電鏡超薄切ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-29 07:51 本頁面
【文章內容簡介】 avoid digestion by enzymes (autolysis) or bacteria and to preserve the physical structure, pieces of ans should be promptly and adequately treated before or as soon as possible after removal from the animal’s body. 1） Function of fixation ? A． 阻止細胞自溶 。 ? B 穩(wěn)定細胞物質成分 。 ? C 在一些組分的分子之間以化學反應和物理反應建立鉸鏈 ， 提供一個骨架來穩(wěn)定各種細胞的空間結構 。 ? D能提供一定的電子反差 ? 理想的固定劑 ， 應具備以下條件： ① 能迅速而均勻地滲入組織細胞內部 ， 穩(wěn)定細胞內各種成分； ② 能即刻將細胞 “ 殺死 ” ，盡可能保持細胞微細結構 ， 減少死后變化；③ 對細胞不產生收縮及膨脹作用 ， 不產生人工假象及變形； ④ 可保存酶的活性 ， 以利于細胞化學測定工作的進行 。 ? 2） 影響固定效果的因素 ? ① 固定液的 pH值 ? ② 滲透壓 ? ③ 緩沖液的類型 ? ④ 固定的溫度和時間 ? 當前采用的是在 0～ 4℃ 下固定 1 ～ 4小時 。 ? 3） 常用的幾種固定劑 ? A 四氧化鋨 （ osmium tetroxide,OsO4）亦稱鋨酸：鋨酸實際上不是酸 ， 它的水溶液是中性的 ， 為一種強氧化劑 。 1g包裝 ， 淡黃色晶體 。 具有揮發(fā)性和毒性 ， 在室溫下易揮發(fā) ， 其蒸氣對粘膜有刺激作用 ， 在通風櫥內配制 。 ? 優(yōu)點 ① 對蛋白質 、 磷酸脂蛋白 、 核蛋白固定較好； ② 對脂類固定較好 。 ③ 分子密度高 ，產生良好的反差 ， 因此鋨酸固定本身也起到生物染色作用 。 ?缺點 ① 不能固定糖元和核酸 ， 對微管固定較差 。 ② 擴散慢 ， 穿透能力差 。 ③ 具有揮發(fā)性和粘膜毒性 。 ④ 不適于進行細胞化學工作 。 ? B戊二醛 （ glutaraldehyde,C5H8O2） ? 特點：純的容易聚合 ， 目前使用 25%水溶液進口分裝 。 存放時間久了容易變質 ， 影響固定 。 ? 優(yōu)點 (1)對組織穿透力強 。 (2)能保存某些酶的活性 ， 對糖元 、 細胞膜 、 核基質等有較好的作用 。 (3)而且組織塊在溶液中可保存較長的時間 ， 適用于進行超微細胞化學研究 。 ? C 甲醛（ fomaldehyde） :多用多聚甲醛粉劑配制。其分子小，滲透力強，固定迅速，對酶的活性保存好。 ? 4） 固定的方法 ? A 單固定法：單細胞或固定液易于浸透的組織 12%四氧化鋨 （ 12h） 。 ? B 雙固定法：戊二醛 （ % 4oC 2h） 鋨酸 （ 1% 4oC 2h） 。 ? C 原位固定和灌注固定： ? 附 幾種常見固定劑的配制 ? 固定液的 PH值 ， 常用 PH值 ,對含水較多的組織可用 PH值 ， 細菌 、 病毒可用 PH值在 。 ? 0. 2mo
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