翻譯好的羅氏公司tunel試劑盒操作說明書(留存版)
【正文】 石蠟切片使用 1500u/ml的DNase I 一般樣本使用10u/ml DNase I組織樣本從載玻片脫落組織樣本被酶從玻片消化下來降低蛋白酶K的處理時(shí)間常見問題的原因及推薦解決方案TdT dilution buffer：60 mM KPB 緩沖液（），150 mM KCl， 1 mM 2mercaptoethanol， 50 % Glycerol。4. TUNEL反應(yīng)液臨用前配制，短時(shí)間在冰上保存。本試劑盒適用于組織樣本（石蠟包埋、冰凍和超薄切片）和細(xì)胞樣本（細(xì)胞涂片）在單細(xì)胞水平上的凋亡原位檢測。梯度酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片。光照紫外線導(dǎo)致包埋試劑的聚合（如：甲基丙烯酸會(huì)導(dǎo)致樣本DNA的斷裂）嘗試改用其它包埋材料或其它聚合試劑在固定組織時(shí)樣本DNA已斷裂（內(nèi)源核酸酶的作用）確保樣品取樣后立即固定或通過肝靜脈灌注固定使用了不適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ?，例如一些酸性固定液采用推薦的固定液固定后某些核酸酶活性依然較高導(dǎo)致DNA斷裂用含有dUTP和 dAPT的溶液封閉標(biāo)記率低如果以乙醇或甲醇固定的樣本則標(biāo)記效率較低（因?yàn)樵诠潭〞r(shí)染色質(zhì)未能與蛋白質(zhì)交聯(lián)，而在操作中丟失）用溶于PBS %多聚甲醛固定或福爾馬林或戊二醛固定。8. 試劑保存；未打開的試劑盒貯存在20℃（15~25℃）；3號(hào)液（converter POD）液一旦解凍，以后就保存在4℃（2~8℃）下，至少在6 m內(nèi)穩(wěn)定，避免再次凍存；TUNEL反應(yīng)液臨用前配好后，放至冰上直至使用。5. PBS漂洗2次；6. 制備TUNEL反應(yīng)混合液：處理組用50μl 1號(hào)液+450μl 2號(hào)液混勻；而陰性對(duì)照組僅加50μl 2號(hào)液，陽性對(duì)照組先加入100μl DNase 1，反應(yīng)在15~25℃10min，后面步驟同處理組。具
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