【正文】 后不萌發(fā)（圖 1A）。從表 1 中可以看出，單獨用升汞消毒，隨著消毒 時間的增長，對胚尖活力的影響不大，污染率降低，但整體來說消毒不徹底。繼升汞之后，使用次氯酸鈉二次消毒，隨著其濃度的增加，消毒種子的胚尖活力大大降低，當(dāng)次氯酸鈉濃度為 8%時，其胚尖活力數(shù)最低。因此，次氯酸鈉對胚尖的傷害與其濃度有正相關(guān)性。升汞配合次氯酸鈉消毒時，以%的升汞消毒 10 min 配合 5%的次氯酸鈉消毒 5 min 效果最佳，其污染率為 0，有活力的胚尖數(shù)最多。 表 2 升汞和次氯酸鈉消毒的效果 基因型 Genotype 消毒種子數(shù) Total seeds 污染數(shù) Pollutional seeds 污染率 Pollution Rate (%) 有活力胚尖數(shù) Viable Embryonic tips K0682 K0682 142 0 137 青酥二號 Qingsuerhao 76 1 71 滬寧 9610 Huning9610 98 2 94 交大 05133 Jiaoda05133 128 0 123 北 8731 Bei8731 162 0 153 交大 0289 Jiaoda0289 97 2 94 南農(nóng) 31 Nannong31 80 0 76 北豆 21 Beidou21 95 0 91 黑遼 15 Heiliao15 98 3 82 挑選飽滿、無病菌、種皮無破損的各種不同品種的菜用大豆種子，在超凈工作臺上用酒精浸泡 1min，再用 %HgCl2 浸泡 10 min，用無菌水反復(fù)洗 3~5 次，然后用 5%的 NaClO 浸泡 5 min，最后用無菌水反復(fù)洗 4~6 次，浸泡 15 ~ 18 h 剝?nèi)ヅ呒庾鳛槠鹗纪?植體。接種 2 d后統(tǒng)計不同品種胚尖的污染情況和胚尖活力數(shù)，以研究升汞配合次氯酸鈉消毒對各不同品種菜用大豆消毒的效果。從表 2 中可以看出來，在 9 個不同菜用大豆品種試驗后，其中污染率最低為 0%，且對胚尖的傷害較小，能保證其有效活力胚尖數(shù)。由此可見， %HgCl2 消毒 10 min 配合5%的 NaClO 消毒 5 min 的方法適應(yīng)于不同菜用大豆品種，其消毒方法操作簡單易行，消毒效果好。 表 3 預(yù)培養(yǎng)天數(shù)對菜用大豆胚尖分化性能的影響 Table 3 Effect of preculture days on capacity of differentiation of embryonic tips in vegetabletype soybean 為了確定預(yù)培養(yǎng)時間對菜用大豆胚尖分化性能的影響，將 9 個不同品種的菜用大豆消毒后剝?nèi)∨呒?，接種在 MSB5 + mgL1 6BA 培養(yǎng)基上，分別預(yù)培養(yǎng) 4 d，然后轉(zhuǎn)接到芽伸長培養(yǎng)基， 10 d 后統(tǒng)計其不定芽誘導(dǎo)率。從表3 可以看出，不同預(yù)培養(yǎng)天數(shù)對胚尖的分化性能影響差異性不大，當(dāng) 預(yù)培養(yǎng)時間基因型 genotype 不定芽誘導(dǎo)率 Rate of adventitious bud induced(%) 1 2 3 4 K0682 K0682 青酥二號 Qingsuerhao 滬寧 9610 Huning9610 交大 05133 Jiaoda05133 北 8731 Bei8731 交大 0289 Jiaoda0289 南農(nóng) 31 Nannong31 北豆 21 Beidou21 黑遼 15 Heiliao15 為 1 d 時，各供試品種的萌發(fā)率均處于最低水平。預(yù)培養(yǎng)時間為 4 d 時菜用大豆各供試品種的不定芽誘導(dǎo)率均處于最高水平，其中 K0682 最高（ %），黑遼 15 最低（ %）。預(yù)培養(yǎng) 3 ~ 4 d 時其誘導(dǎo)率略高于 2 d 時，但在后續(xù)的繼代培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)其胚尖基部愈傷化程度較 2 d 的高，不定芽伸長也較慢。因此，2 d 為胚尖最佳預(yù)培養(yǎng)天數(shù)。 表 4 6BA 濃度對菜用大豆分化性能的影響 Table 4 Effect of 6BA concentration on capacity of differentiation of embryonic tips in vegetabletype soybean 在基本培養(yǎng)基中分別添加濃度為 0、 7 mgL16 個 6BA 濃度處理，預(yù)培養(yǎng) 2 d 后轉(zhuǎn)接到伸長培養(yǎng)基， 10 d 后統(tǒng)計其不定芽誘導(dǎo)率率，以確定最適合誘導(dǎo)菜用大豆胚尖不定芽的 6BA 濃度。 從表 4 可以看出， 6BA 對胚尖不定芽誘導(dǎo)有促進作用，不添加 6BA 時各供試品種的不定芽誘導(dǎo)率均較低于 11%。當(dāng)添加 1 mgL1 的 6BA 時，各基因型菜用大豆的不定芽誘導(dǎo)率顯著提高，其中交大 05133 最為明顯，從 %提高到 %。 K068青酥二號、滬寧 96交大 0513交大 028南農(nóng) 31基因型 Genotype 不定芽誘導(dǎo)率 Rate of adventitious bud induced(%) 0 K0682 K0682 青酥二號 Qingsuerhao 滬寧 9610 Huning9610 交大 05133 Jiaoda05133 北 8731 Bei8731 交大 0289 Jiaoda0289 南農(nóng) 31 Nannong31 北豆 21 Beidou21 黑遼 15 Heiliao15 以及黑遼 15 供試品種在 6BA 濃度為 mgL1 的條件下，其誘導(dǎo)率 達最高；當(dāng) 6BA 濃度高于或者低于 mgL1 時，其誘導(dǎo)率又呈下降趨勢。而北 873北豆 21 和黑遼 15 對高 6BA 條件較為敏感，它們在 6BA 為 mgL1 時，不定芽誘導(dǎo)率最高，隨著 6BA 濃度增加，其胚尖基部和頂端愈傷化程度越嚴重，當(dāng) 6BA 濃度達到 mgL1 時，其形成致密的綠色組織，不定芽誘導(dǎo)率極低。而 K0682 對 6BA 敏感性較弱，當(dāng) 6BA 濃度為 mgL1 時，其基部愈傷化程度低，且仍有大量不定芽著生，但是很難伸長。從繼代培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)經(jīng)不添加任何激素的培養(yǎng)基誘導(dǎo)的 胚尖均有褐化現(xiàn)象，并慢慢死亡；經(jīng) mgL1 6BA 誘導(dǎo)的胚尖，基部愈傷化程度較高，頂端形成致密的綠色組織。因此， 6BA 濃度對胚尖的分化性能有影響， mgL1 6BA 濃度適宜多數(shù)品種菜用大豆胚尖的分化。 不同激素組合對菜用大豆胚尖不定芽 數(shù)量 和長 度 的影響 表 4 不同激素組合對菜用大豆胚尖不定芽 數(shù)量 和 長度 的影響 Table 4 Effect of different bination of hormones on the number and length of adventitious buds from embryonic tips in vegetabletype soybean 為了提高菜用大豆的再生頻率，獲得更多健壯的再生植株。組設(shè)置不同激素組合用于胚尖不定芽的伸長培養(yǎng)， 15 d 后統(tǒng)計不定芽的平均個數(shù)和伸長的平均長度。從表 4 看出，添加激素對胚尖不定芽的發(fā)生有明顯的促進作用，不添加激素的培養(yǎng)基培育的 4 個不同基因型的菜用大豆不定芽發(fā)生頻率極低，即使有少量不定芽形成，最終都因胚尖基部褐化而導(dǎo)致不定芽死亡。在 6BA + NAA 和 6BA + IBA、 NAA 大類激素組合中， 6BA + NAA 類組合有利于菜用大豆胚尖不定芽的不同激 素組合 Combination of hormones 平均芽數(shù) Mean adventitious buds per explant 平均芽長 Mean length of adventitious buds (cm) 滬寧9610 Huning 9610 交大05133 Jiaoda 05133 交大0289 Jiaoda 0289 青酥二號 Qingsuerhao 滬寧9610 Huning 9610 交大05133 Jiaoda 05133 交大0289 Jiaoda 0289 青酥二號 Qingsuerhao A 0 0 0 0 B C D E F 發(fā)生，并且隨著濃度配比的增加，不定芽的發(fā)生個數(shù)增多。然而，隨著濃度配比的增加，不定芽的伸長漸顯困難，且胚尖基部愈傷化程度增高。在培養(yǎng)基中添加6BA + IBA 或者僅用 NAA，其不定芽的發(fā)生個數(shù)明顯少于添加 6BA + NAA 發(fā)生的不定芽個數(shù)。不過，此類組合有利于不定芽的伸長， 20 d 后即可用來生根。各品種在不同組合中不定芽個數(shù)及其伸長存在一定差異，但整體來說， 4 個品種都是在 D 處理中不定芽平均個數(shù)最 多，除了滬寧 9610 品種的不定芽是在 E 處理中伸長最快以外，其余 3 個品種均是在 F 處理中伸長最快。 表 5 不同基因型在相同培養(yǎng)基和培養(yǎng)方式情況下的生長情況 基因型Genotype 接種數(shù) 出芽外植體數(shù) 分化頻率 平均芽數(shù) 平均芽長 8 天 15 天 20 天 8 天 15 天 20 天 K0682 81 72 92% 3 交大 05133 13 12 91% 交大 0289 16 14 88% 2 北 8731 69 51 74% 南農(nóng) 31 64 54 84% 黑遼 15 54 20 37% 0 0 0 0 0 0 北豆 21 69 48 70% 圖 生根前的一系列預(yù)處理 優(yōu)化 表 6 不同 IBA 濃度對 K0682 生根的影響 Table 6 effects of different concentration of IBA on root of K0682 IBA 濃度 Concentration of IBA/ mgL1 生根率 Percentage of rooting/% 移栽成活率Survival rate of transplanting/% 根系生長狀況 Grew condition 0 97 100 有主根，須根較多，生長快 11 42 有主根，須根少，生長慢 0 0 傷口處愈傷化 0 0 同上 0 0 同上 0 0 同上 為了研究適合菜用大豆胚尖不定芽生根的 配方，分別在 1/2MSB5 基本培養(yǎng)基中添加 0、 、 、 、 、 mgL1 的 IBA，將 K0682 胚尖中伸長至3~5cm 的不定芽切取接種到上述培養(yǎng)基中，統(tǒng)計生根率，并記錄其生根情況。待其根系生長健壯后移栽到滅菌的蛭石：珍珠巖：黑土為 2:1:1 的基質(zhì)中，放在溫室中培養(yǎng)， 15d 后統(tǒng)計其移栽成活率。從表 6 可以看出，在 1/2MSB5 培養(yǎng)基中生根率最高。其接種后 5~8d 可生根，主根發(fā)達，須根多，生長速度快，移栽成活率高達 100%。在添加 mgL1IBA 的培養(yǎng)基中生根率很低，且根系不發(fā) 達，生長慢，移栽后出現(xiàn)爛根現(xiàn)象，移栽生活率低。當(dāng) IBA 濃度增加到 mgL1及以上其傷口處出現(xiàn)愈傷組織，且 IBA 濃度越高，其愈傷化程度越高，沒有生根。在高于 mgL1IBA 的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時間的不定芽再轉(zhuǎn)接到 1/2MSB5中，部分可以生根，但是根系生長不如直接在 1/2MSB5 中培養(yǎng)的生長快。由此可見，用不添加 IBA 激素的 1/2MSB5 培養(yǎng)基有利于大豆胚尖不定芽的生根，且其根系生長健壯，保證了移栽成活率。 表 7 生根培養(yǎng)基在不同菜用大豆胚尖使用效果 基因型 Genotype 芽數(shù) Total buds 生根芽數(shù) No. of rooting 生根 Percentage of rooting /% 移栽成活率 Survival rate of transplanting/% K0682 38 37 100 北 8731 25 19 交大 0289 18 15 100 交大 05133 23 21 100 通過對 K0682 胚尖的不定芽進行生根試驗，將得到的適合 K0682 的培養(yǎng)基用于交大 0513交大 0289 和北 8731 胚尖誘導(dǎo)的不定芽的生根。從表 7 中可以看出， 1/2MSB5 培養(yǎng)基同樣能誘導(dǎo)交大 05133 等菜用大豆不定芽的生根，其生根率都在 75%以上，且移栽成活率高，除了北 8731 成活率只有 %以外，其它基因型的菜用大豆全部成活。從這個試驗可以得出， 1/2MSB5 培養(yǎng)基能誘導(dǎo)菜用大