【正文】 和人參多糖、毛地黃細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)化毛地黃毒苷 典型案例：紫杉醇生產(chǎn) C47H51NO14 分子量： 案 例 1 紫杉醇 (Paclitaxel)是繼阿霉素和鉑類抗癌藥之后本世紀(jì)后期最受人們重視的一種抗癌新藥，是一新發(fā)現(xiàn)的有絲分裂抑制劑，其作用機理在于阻止微管正常生理聚集，抑制癌細(xì)胞的有絲分裂和紡錘體的形成，從而使癌細(xì)胞的復(fù)制受到阻斷而凋亡。 動物細(xì)胞工程 常用的技術(shù)手段 動物細(xì)胞培養(yǎng) 動物細(xì)胞核移植和胚胎移植 動物細(xì)胞融合 生產(chǎn)單克隆抗體 動物細(xì)胞培養(yǎng) ? 動物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動物機體內(nèi)取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細(xì)胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。 過去：人們?yōu)榱说每贵w ， 根據(jù)上述原理 ，反復(fù)注射某種抗原到動物 （ 如：兔 、 羊 、馬 ） ， 然后從其血清中分離所需的抗體 ，長期以來 ， 用經(jīng)典方法得到的抗體 ， 存在兩個嚴(yán)重的缺點： 抗體不均質(zhì) ， 是一種抗體的混合物 ， 特異性差；因而稱為多克隆抗體 。 哺乳動物的胚胎移植 哺乳動物如牛、羊等，妊娠時間長，每胎產(chǎn)子數(shù)少，繁殖速度比較慢。 常用的融合劑有： 聚乙二醇、 滅活的病毒等。根據(jù)變異細(xì)胞占全部培養(yǎng)細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，可以判斷某種物質(zhì)的毒性。 ? 1981年 Tabata和 Fujita等又用大的培養(yǎng)容器進(jìn)行細(xì)胞懸浮培養(yǎng)并獲 得了紫草寧衍生物。 植物細(xì)胞融合 植物細(xì)胞培養(yǎng) 植物細(xì)胞 A 植物細(xì)胞 B 去掉細(xì)胞壁 去掉細(xì)胞壁 原生質(zhì)體 A 原生質(zhì)體 B 原生質(zhì)體融合（誘導(dǎo)膜融合、核融合在雜種細(xì)胞第一次有絲分裂時進(jìn)行） 雜合的原生質(zhì)體 再生出細(xì)胞壁 雜種細(xì)胞 細(xì)胞分裂 分化發(fā)育 愈傷組織 雜種植株 纖維素酶、果膠酶 植物體細(xì)胞雜交 原生質(zhì)體制備（酶解法去細(xì)胞壁） 原生質(zhì)體融合（人工誘導(dǎo)） 雜種細(xì)胞的篩選和培養(yǎng)（形成愈傷組織） 雜種植株的再生與鑒定 (1) (1) (2) (3) (4) (5) 植物體細(xì)胞雜交 過程示意圖 白菜 甘藍(lán) 白菜－甘藍(lán) 植物體細(xì)胞雜交案例 植物體細(xì)胞雜交應(yīng)用 常見的植物細(xì)胞培養(yǎng)有： 花粉培養(yǎng) ? 花粉或花粉洗滌后在培養(yǎng)基上剪碎，培養(yǎng)形成愈傷組織，分化形成根莖，生長為單倍體花粉植株，經(jīng)加倍成為普通植株 花粉培養(yǎng)是目前育種重要手段之一 原生質(zhì)體培養(yǎng) ? 去壁 （ 纖維素酶 、 果膠酶 ） ? 細(xì)胞 ——原生質(zhì)體 ——愈傷組織 ——根 、莖 ——植株 。 生殖細(xì)胞（尤其是卵細(xì)胞） 體細(xì)胞比生殖細(xì)胞低很多 細(xì)胞分化與細(xì)胞全能性之間的關(guān)系 ? ① 一個受精卵發(fā)育成一個新個體，細(xì)胞除了經(jīng)過有絲分裂使細(xì)胞數(shù)目增多以外，還必須經(jīng)過細(xì)胞分化，使細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上均發(fā)生穩(wěn)定性的差異，形成不同的細(xì)胞和組織。 ④ 體內(nèi)所有細(xì)胞中受精卵全能性最高，卵細(xì)胞比體細(xì)胞潛在的全能性高，分化的植物細(xì)胞比分化的動物細(xì)胞全能性易表達(dá)，但需一定條件下離體培養(yǎng)。 1967年美國化學(xué)家 Wall和 Wani等首先從太平洋紫 杉（短葉紅豆杉， Taxus. brevifolia）樹皮中提取出來。 動物細(xì)胞培養(yǎng) 10代左右 幼齡動物組織 剪碎 胰蛋白酶處理 細(xì)胞培養(yǎng)（原代培養(yǎng)） 傳代培養(yǎng) 細(xì)胞株 細(xì)胞系 50代后 原代培養(yǎng)： 單個細(xì)胞傳至十代左右 傳代培養(yǎng)： 將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。 產(chǎn)量有限 ， “ 克隆 ” Clone， 意為 “