【正文】 采集材料要準(zhǔn)確 ? 一般采集胃內(nèi)容物、嘔吐物、剩余飼料、可疑飼料、飲水等。 定性檢驗(yàn) ? 注意 ： ? a、每種毒物的檢驗(yàn)要求做 兩種以上 的檢驗(yàn)方法，方法要具有特異性，靈敏可靠，幾種方法結(jié)果一致方能確診，只有一種出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，不能確診。 【 附：一級(jí)品（優(yōu)級(jí)純） GR，三級(jí)品（化學(xué)純） CR，四級(jí)品（實(shí)驗(yàn)室試劑） LR，五級(jí)品（生物試劑） BR。）都是根據(jù)所檢毒物的化學(xué)特性及各種反應(yīng)過(guò)程中的反應(yīng)特點(diǎn)來(lái)確定的，違反這些條件，就有使提取工作失敗，甚至發(fā)生事故的可能。 ? 檢驗(yàn)結(jié)果與臨床記錄部分符合。 ? ②血清：靜脈采血后離心沉淀，分離血清備用。主要儀器為康威（ conway）擴(kuò)散池 ?二、氫氰酸和氰化物的檢驗(yàn) ? 氫氰酸中毒是家畜采食富含 氰甙類(lèi) 植物或 被 氰化物 污染 的飼料、飲水后、體內(nèi)生成 氫氰酸 、導(dǎo)致 以 呼吸困難、震顫、驚厥 等 組織性缺氧 為特征的一種急劇性中毒病。 ? （ 2） 10%苦味酸溶液。 ?汞很易蒸發(fā)到空氣中引起危害，因?yàn)?: ?（ 1）在 0℃ 時(shí)已蒸發(fā)，氣溫愈高，蒸發(fā)愈快愈多 。 ? 有機(jī)汞可順利通過(guò)胎盤(pán)屏障而影響胎兒，而且可以通過(guò)乳汁而傳遞給幼畜，引起幼畜肢端震顫，甚至死亡。 ? （二） 預(yù) 試驗(yàn) —— 雷因希試驗(yàn) ? [原理 ] 金屬銅在鹽酸酸性溶液中，能使毒物中的汞還原成汞元素并鍍?cè)阢~的表面上，使銅片（銅絲）變成銀白色。 ? （ 2） 操作過(guò)程中經(jīng)常觀察銅片變化，一旦變?yōu)殂y白色，應(yīng)立即取出，否則因含量較高，加熱過(guò)久則生成物脫落，造成判斷錯(cuò)誤。 ? （ 二 ） 、定性檢驗(yàn) （鉻酸鉀法） ? [原理 ] 鉛鹽與鉻酸鉀和重鉻酸鉀在中性或弱酸性溶液中生成鉻酸鉛黃色沉淀。 ? 薄層層析展開(kāi)后可以用各種方法顯色。定性試驗(yàn)常用 5 20cm、 10 20cm或 20 20cm；若用于分離提純某種組分，則根據(jù)需要可制成大板。 ? 干法制板簡(jiǎn)單快速，隨用隨鋪，展開(kāi)速度快。 （ 3）點(diǎn)樣時(shí)毛細(xì)管（或血紅素吸管）必須垂直于層析板，否則不易點(diǎn)樣或?qū)迕纥c(diǎn)破。 ? （ 2） 展開(kāi)劑的量。若因污染了皮膚而引起中毒，可取被污染部位的皮膚及皮下組織、血液和肝臟。 ? （二）膽堿酯酶活性測(cè)定 ? [原理 ] ? 乙酰膽堿遇血液中膽堿酯酶分解為膽堿和乙酸，乙酸產(chǎn)生的多少，可引起 PH值的改變，用溴麝香草酚藍(lán)（ BTB）作指示劑，在一定溫度、一定時(shí)間內(nèi)，觀察顏色變化，推測(cè)酶的活力。 ? [展開(kāi)劑 ] 苯比丙酮（ 9： 1） ? [顯示劑 ] ? %氯化鈀溶液 氯化鈀 ，溶于 10%鹽酸中并稀釋至 100ml。 ? [試劑 ] ? （ 1） 10%氫氧化鈉溶液。具體操作如下： ? 取檢樣提取液 2ml于試管中，加碳酸鈉粉末 ，在水浴上加熱，使其呈飽和溶液，再加間苯二酚乙醇溶液 1滴，再置水浴上加熱，若呈紅色表明含有敵敵畏或敵百蟲(chóng)（醛類(lèi)化合物呈黃色）。 ? （ 2） 1%硝酸銀溶液（應(yīng)避光保存）。 ? [試劑 ] 9%三氯化鐵溶液。加熱至 280℃ 以上才開(kāi)始分解，所以一般的加熱不易破壞其結(jié)構(gòu)。黃曲霉毒素 M1是黃曲霉毒素 B1的羥基化代謝產(chǎn)物，也是一種強(qiáng)致癌物質(zhì)，牛乳及其制品易受到黃曲霉毒素 M1污染。出現(xiàn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育遲緩，體重減輕，母畜不孕或產(chǎn)仔少等系列癥狀。 ? [試劑 ] ? 奈氏試劑的制法是取碘化汞 ，碘化鉀 8g，共溶于少量蒸餾水中，溶解后補(bǔ)蒸餾水至 50ml，再加 25%氫氧化鈉溶液 50ml，靜置過(guò)夜，取上清液置棕色瓶中保存。若進(jìn)行儀器分析或含量測(cè)定，醇液濃縮后，再過(guò)中性氧化鋁柱純化，用氯仿洗脫，洗脫液濃縮后供檢。一般情況下，檢樣可不經(jīng)處理，直接進(jìn)行檢驗(yàn)。 ? （ 2） 1%間苯二酚乙醇溶液。 ? （ 3）鄰甲酚飽和溶液。 ? （ 5） 當(dāng)被檢動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)不良、貧血、肝臟患有疾病或應(yīng)用了磺胺藥物等時(shí)，均可影響膽堿酯酶的活性。 ? （ 2）半固體檢樣的提取 取被檢樣適量于蒸發(fā)皿中，加適量無(wú)水硫酸鈉研磨脫水，移入具塞 三角瓶中，按固體檢樣的提取方法進(jìn)行提取。 ? 紫外光下顯色 有些化合物本身能發(fā)熒光，揮去展開(kāi)劑后的薄層板可置于紫外光燈下觀察熒光斑點(diǎn)，并用針尖或鉛筆等在斑點(diǎn)位置上劃以標(biāo)記，以免停止紫外光照射后熒光消失，無(wú)法確定斑點(diǎn)位置。 ? 常用的展開(kāi)方式有上行法、下行法展開(kāi)法。點(diǎn)樣時(shí)要防止把板面點(diǎn)穿，影響分離效果。 1%的 CMC配好后，按比例加入吸附劑調(diào)勻后即可鋪板。常用的粘合劑有煅石膏、羧甲基纖維素鈉（ CMC）、淀粉等。 ? 分離速度快。 ? 鉛中毒主要是工業(yè)污染和意外大量接觸。然后投入銅片（卷） 23片（卷），直火加熱 3060min，取出銅片用清水洗凈，觀察銅片顏色。 （一）檢材及處理 ? 急性中毒以剩余飼料、嘔吐物和尿液為最好，其次為血液、胃腸內(nèi)容物、肝、腎、腸等。繼而皮膚增厚，脫毛和皮屑增多。畜禽攝取了被汞及其化合物污染的飼料和飲水能引起中毒，在臨床上以呈現(xiàn) 胃腸炎、腎炎和神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙為特征。 ? ⑵ 若檢樣是血液時(shí)，可加 20%三氯乙酸酸化并使蛋白質(zhì)凝固。亞硝酸鹽含量大時(shí)，試劑需多加數(shù)滴，才能出現(xiàn)顏色。 ?臨床上以 黏膜發(fā)紺、血液褐變、呼吸困難、胃腸道炎癥為特征。 ?四 、 檢驗(yàn)記錄及檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告 ? （一）檢驗(yàn)記錄 ? 毒物檢疫人員對(duì)每次收到的檢材按規(guī)定要求多出詳細(xì)的記錄，與送檢人員核對(duì)送檢單上所訴采集材料的時(shí)間、名稱(chēng)、重量、包裹情況，并注明驗(yàn)檢日期。 ? 2） 、在盡可能不損失毒物的前提下，所用的提取方法，應(yīng)能將干擾物質(zhì)充分排除，必要時(shí)可進(jìn)一步凈化或提純，以提高反應(yīng)的靈敏度。試驗(yàn)方法可直接飼喂或灌胃，亦可將毒物分離提取后給動(dòng)物 ih、 im、 ip。 注意 ：預(yù)試驗(yàn)只起探索的作用，不能作為診斷的依據(jù)，尚未做確診試驗(yàn)，不能作出結(jié)論。 ? （二）檢材的采取，保管和裝送 （回答第 3個(gè)問(wèn)題） ? 通過(guò)一般診斷，大致上可確定是否為中毒和可能是哪種或哪幾類(lèi)毒物中毒，接著要進(jìn)行的就是毒物檢驗(yàn)，毒檢的第一步就是檢材的采取、保管和裝送 的 基本要求 ： ? 送檢要及時(shí) ? 最好要當(dāng)天采集當(dāng)天送，送檢材料要低溫保存（夏季在冷藏瓶），以減少毒物的損失和防止檢材的腐敗，也可在不影響毒物檢驗(yàn)的情況下，置入純酒精中送檢。 ?一、毒物檢驗(yàn)的目的 ? 診斷性的目的 ? 通過(guò)對(duì)進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)的毒物的分離鑒定，查清毒物及中毒原因。 ? 重金屬中毒、氟中毒、硒中毒等可采集臟器、尿、被毛、土壤等，在剖檢死亡動(dòng)物中，應(yīng)根據(jù)動(dòng)物的種類(lèi)及中毒時(shí)間選取材料。 ? b、檢驗(yàn)時(shí)同時(shí)作空白對(duì)照試驗(yàn) （ 陰性對(duì)照 ）和已知樣品對(duì)照試驗(yàn) （ 陽(yáng)性對(duì)照 ） ，陰性對(duì)照檢查試劑及器皿有無(wú)問(wèn)題，陽(yáng)性對(duì)照檢驗(yàn)反應(yīng)是否正常進(jìn)行，并作為判定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。 】 ? （ 2）準(zhǔn)備足夠的試劑和器皿。 ? 4） 、為了減少毒物在提取過(guò)程中的損耗，提取方法應(yīng)盡可能簡(jiǎn)化，提取液轉(zhuǎn)移、脫水、脫色時(shí)，應(yīng)將原器皿及殘?jiān)蠚埩舻亩疚锍浞窒疵撆c收集。 ? 檢驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性，現(xiàn)場(chǎng)也發(fā)現(xiàn)致病毒物，但與尸變不一致，首先考慮送檢材料是否是該中毒動(dòng)物的檢驗(yàn)材料。 ? ? 樣品采取時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng)： ? ①應(yīng)當(dāng)無(wú)化學(xué)污染或殘?jiān)? ? ②樣品不能用水沖洗，可能除去殘毒；水可污染樣品； ? ③樣品保存條件：組織樣品，應(yīng)在冰凍條件下送往實(shí)驗(yàn)室；血清和血液樣品，不應(yīng)冰凍，但可低溫保存； ? ④樣品內(nèi)不要加防腐劑或福爾馬林，除非有特殊原因應(yīng)加以說(shuō)明；⑤樣品應(yīng)注明畜主姓名、畜別或號(hào)數(shù)、死亡日期、取料日期、送檢要求及送檢單位等。 ? 一般多見(jiàn)于 牛和羊 ，馬、豬、犬偶爾發(fā)生。 ? （ 3）飽和碳酸鈉溶液。每增 10℃ 蒸發(fā)速度約增加 ～ ，空氣流動(dòng)時(shí)蒸發(fā)更多。 診斷 ? 病史調(diào)查 ： 主要由于誤食了含有西力生、賽力散等汞制劑處理的種子，或含汞制劑的農(nóng)藥密閉不嚴(yán)，使豬受到汞蒸氣的危害而引起。 ? [試劑 ]： ? （ 1） 。 ? （ 3） 已腐敗的樣品做此試驗(yàn)時(shí)，最好將樣品調(diào)節(jié)至酸性后在水浴上先加熱 10min，以除去硫化氫，再加入銅片，防止銅片表面生成硫化物變黑。 ? [試劑 ] 10%鉻酸鉀或重鉻酸鉀溶液 ? [操作 ] ? 取檢液少許，加 10%鉻酸鉀或重鉻酸鉀溶液數(shù)滴，如有鉛離子存在，則出現(xiàn)黃色沉淀，該沉淀能溶于氫氧化鈉及硝酸中?？梢杂脧?qiáng)腐蝕性顯色劑，甚至可以高溫灼燒。裁好的玻璃邊緣用砂輪磨光。但干板板面容易破壞，移動(dòng)時(shí)要特別小心，而且不易保存。 （ 4）點(diǎn)樣速度要快，以免影響薄層板的活度，使分離效果受到影響。將展開(kāi)槽平放在臺(tái)面上時(shí)，液層厚度以 5— 7mm為宜；斜放與臺(tái)成 15— 20度角時(shí)，以液面不浸及樣點(diǎn)為度。 二、有機(jī)磷農(nóng)藥的檢驗(yàn) ? 提取與分離 有機(jī)磷農(nóng)藥絕大多數(shù)是脂溶性毒物，易溶解在有機(jī)溶劑中。 ? [試劑 ] ? 乙酰膽堿試紙制備。 ? %磷聯(lián)甲苯胺（甲土力?。┮掖既芤?。 ? （ 2） 6mol/L（或濃 HCl）鹽酸。 ? 以上僅介紹了 3種有機(jī)磷農(nóng)藥的定性檢驗(yàn)方法，如需進(jìn)一步確定為何種農(nóng)藥，可查閱有關(guān)毒物檢驗(yàn)資料。 ? （ 3）碘化鎘汞溶液。 ? [操作 ] 取提取濃縮液少許，加無(wú)水乙醇 ，緩慢加 9%三氯化鐵溶液 1—— 2滴，若含有敵鼠或敵鼠鈉鹽，有 紅色 懸浮物生成。黃曲毒素主要有 B B G1與 G2等 4種，又以 B1的毒性最強(qiáng)。 ? 黃曲霉毒素 B1及總量試劑盒 ? [檢測(cè)原理 ]該試劑盒采用免疫競(jìng)爭(zhēng)法分析原理結(jié)合膠體金標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。其主要變化特征為肝臟出現(xiàn)慢性損傷，如肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞變性、肝硬化等。 ? （ 二 ）奈氏試劑反應(yīng) ? [原理 ] ? 氟乙酰胺在強(qiáng)堿性條件下，可水解生成氨，氨與奈氏試劑作用，生成桔紅色沉淀。 ? 取固體檢樣或半固體 （預(yù)先在水浴上將水分揮干）檢樣適量，置于具塞三角瓶中，加無(wú)水乙醇適量，在水浴上溫浸 15min，過(guò)濾，濾液在水浴上揮干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇 溶解，濾去不溶物，濾液濃縮至少量供定性檢驗(yàn)用。 ?一、磷化鋅的檢驗(yàn) ? （一）檢材的采取及處理 ? 磷化鋅中毒時(shí)，可采取嘔吐物，胃內(nèi)容物和可疑的飼料作為檢樣。 ? [試劑 ] ? （ 1） 10%氫氧化鈉溶液。 ? （ 2）鋅粉。 ? （ 4） 如無(wú)溴化乙酰膽堿，可用氯化乙酰膽堿代替，效果一樣。加氯仿或苯（ 403020ml）浸泡，并不斷振搖， 1h后過(guò)濾，收濾液于蒸發(fā)皿中，殘?jiān)寐确禄虮较磧纱?，合并洗液于蒸發(fā)皿中，在 60℃ 以下水浴上蒸發(fā)近干，供檢。顯色后的薄層板應(yīng)立即觀察，否則置于空氣中過(guò)久，斑點(diǎn)上的顏色會(huì)因揮發(fā)而褪去。展開(kāi)槽可分為立式和臥式兩種。如果點(diǎn)樣量較大或?yàn)榱藵饪s的目的需要反復(fù)點(diǎn)樣時(shí)，每次點(diǎn)樣的量不可過(guò)大，樣點(diǎn)直徑必須控制在 3mm以?xún)?nèi)，重復(fù)點(diǎn)樣時(shí)，必須待前次點(diǎn)樣的樣點(diǎn)干后再點(diǎn)，以免樣點(diǎn)直徑擴(kuò)大?；蛘呷?CMC1g于燒杯中，加蒸餾水 100ml，在液面外和燒杯上劃一標(biāo)記，然后直火加熱至完全溶解，并補(bǔ)足消耗的水分。若在吸附劑中加入一定量的粘性物質(zhì)即粘合劑，便可制成較牢固的薄層板。 ? 設(shè)備簡(jiǎn)單、容易操作。各種毒物均可發(fā)生，反芻動(dòng)物最敏感，主要發(fā)生于牛、羊、家禽。先在水浴上加熱 10min，以除去硫化物的干擾。 ? （ 3）注射用硫代硫酸鈉 13g加注射用水 1020ml，溶解后，一次靜脈注射，每天 23次。有些動(dòng)物皮膚發(fā)癢，啃咬皮膚、擦癢等。 ?一 、汞化合物的檢驗(yàn) (砷化物的檢驗(yàn) ) ?汞含 金屬汞、無(wú)機(jī)汞和有機(jī)汞 三種形式，其中有機(jī)汞的毒性較大。 ? [說(shuō)明 ] ? ⑴ 本方法不需水蒸餾，可用檢樣直接檢驗(yàn)，所以具有操作簡(jiǎn)便，快速等優(yōu)點(diǎn)。 ? [操作 ] 取檢液 1— 2滴，置白瓷反應(yīng)板上，加 1— 2滴聯(lián)苯胺冰醋酸溶液，如有亞硝酸鹽存在，即出現(xiàn) 紅棕色 。 亞硝酸鹽中毒 是由于采食 富含 亞硝酸鹽或硝酸鹽 的飼料，引起 高鐵（ Fe3+ ）血紅蛋白 血癥 ，導(dǎo)致組織缺氧的一種急性、亞急性中毒。 ? 高效液相層析法有哪些？ ? 1） .吸附層析 ? 2） .分配層析 ? 3） .離子交換層析 ? 4） .凝膠滲透層析 ? HPLC的特點(diǎn) ? 具有高壓、高速、高效、高靈敏度等特點(diǎn)，因此廣泛應(yīng)用于氨基酸、蛋白質(zhì)、甾族化合物、糖類(lèi)、有機(jī)酸、生物