【正文】 合成酶基因的表達水平有很大提高，同時比生長速率下降，培養(yǎng)液中 Trp－ 的比例上升。 工程菌構建 干擾素的制備 第 一代乙肝疫苗，屬血源疫苗，由無癥狀乙型肝炎表面抗原陽性者的血漿制備而得。 干擾素在我國已經批準上市的基因工程藥物。 一般培養(yǎng)基中各成分并不是完全平衡的 ， 經過一段時間的培養(yǎng) ， 微生物的生長通常會受到一種或幾種物質的限制 。 連續(xù)培養(yǎng) 連續(xù)培養(yǎng)是將種子接入發(fā)酵反應器中，攪拌培養(yǎng)至菌體濃度達到一定程度后，開動進料和出料蠕動泵，以一定稀釋率進行不間斷培養(yǎng)。磷酸基和 3180。連續(xù)培養(yǎng)則多用于動力學特性和穩(wěn)定性等研究。提高比生長速率有助于提高質粒穩(wěn)定性。不同的宿主菌及質粒在固定化系統(tǒng)中均表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性。 第二代乙肝疫苗，將編碼乙型肝炎表面抗原的基因在哺乳動物細胞或酵母菌中高效表達，得到乙肝基因工程疫苗，接種者中約有 10%不產生應答反應；另有 5%～ 15%接種者屬低應答者，低應答者不能獲得完全保護作用 。 連續(xù)培養(yǎng)時可以考慮采用多級培養(yǎng)，如在第一級進行生長，維持菌體的穩(wěn)定性，在第二級進行表達。 采用膜透析裝置是在發(fā)酵過程中用蠕動泵將發(fā)酵液抽出打入罐外的膜透析器的一側循環(huán)，其另一側通入透析液循環(huán)，在補料分批培養(yǎng)中，大量乙酸在透析器中透過半透膜，降低培養(yǎng)基中的乙酸濃度，并可通過在透析液中補充養(yǎng)分而維持較合適的基質濃度，從而獲得高密度菌體。不致病、使用安全，分泌能力強，可將表達產物直接分泌到培養(yǎng)液中， 具有一定的糖 基化 能力 真核細胞 （ 1）酵母 特點： ① 真核生物細胞，表達產物能糖基化； ② 基因組小，僅為大腸桿菌的 4倍； ③ 世代時間短，繁殖迅速； ④ 基因操作與原核生物相似； ⑤ 建立了有分泌功能的表達系統(tǒng)，將產物分泌出胞外，分離純化工藝相對簡單。 包涵體 包涵 體（ 3）鏈霉菌 重要的工業(yè)微生物。 透析培養(yǎng) 透析培養(yǎng)技術是利用膜的半透性原理使培養(yǎng)物和培養(yǎng)基分離，其主要目的是通過去除培養(yǎng)液中的代謝產物來解除其對生產菌的不利影響。 改進 載體受體系統(tǒng) 以 增加質粒穩(wěn)定性為目的的構建方法包括： 1）將 R1 質粒上的 parB 基因引入表達型載體中，其表達產物可以選擇性地殺死由于分配不均勻所產生的無質粒細胞 2）正確設置載體上的多克隆位點，禁止 DNA 片段插在穩(wěn)定區(qū)內 3）將受體細胞的致死性基因安裝在載體上，同時構建條件致死性的相應受體系統(tǒng)，如大腸桿菌的 ssb 基因（ DNA 單鏈結合蛋白編碼基因） 提高基因工程菌穩(wěn)定性的策略 施加 選擇壓力 根據載體上的抗藥性標記，向培養(yǎng)系統(tǒng)中添加相應的抗生素 藥物和食品生產時禁止使用抗生素；加入大量的抗生素會使生產成本增加；添加一些容易被水解失活的抗生素，只能維持一定時間；添加抗生素選擇壓力對質粒結構不穩(wěn)定無能為力 載體上的營養(yǎng)缺陷型標記，向培養(yǎng)系統(tǒng)中添加相應的營養(yǎng)組份 培養(yǎng)基復雜，成本較高 提高基因工程菌穩(wěn)定性的策略 分 階段控制培養(yǎng) 因外源基因表達造成質粒不穩(wěn)定時，可以考慮將發(fā)酵過程分階段控制 在生長階段使外源基因處于阻遏狀態(tài)，避免因表達造成不穩(wěn)定性問題的發(fā)生；在獲得需