi)結(jié)合，賦予胎兒較強(qiáng)的生命力，對(duì)降低流產(chǎn)率有重要意義。生理功能正常的母牛，恰當(dāng)?shù)呐浞N時(shí)間，是在母牛發(fā)情結(jié)束或接近發(fā)情結(jié)束時(shí)。在自然交配的情況下，20—30頭母牛的獨(dú)群內(nèi)，交配時(shí)，母牛接受爬跨，母牛的受胎率比較高。在人工授精的情況下，于發(fā)情結(jié)束數(shù)小時(shí)前，采用卵巢觸摸，預(yù)計(jì)排卵時(shí)間的辦法，可以比較準(zhǔn)確地掌握有效受孕機(jī)會(huì)，進(jìn)行人工配種。一般按精子在母牛子宮內(nèi)存活12小時(shí)估計(jì)，受孕率就比較高。我國(guó)推廣深部輸精技術(shù)，在觸摸到卵巢上卵泡已處于變軟階段或剛排過(guò)卵的階段時(shí)輸精，可取得較高的妊娠比率。如果卵泡發(fā)育處于開(kāi)始階段，還比較堅(jiān)硬時(shí)就輸精，卵子尚未成熟，而精子在母牛子宮中滯留長(zhǎng)達(dá)25—30小時(shí)，活力開(kāi)始衰退，受胎率不可能很高。5．產(chǎn)后再配母牛產(chǎn)后什么時(shí)候適宜于交配或輸精?長(zhǎng)期以來(lái)都是到60天后才進(jìn)行觀察。據(jù)近年來(lái)研究，并不需要等待這么長(zhǎng)時(shí)間，分娩后35—40天第一次發(fā)情時(shí)就可交配或輸精，能提前20天。但由于產(chǎn)后第一次發(fā)情容易被忽視，估計(jì)平均耽誤5天，因而一般可縮短產(chǎn)犢間隔15天。產(chǎn)后空懷天數(shù)不同，受孕的難易有別。受孕時(shí)間與配種或輸精的次數(shù)有如下關(guān)系：母牛產(chǎn)后30天受孕需輸精2．5次，40天需2．25次，50天需2．05次，60天需1．85次，產(chǎn)后75天受孕，平均只要輸精1．75次。而縮短產(chǎn)犢間隔降低的成本，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)輸精次數(shù)多增加的成本。在提前配種的實(shí)驗(yàn)中，沒(méi)有出現(xiàn)胚胎死亡、流產(chǎn)、子宮炎、胎盤(pán)滯留或初生犢軟 弱等問(wèn)題。因此，縮短產(chǎn)犢間隔，在肉牛生產(chǎn)體系中是可取的。三、供體羊的配種配種方法有兩種：人工授精與自然交配自然交配：也叫本交，是公、母羊直接進(jìn)行交配。自然交配又可分為自由交配和輔助交配兩種。（1）自由交配。就是在配種期將公羊與母羊混群飼養(yǎng)放牧，一旦有母羊發(fā)情，公羊隨時(shí)就可自由交配。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是省工省事，若公母羊比例適當(dāng)，也能獲得較高的受胎率。缺點(diǎn)：無(wú)法控制產(chǎn)羔時(shí)間，容易出現(xiàn)早配和近親交配；公羊體力消耗過(guò)多，影響健康；公羊爭(zhēng)風(fēng)抵架，造成羊群安全或傷亡事故；無(wú)法了解羊的血緣關(guān)系，不能進(jìn)行計(jì)劃選配等。為了克服自由交配的弊端，多采用人工控制的方法進(jìn)行集中配種。方法是：在非配種季節(jié)將適量(1：10的公母比例)的公羊放入羊群一個(gè)月，使其自由交配。每隔2—3年，群與群之間或村與村之間進(jìn)行有計(jì)劃的調(diào)換公羊，以更新血液。（2）輔助交配。是將公、母羊分群飼養(yǎng)放牧，在配種期用試情公羊進(jìn)行試情，發(fā)現(xiàn)發(fā)情母羊，拉出與指定的公羊進(jìn)行交配。這樣可提高種公羊的利用率，而且可有計(jì)劃地進(jìn)行選配，提高后代質(zhì)量。家庭小規(guī)模的羊群可不用試情公羊，注意觀察母羊，發(fā)現(xiàn)發(fā)情母羊，及時(shí)牽公羊交配，以免漏配。交配時(shí)間，一般掌握“老配早，少配晚，不老不少配中間”。早晨發(fā)情的母羊，傍晚配種；下午或傍晚開(kāi)始發(fā)情的母羊，第二天早晨交配。為了保證受胎，最好采用重復(fù)配，即第一次交配后，間隔12小時(shí)再配一次。人工授精：人工授精是用人工方法采取公羊精液，經(jīng)過(guò)檢查和處理后，輸入發(fā)情母羊生殖道，使其受胎的一種配種方法。人工授精可以提高優(yōu)良種公羊的利用率，一只公羊可負(fù)擔(dān)300—500只母羊的配種任務(wù)。本交的方法，只能負(fù)擔(dān)25—30只母羊的配種任務(wù)。由于配種公母羊羊的人工授精步驟：（1）將羊倒立，固定；（2）用生理藥棉擦拭羊的外陰；（3）用紅霉素軟膏涂抹羊的開(kāi)膣器（用前器械已高溫消毒）；（4）開(kāi)膣器按照同陰門(mén)順序（縱向）插入羊的陰道內(nèi)，橫方向打開(kāi)陰道；（5）用光源查找到羊的子宮頸外口（粉紅色，向上突出的，中間有孔的即是）；（6）精液的準(zhǔn)備：先采好精，檢查活力，并且稀釋液（1液，無(wú)甘油的部分）按照1：1稀釋，稀釋后再檢查活力。（7）—2cm之間，—。（8）若某一只羊?qū)嵲谑请y以按要求操作完成，可用公羊本交；（9）要求配種三次，特別注意配種的第二次，每次間隔12個(gè)小時(shí)，有的要求4—6小時(shí)配種一次，受胎率很高，幾乎沒(méi)有未受精出現(xiàn)；（10）每只公羊在采精之前一定要進(jìn)行調(diào)試，并檢查活力，在本交時(shí),人也應(yīng)該在第二次使用人工授精時(shí)檢查精液的質(zhì)量。（11）每次配種后，母羊倒立10分鐘，確保精液在子宮頸停留的時(shí)間長(zhǎng)久。四、受體羊注意事項(xiàng)：受體羊全部采用鮮胚移植，且與供體羊進(jìn)行同期化處理，供受體發(fā)情時(shí)間差不大于1218小時(shí)。注意對(duì)受體羊進(jìn)行觀察，以站立接受爬跨為發(fā)情開(kāi)始，并記錄這個(gè)時(shí)間（做好發(fā)情觀察記錄）。手術(shù)移植時(shí)應(yīng)根據(jù)黃體情況及胚胎量移植12枚胚胎，移在有黃體側(cè)輸卵管中。移植后應(yīng)檢查移植器中是否有胚胎遺留。手術(shù)應(yīng)操作迅速、到位。受體移植前24小時(shí)禁喂，只能飲水，使之空腹以便手術(shù)移植，移后觀察24時(shí)間后放群。PG注射在供體注射第四次FSH時(shí)一次注射即可。