【導(dǎo)讀】規(guī)范規(guī)范臨床標(biāo)本的采集，減少實(shí)驗(yàn)室前的差錯(cuò)影響因素，避免醫(yī)療缺陷發(fā)生。為協(xié)助臨床診斷和治療而進(jìn)行的臨床微生物標(biāo)本的采集。包括血液，骨髓，下呼吸道標(biāo)。本，尿，糞便，化膿和創(chuàng)傷標(biāo)本，穿刺液，生殖道標(biāo)本，燒傷標(biāo)本，。指導(dǎo)臨床科室正確采集標(biāo)本，提高實(shí)驗(yàn)室的準(zhǔn)確性。惡性腫瘤、愛滋病、呼吸道感染或呼吸衰竭、長期輸液或?qū)Ч芙槿爰膊?、血液透析患者。一般情況下應(yīng)在病人發(fā)熱初期或發(fā)熱高峰時(shí)采集。對已用藥而因病情不允許停藥的患者，也應(yīng)在下次用藥前采集。亞急性心內(nèi)膜炎第一天在身體不同部位取三次標(biāo)本。性，應(yīng)繼續(xù)加抽3份血樣或更多次，多部位采樣送檢。24小時(shí)內(nèi)不超過3次，如培養(yǎng)陰性應(yīng)。有跡象細(xì)菌生長者，立即圖片，染色鏡檢，結(jié)果用電話報(bào)告臨床。革蘭染色后用低倍鏡觀察白細(xì)胞和上皮細(xì)胞數(shù)量的多少來初步判定。可作出初步報(bào)告。病原引起的腹瀉、抗菌藥物相關(guān)性腹瀉。

　　

【正文】 ?C）和白細(xì)胞增多（總數(shù) ?10?109/L）。 老年患者菌血癥，可能不發(fā)熱，低熱，尤其伴有不適，心肌痛或中風(fēng)可能是感染心內(nèi)膜炎的信號(hào)。 成都市第二 人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 細(xì)菌 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXJCZ08 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 BacTAlert 3D 全自動(dòng)血培養(yǎng)儀 操作程序 生效日期： 20210211 第 28 頁 共 202 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital BacTAlert 3D 全自動(dòng)血培養(yǎng)儀操作程序 1. 注意：臨床送檢血培養(yǎng)瓶上的雙條碼是否一貼于檢驗(yàn)單上。 ：（屏幕為觸摸屏） 在主界面上按 ，進(jìn)入第二界面 在第二界面時(shí)，用掃描器掃入培養(yǎng)瓶條碼，掃描后可看到 處有條碼號(hào) 此時(shí)可看到抽屜上亮起綠色指示燈，任意打開亮有綠燈的抽屜，將培養(yǎng)瓶任意插入亮有指 示燈的孵育孔中 關(guān)上抽屜 在屏幕上按 確認(rèn)，屏幕回到主界面 當(dāng)主界面上 或 上顯示有數(shù)字時(shí)及說明有陽性或陰性瓶 直接按 或 ，有陽性或陰性瓶的抽屜會(huì)顯示綠燈，打開抽屜，有陽性或陰性瓶的孵育孔指示燈會(huì)亮起（一次只能卸載一個(gè)瓶） 取下培養(yǎng)瓶，取下后該瓶的 ID會(huì)出現(xiàn)在 中 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 細(xì)菌 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXJ–CZ09 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 VitekATB 細(xì)菌分析儀操作程序 生效日期： 20210211 第 29 頁 共 202 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital VitekATB 細(xì)菌分析儀操作程序 開機(jī)：插上電源，待 UPS亮燈穩(wěn)定、打印機(jī)和顯示器啟動(dòng)，打開電腦，再打開讀數(shù)箱 2個(gè)開關(guān)。輸入用戶名 :SUPV，密碼： SUPV。點(diǎn)擊 VITEK→ reader status→ process on→ go，查看溫度。 取 24h內(nèi)的純單個(gè)菌落配制成菌懸液，按鑒定要求制成不同使用麥?zhǔn)蠁挝粷岫鹊木鷳乙海ū葷岱ǎ? 選好鑒定、藥敏卡，按順序編上卡號(hào)，接上充填裝置。 充填：把充填裝置放入充填箱，先按 ON，再按 FILL鍵即開始充填工作。 充填完畢，從熒屏中打開 Vitek 查看 readerstatus，將卡放入儀器最早讀的卡架內(nèi)。 把卡平穩(wěn)放入儀器最先讀卡的讀數(shù)箱的卡架內(nèi)，關(guān)閉箱門。 從熒屏輸入病人資料。 關(guān)機(jī)：本機(jī)平時(shí)不用開關(guān)，全日自動(dòng)工作，當(dāng)儀器遇需要搬動(dòng)移位時(shí)才可關(guān)機(jī)。點(diǎn)擊system、再點(diǎn)擊 system maintenance，選擇 stop the system 并運(yùn)行 0 分鐘，按順序關(guān)閉熒屏、顯示器、讀數(shù)箱、打印機(jī)、 UPS，最后拔除電源。 2. 注意事項(xiàng) （培養(yǎng)不超過 48小時(shí)）。 （按 VITEK技術(shù)指南操作）。 。 ，一定要查看熒屏上 reader status。 ， 20分鐘 內(nèi)要放入讀數(shù)箱（ YBC、 NHI、 ANI除外），否則會(huì)影響讀數(shù)效果。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 細(xì)菌 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXJ–CZ10 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 氧化酶實(shí)驗(yàn) 生效日期： 20210211 第 30 頁 共 202 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 氧化酶實(shí)驗(yàn) 目的： 規(guī)范氧化酶試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。 原理 氧化酶（細(xì)胞色素氧化酶）是細(xì)胞色素呼吸酶系統(tǒng)的酶。具有氧化酶的細(xì)菌，首先使細(xì)胞色素 C氧化，再由氧化性細(xì)胞色素 C使對苯二胺氧化，生成有色的醌類化合物。 試劑 鹽酸二甲基對苯二胺（或四甲基對苯二胺） ，加蒸餾水 10ml，置棕色瓶內(nèi)可用1周。冰箱保存，或分裝于棕色瓶內(nèi)密封。 質(zhì)控： 銅綠假單胞菌 ATCC 27853陽性，大腸埃希菌 ATCC 25922陰性。 操作步驟： 取潔凈的濾紙一小塊，蘸取菌苔少許，加 1滴 10g/L鹽酸二甲基對苯二胺溶液于菌落上，觀察顏色變化。 結(jié)果判斷： 立即呈粉紅色并迅速轉(zhuǎn)為紫紅色者為陽性。 注意事項(xiàng)： ，故應(yīng)經(jīng)常更換新試劑，或配置時(shí)試劑內(nèi)加入 %維生素 C以減少自身氧化。 不宜采用含葡萄糖培養(yǎng)基上的菌落（葡萄糖發(fā)酵可抑制氧化酶活性 ） . 實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)避開含鐵的培養(yǎng)基等含鐵物質(zhì)，因本試驗(yàn)過程中，遇鐵時(shí)會(huì)出現(xiàn)假陽性。 臨床意義 : 用于奈瑟菌屬，非發(fā)酵菌等細(xì)菌鑒定。 所有的革 蘭陰性菌均應(yīng)進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)，如果腸桿菌科不進(jìn)行本試驗(yàn)，則可能將氧化酶陽性的嗜水氣單胞菌錯(cuò)誤地鑒定為大腸埃希菌或沙雷菌。 .臨床微生物學(xué)診斷與圖解 .第二版 .上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社， 2021 ，周正明，高屹主編 .實(shí)用醫(yī)學(xué)培養(yǎng)基手冊 .北京：人民軍醫(yī)出版社， 1999 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 細(xì)菌 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXJCZ11 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 觸酶試驗(yàn) 生效日期： 20210211 第 31 頁 共 202 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 觸酶試驗(yàn) 目的： 規(guī)范觸酶試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 原理 具有觸酶 (過氧化氫酶 )的細(xì)菌，能催化過氧化氫，放出新生態(tài)氧，繼而形成分子氧，出現(xiàn)氣泡。 試劑 3%過氧化氫溶液。 質(zhì)控： 金黃色葡萄球菌 ATCC 25923陽性，肺炎鏈球菌 ATCC 49619陰性。 操作步驟： 取 3%過氧化氫溶液 ，滴加于不含血液的細(xì)菌瓊脂培養(yǎng)物上，或取 1~3ml滴加入鹽水菌懸液中。 結(jié)果判斷： 培養(yǎng)物出現(xiàn)氣泡為陽性。 注意事項(xiàng)： 細(xì)菌要求新鮮。 不宜用血瓊脂平板上的菌落作觸酶試驗(yàn)，因紅細(xì)胞內(nèi)含有觸酶，可能出現(xiàn)假陽性。 需用已知陽性菌和陰性菌作對照。 臨床意義 : 在革蘭陽性球菌中，鏈球菌觸酶試驗(yàn)陰性，葡萄球菌及微球菌均陽性，因此可用于革蘭陽性球菌的初步分群。 獻(xiàn) .臨床微生物學(xué)診斷與圖解 .第二版 .上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社， 2021 王欽升，周正明，高屹主編 .實(shí)用醫(yī)學(xué)培養(yǎng)基手冊 .北京：人民軍醫(yī)出版社， 1999 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 細(xì)菌 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXJCZ12 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 凝固酶實(shí)驗(yàn) 生效日期： 20210211 第 32 頁 共 202 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 凝固酶實(shí)驗(yàn) 目的： 規(guī)范凝固酶試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。 原理 金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生兩種凝固酶。一種是結(jié)合凝固酶，結(jié)合在細(xì)胞壁上，使血漿中的纖維蛋白原變成纖維蛋白而附著于細(xì)菌表面，發(fā)生凝集，可用玻片法測出。另一種是菌體生成后釋放于培養(yǎng)基中的游離凝固酶，能使凝血酶原變成凝血酶類物質(zhì)，從而使血漿凝固。 試劑 新鮮人或兔血漿，生理鹽水。 質(zhì)控： 金黃色葡萄球菌 ATCC 25923陽性，表皮葡萄球菌 ATCC 57625陰性。 操作步驟： 玻片法 取兔或混合人血漿和鹽水各 1滴分別置清潔載玻片上，挑取待檢菌菌落分別與血漿及鹽水混合。如血漿中有明顯的顆粒出現(xiàn)而鹽水中無自凝現(xiàn)象為陽性。 試管法 取試管 2支，分別加入 （經(jīng)生理鹽水 1： 4稀釋），挑取菌落數(shù)個(gè)加入測定管充分研磨混勻，用已知陽性菌株加入對照管， 37176。 C水浴 3~4小時(shí)。血漿凝固為陽性。 結(jié)果判斷： 玻片法：如血漿中有明顯的顆粒出現(xiàn)鹽水中無自凝現(xiàn)象為 陽性。試管法：血漿凝固為陽性。 注意事項(xiàng)： 若被檢菌為陳舊的肉湯培養(yǎng)物（ 18~24 小時(shí)）或生長不良，凝固酶活性低的菌株往往出現(xiàn)假陰性。 臨床意義 : 金黃色葡萄球菌凝固酶試驗(yàn)為陽性，而表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌凝固酶試驗(yàn)為陰性，故此試驗(yàn)對鑒別葡萄球菌有重要價(jià)值。 .臨床微生物學(xué)診斷與圖解 .第二版 .上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社， 2021。 ，周正明，高屹主編 .實(shí)用醫(yī)學(xué)培養(yǎng)基手冊 .北京：人民軍醫(yī)出版社， 1999。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 細(xì)菌 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXJCZ13 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 CAMP 實(shí)驗(yàn) 生效日期： 20210211 第 33 頁 共 202 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital CAMP 實(shí)驗(yàn) 目的： 規(guī)范 CAMP試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 原理 B 群鏈球菌具有“ CAMP”因子，能促進(jìn)葡萄球菌 223。 溶血素的活性 ,使兩種細(xì)菌在劃線處呈現(xiàn)箭頭形透明溶血區(qū)。 試劑 金黃色葡萄球菌 ATCC 25923，血瓊脂平板。 質(zhì)控： 無乳鏈球菌 ATCC 13813陽性，化膿鏈球菌 ATCC 19615陰性。 操作步驟： 先用產(chǎn)溶血素的金黃色葡萄球菌在血瓊脂平板上劃一橫線，再取待檢的鏈球菌與前一劃線作垂直劃線接種，兩者相距 ~1cm。置 35176。 C孵育 18~24小時(shí)，觀察結(jié)果。 結(jié)果判斷： 在兩種細(xì)菌劃線的交界處，出現(xiàn)箭頭形透明 溶血區(qū)為陽性。 注意事項(xiàng)： 被檢菌與金黃色葡萄球菌劃線之間留出 ~1cm距離，不得相接。 臨床意義 : 主要用于鑒定 B群鏈球菌（陽性），其他鏈球菌本試驗(yàn)陰性。 .臨床微生物學(xué)診斷與圖解 .第二版 .上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社， 2021 ，周正明，高屹主編 .實(shí)用醫(yī)學(xué)培養(yǎng)基手冊 .北京：人民軍醫(yī)出版社， 1999 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 細(xì)菌 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXJCZ14 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 OPTOCHIN 實(shí)驗(yàn) 生效日期： 20210211 第 34 頁 共 202 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital OPTOCHIN 實(shí)驗(yàn) 目的： 規(guī)范 Optochin試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。 原理 Optochin（ ethlhydrocupreine,乙基氫化 去甲奎寧的商品名）可干擾肺炎鏈球菌葉酸的生物合成，抑制該菌的生長，故肺炎鏈球菌對其敏感，而其他鏈球菌對其耐藥。 試劑 血瓊脂平板， Optochinh紙片（含藥 5ug）。 質(zhì)控： 肺炎鏈球菌 ATCC49619陽性，糞鏈球菌 ATCC9790陰性。 操作步驟： 將待檢的α溶血的鏈球菌均勻地徒步在血瓊脂平板上，貼放 Optochin紙片 （含藥 5ug），35176。 C孵育 18~24小時(shí)，觀察抑菌圈的大小。 結(jié)果判斷： 抑菌圈 10mm為肺炎鏈球菌。 注意事項(xiàng)： 做 Optochin敏感試驗(yàn)的平板不 能在 CO2環(huán)境下培養(yǎng)，因其可使抑菌圈縮小。 同一血瓊脂平板可同時(shí)測定幾株菌株，但不要超過 4株被測菌。 Optochin紙片可保存于冰箱中，一般可保存 9個(gè)月。但如用已知敏感的肺炎鏈球菌檢測為耐藥時(shí)，紙片應(yīng)廢棄。 臨床意義 : 用于肺炎鏈球菌與其他鏈球菌之鑒別。肺炎鏈球菌對 Optochin 敏感，而其他鏈球菌則耐藥。 參考文獻(xiàn) .臨床微生物學(xué)診斷與圖解 .第二版 .上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社， 2021 王欽升，周正明，高屹主編 .實(shí)用醫(yī)學(xué)培養(yǎng)基手冊 .北京：人民軍醫(yī)出版社， 1999 成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 細(xì)菌 SOP 文件編號(hào)： CDEYLABXJCZ15 版本 /修訂號(hào) ： B/0 主題內(nèi)容 雙糖鐵實(shí)驗(yàn) 生效日期： 20210211 第 35 頁 共 202 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 雙糖鐵實(shí)驗(yàn) 目的 規(guī)范雙糖鐵試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范 原理 能發(fā)酵葡萄糖和乳糖的細(xì)菌產(chǎn)酸產(chǎn)氣，使雙糖貼的斜面和底層均呈黃色，并有氣泡產(chǎn)生；只能發(fā)叫葡萄糖，不發(fā)酵的細(xì)菌，使斜面呈紅色，而底層呈黃色；有些細(xì)菌能分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸，生成硫化氫（ H2S）， H2S遇鉛或鐵離子形成黑色的硫化鉛或硫化鐵沉淀物；分解尿素，呈紅色。 試劑 雙糖鐵瓊脂成分 上層：乳糖 10g 蔗糖 10g 葡萄糖 1g 硫酸亞鐵 蛋白胨 20g 瓊脂 20g 硫代硫酸鈉 氯化鈉 5g %酚紅 蒸餾水 1000ml 下層：牛肉膏 酸性磷酸鉀 %酚紅 蛋白胨 6g 瓊脂 3g 氯化鈉 3g 尿素 12g 蒸餾水 600ml 制備 上層制備：成分混合后，加熱溶解，校正 ph至 ，分裝三