[工學(xué)]色譜測定法-資料下載頁
2025-10-04 19:55本頁面
【正文】 檢測波長： 280nm。 ? 樣品分析：取供試品溶液進樣 5μ l，記錄色譜圖，得出積分面積，純度應(yīng)大于 95%。 HPLC應(yīng)用實例 干擾素 HPLC純度測定 ? 取本品 3支 ,每支加注射用水適量溶解使?jié)舛燃s為 1mg/ml，充分混合后標(biāo)準(zhǔn)品及供試品按下法各進樣 2次，重復(fù)進樣峰面積相對偏差應(yīng)小于 %。求得平均含量，應(yīng)符合規(guī)定；若不符合規(guī)定，另取 6支復(fù)試，應(yīng)符合規(guī)定。含量應(yīng)為標(biāo)示量的 %，高分子含量應(yīng)不超過 %。 生長激素含量及高分子蛋白測定 1. 儀器 HPLC裝置 色譜柱 ： TSK G2021SWxL 300mm 2. 溶液的配制： %W/V碳酸氫銨， 脫 氣、 m濾膜過濾。 3. 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：用標(biāo)準(zhǔn)品 (中檢所購買 ) 一支， %W/V碳酸氫銨配成 1mg/ml。 4. 樣品分析 色譜條件 流動相： %W/V碳酸氫銨 流速： ml/min 柱溫：室溫 檢測波長： 214nm 進樣量： 20μ l 計算： 取標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試品溶液各 20μ l進樣，記錄色譜圖，測量標(biāo)準(zhǔn)品和供試品所測成分的峰面積，計算。 供試品峰面積 標(biāo)準(zhǔn)品濃度 稀釋倍數(shù) 樣品含量百分比 = 100% 標(biāo)準(zhǔn)品峰面積 樣品標(biāo)示含量 高分子蛋白峰面積 高分子蛋白含量 = 100% 總峰面積 檢測標(biāo)準(zhǔn)：總相關(guān)蛋白峰面積不超過總峰面積的 %。檢驗操作如下： ： HPLC裝置 色譜柱 C4 ： Tris緩沖液 ():Tris ，加水 800ml溶解，濃鹽酸調(diào) pH至 后定容至 1000ml。 流動相： A液： Tris緩沖液()，經(jīng) m膜過濾、脫氣； B液：正丙醇（色譜純），脫氣。 生長激素相關(guān)蛋白測定 洗柱液：正丙醇 200ml，加水至 500ml，混勻脫氣。 3. 標(biāo)準(zhǔn)溶液準(zhǔn)備 ：重組人生長激 素標(biāo)準(zhǔn)品以 Tris緩沖液配成 溶液，為溶液 1，取溶液 1加入新鮮過氧化 氫 (30%)使其最終濃度為 %(v/v)， 4℃ 放置 5小時后，每毫升加 L甲硫氨 酸，即得。 對照品溶液： 取溶液 1，以 Tris緩沖液稀釋成 品溶液。上述兩種溶液在 28℃ 穩(wěn)定 24小時。 ： 取供試品，以 Tris緩沖液稀釋成 1mg/ml。 5 樣品分析 色譜條件： 色譜柱： C4柱 ,25cm . 進樣量： 20μ l 流速： 檢測波長： 220nm 柱溫： 45℃ 流動相： :正丙醇=71:29 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗： 進系統(tǒng)適應(yīng)性溶 液，調(diào)節(jié)流動相中正丙醇的比例，確定合 適的主峰保留時間，分離度 R應(yīng)大于 。 ? 相關(guān)蛋白峰面積 相關(guān)蛋白含量 = 100% 總峰面積
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