【正文】 ． 導(dǎo)入到受體細胞的目的基因的表達需要調(diào)控序列 ， 因此在插入目的基因的部位之前需有啟動子 ， 之后需有終止子 。 下面甲 、 乙圖表示從真核生物細胞中獲取目的基因的兩種方法 ， 請回答下列問題 。 終止子相當于一盞紅色信號燈 ， 使轉(zhuǎn)錄到此終止 。 (4)與只使用 EcoRⅠ 相比較 ， 使用 BamHⅠ 和 HindⅢ 兩種限制酶同時處理質(zhì)粒 、 外源 DNA的優(yōu)點在于可以防止________。 不同受體細胞導(dǎo)入方法不同 。 如果對最初的 DNA片段進行標記 ， 即成為探針 。 為從根本上解決水稻中的高植酸問題 ， 可將植酸酶基因?qū)胨?， 培育低植酸轉(zhuǎn)基因水稻品種 。 2． DNA復(fù)制 、 PCR技術(shù)與基因克隆 (1)DNA復(fù)制與 PCR技術(shù)的比較 DNA復(fù)制 PCR技術(shù) 場所 細胞核內(nèi) 生物體外 原理 堿基互補配對 堿基互補配對 酶 DNA聚合酶、解旋酶 熱穩(wěn)定 DNA聚合酶 (Taq酶 ) 條件 模板、 ATP、引物鏈、常溫 模板、 ATP、引物鏈、溫度變化 (90℃ ～ 95℃→ 55℃ ～60℃→ 70℃ ～ 75℃ ) 原料 四種脫氧核苷酸 四種脫氧核苷酸 特點 形成的是整個 DNA分子，一個細胞周期只復(fù)制一次 短時間內(nèi)形成大量目的基因DNA片段 (2)克?。河枚喾N限制性核酸內(nèi)切酶或者機械的方法 ， 將某種生物細胞中的 DNA切成不同片段 ， 并把所有片段隨機地分別連接到用同種限制酶切過的基因運載體上 ， 然后分別轉(zhuǎn)移到適當受體細胞 ， 如細菌中 。 目的基因被受體細胞攝取是表達的前提 ， 但是被攝取并不意味著被表達 。聊城檢測 )下列關(guān)于基因表達載體的構(gòu)建描述錯誤的是 ( ) A． 基因表達載體的構(gòu)建是基因工程的核心 B． 基因表達載體的構(gòu)建包括目的基因 、 啟動子 、 終止子 、 標記基因等部分 C． 目的基因主要是指編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 D． 構(gòu)建的基因表達載體都是相同的 [答案 ] D [解析 ] 基因表達載體的構(gòu)建是基因工程的第二步 ， 也是基因工程的核心；一個基因表達載體的組成除目的基因外還必須具有啟動子 、 終止子 、 標記基因等部分；目的基因主要是指編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因；由于受體細胞不同 ， 基因表達載體的構(gòu)建也會有差別 ， 不可能都是相同的 。 下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點 ， 圖 圖 2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切點 。 2． 表達載體的組成：啟動子＋目的基因＋終止子＋標記基因 。 (1)反轉(zhuǎn)錄法：主要用于相對分子質(zhì)量較大而又不知其序列的基因 ， 它是以目的基因的 mRNA為模板 ， 借助反轉(zhuǎn)錄酶合成堿基互補的單鏈 DNA， 然后在 DNA聚合酶的作用下合成雙鏈DNA。最常用的轉(zhuǎn)化方法是用 ○36 ________ 處理細胞 → 感受態(tài)細胞 → ○37_______ ____ _ 與感受態(tài)細胞混合 → 感受態(tài)細胞吸收 ○38________ 。 一 、 目的基因的獲取 1． 從基因文庫中獲取目的基因：將含有某種生物 ⑤________的許多 DNA片段 ， 導(dǎo)入受體菌的群體中儲存 ， 各個受體菌分別含有這種生物的 ⑥ ________， 稱為基因文庫 。 指數(shù)擴增約為 2n(n為擴增循環(huán)的次數(shù) )。 3． 植物細胞的全能性較高 ， 可經(jīng)植物組織培養(yǎng)過程成為完整植物體 ， 因此受體細胞可以是受精卵也可以是體細胞；動物體細胞的全能性受到嚴格限制 ， 因此動物基因工程中的受體細胞一般只用受精卵 。 (1)在甲圖中 ， a過程是在 ________酶的作用下完成的 。 (4)標記基因 鑒別受體細胞中是否含有目的基因 ， 從而將含有目的基因的細胞篩選出來 ， 如抗生素抗性基因就可以作為這種基因 。 (5)為了獲取重組質(zhì)粒 ， 將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合 ， 并加入 ________酶 。 生物種類 植物細胞 動物細胞 微生物細胞 常用方法 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 顯微注射法 Ca2＋ 處理法 受體細胞 體細胞 受精卵 原核細胞 轉(zhuǎn)化過程 目的基因插入 Ti質(zhì)粒的 T－ DNA上 → 農(nóng)桿菌 → 導(dǎo)入植物細胞 → 融合到受體細胞的DNA→ 表達 目的基因表達載體提純 → 取卵 (受精卵 )→ 顯微注射 → 受精卵發(fā)育 → 獲得具有新性狀的動物 Ca2＋ 處理細胞→ 感受態(tài)細胞 →表達載體與感受態(tài)細胞混合 → 感受態(tài)細胞吸收DNA分子 知識貼士： ① 農(nóng)桿菌是一種在土壤中生活的微生物 ， 能在自然條件下感染雙子葉植物和裸子植物 ， 而對大多數(shù)單子葉植物沒有感染力 。 目的基因?qū)胧荏w細胞后 ， 是否可以穩(wěn)定維持和表達其遺傳特性 ， 只有通過鑒定和檢測才能知道 。 下圖是獲取植酸酶基因的流程 。 (3)目的基因是基因工程操作中需要的外源基因 ， 它是編碼某種蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 ， 如生物的抗逆性基因 、 抗蟲基因等 。 目的基因的檢測內(nèi)容和方法的比較如下表： 類型 步驟 檢測內(nèi)容 方法 結(jié)果顯示 分子 檢測 第一步 目的基因是否進入受體細胞 DNA分子雜交(DNA和 DNA之間 ) 是否成功