【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 花托為外植體是最為成功和有效的。三、相關(guān)知識(shí)非洲菊（Gerbera jamesonii Bolus）是菊科（Asteraceae）大丁草屬（Gerbera Cass）多年生宿根草本花卉，別名扶郎花，燈盞花、秋英、波斯花、千日菊，與唐菖蒲、康乃馨、月季、菊花同稱世界五大切花。原產(chǎn)非洲南部，我國(guó)于20世紀(jì)80年代開始引種，但栽培品種完全由國(guó)外引進(jìn)，極大地制約了非洲菊作為第五大切花在我國(guó)的發(fā)展。非洲菊傳統(tǒng)的繁殖方法是種子繁殖和分株繁殖。種子繁殖過程中由于雌雄蕊成熟期不一致，且雌蕊雄蕊生長(zhǎng)高度不同等因素造成白花不孕，必須輔以人工授粉，種子壽命很短，發(fā)芽率低，且大丁草屬的資源在國(guó)外，傳統(tǒng)的雜交育種方法受到限制。分株繁殖受季節(jié)限制，繁殖系數(shù)低，難以滿足工廠化生產(chǎn)，且長(zhǎng)期的無(wú)性繁殖會(huì)造成病毒積累，病蟲害交叉感染，導(dǎo)致種性退化，花的商品質(zhì)量下降。我國(guó)非洲菊早在20年代就有栽培。1987年我國(guó)科研人員解決了非洲菊的組織培養(yǎng)的快繁技術(shù)，使我國(guó)的非洲菊生產(chǎn)得到發(fā)展。（一）形態(tài)特征和生物學(xué)習(xí)性非洲菊一般株高50～60cm。全株具細(xì)毛．葉片基生，豎直向上或斜生，其形狀隨植株的生長(zhǎng)而發(fā)生變化，從小到大由橢圓形變?yōu)殚L(zhǎng)橢圓形，葉片長(zhǎng)15～25cm，寬5～8cm，羽狀淺裂或深裂，葉背具細(xì)絨毛。花由舌狀花和管狀花組成單生頭狀花序，花序頂生。舌狀花較大，著生于花序的邊緣，排列成一輪或數(shù)輪，從而形成單瓣或重瓣花型。非洲菊性喜冬季溫和，夏季涼爽的氣候條件。最適生長(zhǎng)溫度為20～25℃，最低12℃，最高不超過30℃。四季有花，以4～5月和8～10月為盛花期，低于10℃則進(jìn)入體眠期。喜陽(yáng)光充足的環(huán)境，每天日照時(shí)數(shù)不低于12h，能提高植株的切花率，使花朵色彩更鮮艷。土壤要求有機(jī)質(zhì)豐富、排水良好、pH值為6～，在鹽堿化嚴(yán)重的土壤中難以生長(zhǎng)良好。(二)非洲菊的組織培養(yǎng)非洲菊組培工藝流程如圖1031所示?；ㄍ?、莖尖分化花芽誘導(dǎo)愈傷組織繼代增殖移入大田馴化移栽生根培養(yǎng)圖1031非洲菊組培工藝流程首先要選擇花大、花色艷麗、市場(chǎng)受歡迎的品種，然后再選擇無(wú)病蟲害、植株生長(zhǎng)健壯、花色純正的優(yōu)良單株進(jìn)行取材。一旦選出優(yōu)良單株后，應(yīng)進(jìn)行掛牌標(biāo)記，并一直在其上采取花蕾。～，而且未露心的小花蕾，太大或是太小的花蕾均不能獲得滿意的效果。將小花蕾在自來(lái)水下沖洗干凈，然后到超凈工作臺(tái)上用70％酒精浸泡20 s，％％吐溫20處理10～15min，并不斷搖動(dòng)瓶子，以使消毒劑與幼花托充分接觸，最后用無(wú)菌水沖洗4次。在無(wú)菌條件下，將幼花托的萼片及表面小花全部剝除，～，也可放人稀釋的Vc溶液中浸泡1～2min，減少褐變?cè)斐傻乃劳?，再接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。初代培養(yǎng)基為MS+／L+／L若在最初的2～3d的時(shí)間里選擇暗培養(yǎng)，然后在正常的培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)，將減少外植體的褐變死亡。接種7～10d后開始膨大，并在外植體表面產(chǎn)生黃白色愈傷組織。15 d后，多數(shù)愈傷組織逐漸轉(zhuǎn)為綠色，將綠色的愈傷組織塊分切成小塊，接種到MS或1／2MS+Ba ～／L+～／L誘導(dǎo)不定芽的培養(yǎng)基中。根據(jù)品種的不同，部分品種可在1個(gè)月后分化出不定芽，多數(shù)品種要經(jīng)過不斷轉(zhuǎn)接3～5個(gè)月后才會(huì)出芽，有少數(shù)品種甚至經(jīng)過半年的不斷轉(zhuǎn)接和培養(yǎng)，仍然沒有不定芽分化的跡象。由于整個(gè)誘導(dǎo)過程長(zhǎng)而復(fù)雜，在培養(yǎng)過程中會(huì)因培養(yǎng)基和環(huán)境條件稍有不適，而出現(xiàn)花芽和愈傷組織褐變死亡和污染，最終導(dǎo)致組培失敗。由于從花托上分化出不定芽的幾率比較小，一旦有芽從花托上產(chǎn)生，就要及時(shí)從花托上分割下來(lái)轉(zhuǎn)移到MS+～／L+～／L繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行快速擴(kuò)繁。最初的幾代中，由于基數(shù)較少，～／L來(lái)盡快增殖，隨著基數(shù)的不斷增多，要逐漸降低BA的濃度，否則就會(huì)增加玻璃化組培苗的比例。關(guān)于非洲菊快繁增殖大多都是以增殖系數(shù)為主要或唯一測(cè)定指標(biāo)，并通過生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度和比例來(lái)調(diào)控的，實(shí)際上在高生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度下的高增殖系數(shù)會(huì)對(duì)增殖試管苗的生根、馴化和移栽等生產(chǎn)后續(xù)環(huán)節(jié)產(chǎn)生不利影響，造成玻璃化試管苗增加和馴化移栽成活率低等問題，王春彥等人提出用有效增殖(叢生芽能夠繼續(xù)用于繼代或轉(zhuǎn)接的芽即為有效增殖)系數(shù)及叢生試管苗的生長(zhǎng)狀況為主要指標(biāo)來(lái)指導(dǎo)生產(chǎn)進(jìn)程。連續(xù)使用高細(xì)胞分裂素濃度，組培苗的葉片又嫩又脆容易脫落，且邊緣有深的鋸齒狀裂刻，不易轉(zhuǎn)接操作，可用ZT或KT與BA進(jìn)行一定輪次的交替使用，增加生產(chǎn)的穩(wěn)定性，降低無(wú)效苗消耗。不定芽經(jīng)過擴(kuò)繁和繼代培養(yǎng)后，達(dá)到可維持一定生產(chǎn)量的增殖基數(shù)時(shí)，便可在每次繼代時(shí)將苗高2～3cm的單株切下，轉(zhuǎn)入1／2MS+／／L生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)。7～8d后，小苗基部就會(huì)長(zhǎng)出3～5條不定根，生根率可達(dá)到98％以上，12～15d后，～，就可以出瓶馴化；如果根太長(zhǎng)，反而不利于馴化移栽。此外生根階段所用的生長(zhǎng)素濃度要低，若生長(zhǎng)素濃度高，／L以上，根系會(huì)又短又粗且愈傷化，在移栽的過程中極易脫落和腐爛。／L以內(nèi)時(shí)為佳。通過對(duì)培養(yǎng)瓶透氣性、培養(yǎng)環(huán)境中CO2濃度、乙烯濃度以及培養(yǎng)溫度、光照、光質(zhì)等環(huán)境因素進(jìn)行調(diào)節(jié)，組培苗的質(zhì)量會(huì)有很大提高。移栽時(shí)用鑷子將小苗從培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)取出，并在水中洗去瓊脂，栽人加有少量珍珠巖和腐葉土的混合基質(zhì)內(nèi)。如果有噴灌設(shè)施條件，則可以直接將瓶苗種植于成條的苗床上，只要注意遮蔭，在噴霧條件下，一般成活率可以達(dá)到95％以上。在沒有自控溫室的條件時(shí)，可進(jìn)行人工環(huán)境管理，重點(diǎn)是空氣相對(duì)濕度管理，前期遮蔭，后期適當(dāng)增加光照，同樣可以獲得90％以上的過渡成活率。非洲菊馴化移栽采用的基質(zhì)可依各地區(qū)資源而定，腐葉土、礱糠灰、鋸木屑、菌糠、椰子殼等添加一定比例的蛭石均可達(dá)到95％以上的馴化成活率。前期可以不用施肥，1個(gè)月后可適當(dāng)進(jìn)行葉面追肥，在整個(gè)過程中都要加強(qiáng)病蟲害的防治工作。四、組織實(shí)施，熟悉非洲菊組織培養(yǎng)程序。進(jìn)行小組分工，明確工作任務(wù)和任務(wù)要求。，并進(jìn)行有效滅菌，在接種和封口時(shí)要求操作規(guī)范、速度快、質(zhì)量好。，對(duì)環(huán)境條件要求既嚴(yán)格，各小組對(duì)初代培養(yǎng)過程中出現(xiàn)的情況及時(shí)總結(jié)。，盡可能消除非洲菊的玻璃化苗現(xiàn)象和馴化移栽中成活率低的問題并相互檢查，認(rèn)真總結(jié)。，對(duì)設(shè)計(jì)方案及實(shí)施過程的進(jìn)行客觀評(píng)價(jià)，并提出合理化的建議。，并加強(qiáng)對(duì)各組的栽培苗馴化鍛煉的指導(dǎo)。五、評(píng)價(jià)與考核項(xiàng)目?jī)?nèi) 容要 求賦分計(jì)劃制定。準(zhǔn)備培養(yǎng)基。非洲菊組織培養(yǎng)基礎(chǔ)知識(shí)扎實(shí)；培養(yǎng)基配制操作規(guī)范、準(zhǔn)確，小組分工明確，責(zé)任到位10物品準(zhǔn)備常用藥劑、三角瓶、封口膜、線繩、非洲菊組培苗和超凈工作臺(tái)等。根據(jù)非洲菊組織培養(yǎng)要求物品準(zhǔn)備到位。10培養(yǎng)材料采集采取非洲菊組培需要的材料。培養(yǎng)材料準(zhǔn)備到位，合理分工。10培養(yǎng)材料滅菌準(zhǔn)備大小適合的花蕾。要求滅菌藥劑濃度準(zhǔn)確，滅菌時(shí)間適當(dāng)，操作規(guī)范，滅菌徹底。獨(dú)立完成。10接種和培養(yǎng)：將切好的外植體立即接在培養(yǎng)基上。接種操作規(guī)范、速度快、質(zhì)量好，獨(dú)立完成。10：接種后，瓶、管、培養(yǎng)皿及時(shí)封口。操作方法正確。獨(dú)立完成。5：配好培養(yǎng)基控制好環(huán)境條件，能獨(dú)立完成。15：配好培養(yǎng)基控制好環(huán)境條件，能獨(dú)立完成。10：做好培養(yǎng)基注意選擇在不定根長(zhǎng)度適宜是馴化移栽。能獨(dú)立完成。10煉苗移栽做好煉苗和移栽工作。選配適當(dāng)?shù)幕|(zhì)，注意環(huán)境條件控制。注重協(xié)作。5現(xiàn)場(chǎng)整理清潔操作臺(tái)、還原藥品及用具，整理工作場(chǎng)所。要求整理到位，培養(yǎng)良好的工作習(xí)慣和職業(yè)情操。5知識(shí)拓展一非洲菊的幼芽培養(yǎng)用于組培的幼芽可釆自溫室栽培的植株，也可用試管苗幼芽。在田間采取時(shí)，先切取1cm左右的頂芽，先用自來(lái)水沖洗2 h，用洗衣粉水清洗后，在超凈工作臺(tái)上，用75％酒精消毒5 s，％升汞溶液消毒5～8 min，無(wú)菌水沖洗3～4次，然后用無(wú)菌濾紙吸干水分，剝?nèi)∏邢?～3mm大小的莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+／L+KTI 0 mg／L+Ad80m mg／L +CH 80mg／L +VB130 mg／L +VB310 mg／L + mg／L +NaH2P04 800 mg／L +蔗糖40 g／L、瓊脂8 g／L，培養(yǎng)溫度25～27℃，光照強(qiáng)度1000Lx，光照時(shí)間每天16 h。培養(yǎng)15d后，莖尖開始膨脹，4～6周出現(xiàn)芽分化，得到許多側(cè)芽并產(chǎn)生叢生芽。有的研究是將莖尖接種到MS+BA mg／L +NAA ／L上進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，2周后即可形成叢生苗，再轉(zhuǎn)至1／2MS+ mg／L培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)。對(duì)上述誘導(dǎo)出的側(cè)芽進(jìn)行增殖培養(yǎng)，用MS+KT 10mg／L + mg／L、MS+BA ／L+ mg／L、MS+BA 2 mg／L + mg／L三種培養(yǎng)基交替繼代培養(yǎng)，各培養(yǎng)基中加入蔗糖30g／L，瓊脂6g／L培養(yǎng)溫度為17～27℃之間，不要超過27℃，光照強(qiáng)度1000～1500 Lx，光照時(shí)間每天12h。繼代培養(yǎng)4周后，有一半以的從生芽達(dá)到2～3cm高，生長(zhǎng)良好，此時(shí)可進(jìn)行下一次擴(kuò)繁，每次繼代增值4～6倍。在材料增殖到一定數(shù)缺后，可將2cm以上的叢生芽轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上。生根培養(yǎng)基可用1／2MS+ mg／L或1／2MS+IAA 10 mg／L，蔗糖10g／L，瓊脂6 g／L。培養(yǎng)溫度20～27℃，光照強(qiáng)度1500 Lx，光照時(shí)間每天14h。經(jīng)2～3周培養(yǎng)，95％以上的無(wú)根苗可生根。栽培基質(zhì)可用珍珠巖5份+草碳土4份+針葉土1份，～，采用高壓滅菌，滅菌后趁熱裝入培養(yǎng)箱，澆透水，將生根的小苗從培養(yǎng)基中取出，洗掉根上的培養(yǎng)基，打孔移栽，株行距2cm，澆水后覆蓋薄膜，保持90％以上的空氣濕度。移栽后呵用75％百菌清液800倍噴霧一次，以后每隔7～10天噴一次，以防小苗感病。當(dāng)小苗移栽10天后開始長(zhǎng)出新叫新根時(shí)。可噴施1／2MS大量元素做追肥。過渡期溫度保持在18～22℃，光照強(qiáng)度2000Lx，以散射光為好。移栽成活后，應(yīng)逐漸揭開薄膜通風(fēng)，通風(fēng)時(shí)間隨煉苗時(shí)間的增加逐漸延長(zhǎng)，直至全部揭膜，以適應(yīng)露地栽培條件。 蘭花組織培養(yǎng)技術(shù)學(xué)習(xí)目標(biāo)。 　 。任務(wù)要求。 一、任務(wù)提出 教師通過向?qū)W生展示蘭花不同生長(zhǎng)與分化階段的試管苗和商品苗，激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)興趣，提出學(xué)習(xí)任務(wù)：？？？?5. .要提高蘭花試管苗馴化移栽成活率，在生根和移栽階段應(yīng)注意哪些技術(shù)措施？二、任務(wù)分析蘭花在自然條件下主要靠分株繁殖，繁殖率一年只有幾倍，所以無(wú)法大量繁殖生產(chǎn)，而且由于長(zhǎng)期進(jìn)行無(wú)性繁殖，帶病毒株增多，逐漸使種性降低，影響生長(zhǎng)。法國(guó)Morel(1952年)等以大麗花莖尖進(jìn)行培養(yǎng)試驗(yàn)，得到了無(wú)病毒植株。后來(lái)他觀察到虎頭蘭的莖尖在無(wú)菌的培養(yǎng)基上能形成扁圓形的小球體，這些小球體與種胚發(fā)育成的原球體非常相似，故稱為原球莖。原球莖增殖很快，并可形成幼苗。這一方法和技術(shù)很快在蘭花生產(chǎn)上得到了廣泛的應(yīng)用，成為常規(guī)的蘭花繁殖方法。以后在不少國(guó)家和地區(qū)發(fā)展成為“蘭花工業(yè)”。此后，許多研究者對(duì)蘭花組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行了改善，目前大約已有60余屬數(shù)百種蘭花可以用組織培養(yǎng)的方法繁殖。其中莖尖是最早用于蘭花快速繁殖的外植體，商業(yè)價(jià)值較大的幾個(gè)屬，如大花蕙蘭(Cybidium)、卡德麗亞蘭(Cattleya)、石斛蘭(Dendrobim)、蝴蝶蘭(Phalaeanopsis)、文心蘭(Oncidium)等，均首先在莖尖培養(yǎng)中取得成功；側(cè)芽培養(yǎng)也相當(dāng)廣泛。但兜蘭(Paphiopedium)的培養(yǎng)極為困難，至今報(bào)道極少。特別值得一提的是，中國(guó)蘭的芽端組織培養(yǎng)。中國(guó)蘭指蕙蘭屬的部分地生蘭種，其栽培歷史已有千年，有許多名貴珍稀品種，近年來(lái)，我國(guó)學(xué)者在中國(guó)蘭的培養(yǎng)中取得了一些成就，先后在建蘭、春蘭、墨蘭等幾十個(gè)品種的芽端培養(yǎng)中獲得成功。三、相關(guān)知識(shí)蘭花（Cymbidium）屬蘭科(Orchidaceae)，是單子葉植物，為多年生草本。蘭花是中國(guó)傳統(tǒng)名花，是一種以香著稱的花卉。蘭花以它特有的葉、花、香獨(dú)具四清（氣清、色清、神清、韻清），給人以極高潔、清雅的優(yōu)美形象。古今名人對(duì)它品價(jià)極高，被喻為花中君子。在古代文人中常把詩(shī)文之美喻為“蘭章”，把友誼之真喻為“蘭交”，把良友喻為“蘭客”。（一）形態(tài)特征和生物學(xué)習(xí)性　蘭花根肉質(zhì)肥大，無(wú)根毛，有共生菌。具有假鱗莖，俗稱蘆頭，外包有葉鞘，常多個(gè)假鱗莖連在一起，成排同時(shí)存在。葉線形或劍形，革質(zhì)，直立或下垂，花單生或成總狀花序，花梗上著生多數(shù)苞片?；▋尚裕叻枷??；ü谟?枚萼片與3枚花瓣及蕊柱組成。萼片中間1枚稱主瓣。下2枚為副瓣，副瓣伸展情況稱戶。上2枚花瓣直立，肉質(zhì)較厚，先端向內(nèi)卷曲，俗稱捧。下面1枚為唇瓣，較大，俗稱蘭蓀。成熟后為褐色，種子細(xì)小呈粉末狀。 　　春蘭、蕙蘭按其主瓣、副瓣、捧及唇的形狀、質(zhì)地等的不同變化分為梅瓣、水仙瓣、荷瓣、蝴蝶瓣、奇種與素心等。梅瓣為萼片短圓，肉質(zhì)較厚，稍向內(nèi)曲，基部狹窄，捧瓣肉質(zhì)肥厚先端內(nèi)曲成兜，唇瓣短而硬，花初開時(shí)微向上，名種有宋梅、西神梅等品種。水仙瓣為萼片稍長(zhǎng)于梅瓣，先端漸尖，捧瓣質(zhì)地厚，先端也成兜，唇瓣微垂或反卷，名種有汪字、翠一品等。茶瓣為萼片寬大，質(zhì)厚，基部窄，先端寬而突尖，捧瓣不成兜，唇瓣較潤(rùn)，微反卷，名種有大富貴、翠蓋花等。蝴蝶瓣為向下的兩枚萼片的內(nèi)側(cè)，質(zhì)地變厚，成波狀縐，并有紅色塊斑，有時(shí)整個(gè)萼片或花瓣數(shù)量突然增多（如綠云，花冠常在8枚左右），或花朵形狀有特殊變化。素心為花被、花莖、苞片同一顏色，純綠、黃綠等，沒有雜色的斑綠、黃綠等，沒有雜色的斑紋，名貴品種有張荷素、老文團(tuán)素等。 蘭性喜陰，忌陽(yáng)光直射，喜濕潤(rùn)，忌干燥，喜肥沃、富含大量腐殖質(zhì)、排水良好、微酸性的沙質(zhì)壤土，宜空氣流通的環(huán)境。 (二)蘭花的組織培養(yǎng)蘭花組織培養(yǎng)流程如圖1041所示。頂芽、側(cè)芽增殖培養(yǎng)誘導(dǎo)培養(yǎng)生根培養(yǎng)成苗移栽馴化移栽液體振蕩培養(yǎng)原球莖圖1041蘭花組培工藝流程大多數(shù)植物根、莖、葉和花器等各個(gè)部位都能培養(yǎng)成功。而蘭科植物可以培養(yǎng)的部位主要是頂芽和側(cè)芽，一部分種類可以采用隱芽等休眠芽，個(gè)別可從葉片培養(yǎng)得植株，各屬適宜培養(yǎng)的部位也有區(qū)別。（1）新芽的莖尖莖尖是細(xì)胞分裂最旺盛的部分，也是培養(yǎng)成功率最高的部位，但需要較高的分離技術(shù)。（