【正文】 ℃，5分鐘（酶失活），反應(yīng)結(jié)束后，將所得的cDNA于20℃保存。然后從原始管中取稀釋液50181。反應(yīng)條件如下：95℃預(yù)變性30s。對于某一特定的產(chǎn)物，其DNA鏈的長度和C+G含量決定其Tm，因此其Tm值固定。4討論胰島素樣生長因子對細(xì)胞生長分化具有重要的調(diào)控作用，其水平與動物生產(chǎn)性能密切相關(guān)。在背最長肌中，IGFBP6基因的表達(dá)量極顯著高于其它組織，在生后0d表達(dá)量最高，之后呈現(xiàn)下降趨勢。Note：A：liver；B：lung；C：heart；D：longissimusdorsi；E：semimembranosus；F：musculustriceps；A肝臟日齡Day表達(dá)量均值Expression of Mean公母均值Male and Female of Mean標(biāo)準(zhǔn)誤Standard Error of Mean0d ♀ ♂30d ♀ ♂60d ♀ ♂90d ♀ ♂120 ♀ ♂B肺臟日齡Day表達(dá)量均值Expression of Mean公母均值Male and Female of Mean標(biāo)準(zhǔn)誤Standard Error of Mean0d ♀ ♂ 30d ♀ ♂60d ♀ ♂90d ♀ ♂120 ♀ ♂C心臟日齡Day表達(dá)量均值Expression of Mean公母均值Male and Female of Mean標(biāo)準(zhǔn)誤Standard Error of Mean0d ♀ ♂30d ♀ ♂60d ♀ ♂90d ♀ ♂120 ♀ ♂D背最長肌日齡Day表達(dá)量均值Expression of Mean公母均值Male and Female of Mean標(biāo)準(zhǔn)誤Standard Error of Mean0d ♀ ♂30d ♀ ♂60d ♀ ♂90d ♀ ♂120 ♀ ♂E半膜肌日齡Day表達(dá)量均值Expression of Mean公母均值Male and Female of Mean標(biāo)準(zhǔn)誤Standard Error of Mean0d ♀ ♂30d ♀ ♂60d ♀ ♂90d ♀ ♂120 ♀ ♂F臂三頭肌日齡Day表達(dá)量均值Expression of Mean公母均值Male and Female of Mean標(biāo)準(zhǔn)誤Standard Error of Mean0d ♀ ♂30d ♀ ♂60d ♀ ♂90d ♀ ♂120 ♀ ♂ A BC D E F圖5 IGFBP6基因的表達(dá)差異 The difference of relative expression of IGFBP6 gene in six tissues注：A：肝臟；B：肺臟；D：心臟；E：背最長??；F：半膜肌；G：臂三頭肌Note：A：liver；B：lung；C：heart；E：longissimusdorsi；F：semimembranosus；G：musculustriceps；表5 IGFBP6基因的發(fā)育性變化 The difference of relative expression of IGFBP6 gene in eight tissues at different growth points日齡Day肝臟Liver肺臟Lung心臟Heart背最長肌Longissimusdorsi半膜肌Semimembranosus臂三頭肌Musculustriceps0d30d60d90d120 IGFBP2基因表達(dá)的發(fā)育性變化如圖4和表5可知，肝臟中IGFBP6基因的表達(dá)量為生后120d＞生后90d＞生后60d＞生后0d＞生后30d。得到2條Realtime PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)熒光定量PCR儀繪制的PCR動力學(xué)曲線，以樣品的拷貝數(shù)的對數(shù)為橫坐標(biāo)，Ct值為縱坐標(biāo)，分別繪制IGFBP6和βactin基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。l，加入到相應(yīng)的反應(yīng)體系中，設(shè)定退火溫度梯度為55℃65℃，分別對每個基因的熔解曲線進(jìn)行分析，檢測引物的特異性。l%的瓊脂糖凝膠電泳，檢測RNA質(zhì)量，對符合要求的總RNA樣品，用核酸蛋白檢測儀在260nm和280 nm下測定吸光度，按A260/ () 評估總RNA樣品純度。IGFBP12結(jié)構(gòu)中沒有糖基化的現(xiàn)象，但在其C端區(qū)域均保留有ArgGlyAsp(RGD)一致序列。