【正文】 腦 里 的 彩 虹 綠色熒光 蛋白 為 什 么 重要？ ? 錢永健如是說 ? 在 追蹤 細胞內(nèi)移 動 的分子上，綠色 熒光 蛋白是非常方便的「道具」，有助 于追蹤腦神經(jīng)細胞 的 發(fā)育過程 及癌 細胞 的 擴散 情況， 一舉一動 都逃不 過 科 學(xué) 家的眼睛， 這回拿下 諾貝爾獎 ，也 象征醫(yī)學(xué) 科技又向前邁進 一大步。 ? 用于臨床檢驗 ? 示蹤病原菌 GFP在腫瘤研究中的應(yīng)用 ? GFP在腫瘤研究中的應(yīng)用 GFP在蛋白質(zhì)細胞定位中的應(yīng)用 An image of a single mamalian cell with greentored fluorescent Dendra marking fibrillarin, a protein concentrated in nucleoli, which are small, round bodies in the cell39。 ? 用于植物基因表達調(diào)控研究 基因的表達可進行活體檢測，利用 GFP基因可以很方便地研究基因表達的時空性。 綠色熒光蛋白的發(fā)光機制 475nm 504nm 綠色熒光蛋白的發(fā)光機制 ? 在離體狀態(tài)下 GFP對高溫 (70OC)、堿性、除垢劑、鹽、有機溶劑和大多數(shù)普通酶 (鏈霉蛋白酶除外 )有較強抗性 ? GFP融合蛋白的熒光靈敏度遠比熒光素標記的熒光抗體高，抗光漂白能力強，因此更適用于定量測定與分析。 但 GFP對某些封片指甲油特別敏感。 1995年，他完成的單點突變（ S65T）顯著提高了 GFP的光譜性質(zhì)，起熒光強度和光穩(wěn)定性也大大增強。1962年從一種水母中發(fā)現(xiàn)了熒光蛋白，被譽為生物發(fā)光研究第一人。 鈣離子 藍光 發(fā)光過程 下村修 ? 下村修因此成為首位從水母中分離出 GFP，并發(fā)現(xiàn)這種蛋白質(zhì)在紫外光下呈亮綠色的科學(xué)家，他被譽為生物發(fā)光研究的第一人 ?1992年 Prasher等克隆了 GFP基因的 cDNA，并分析了GFP的一級結(jié)構(gòu)。發(fā)射光譜最大峰值為 509nm(綠光 ),并帶有峰值為 540nm的側(cè)峰 (Shouder)。 GFP熒光生色團 翻譯出的蛋白質(zhì)折疊環(huán)化之后 , 在 O2 存在下 ，分子內(nèi) Gly 67的酰胺對第 Ser 65的羧基的親核攻擊形成第 5 位碳原子咪唑基 , Tyr 66的 α2β鍵脫氫反應(yīng)之后，導(dǎo)致芳香團與咪唑基結(jié)合。 藍色熒光蛋白 EBFP：增強藍色熒光蛋白； ECFP：增強藍綠色熒光蛋白 EGFP：增強綠色熒光蛋白； EYFP：增強黃色熒光蛋白 綠色熒光蛋白變異體的發(fā)色基團結(jié)構(gòu) 基于 GFP的傳感器 一種被修飾過的用來感應(yīng)鋅離子濃度的藍色熒光蛋白：當紅色的鋅離子連接到藍色的被修飾過的發(fā)色團上后，蛋白質(zhì)會發(fā)出亮度增強一倍的熒光從而形成容易被檢測到的可見信號。 Scott 等以 GFP 紅移突變體作為標記基因 ,有效地追蹤了乳酸細菌在復(fù)雜厭氧系統(tǒng)中的運移。 我國首例熒光轉(zhuǎn)基因克隆豬產(chǎn)下熒光豬崽 2022年 1月 7日，東北農(nóng)業(yè)大學(xué)劉忠華教授主持的轉(zhuǎn)基因克隆豬課題獲得成功。 中國第一例轉(zhuǎn)基因猴子在昆明落地 ? 南方都市報 發(fā)布時間： 20221112 08:31 The head of a barley plant transformed with a gene for green fluorescent protein (GFP) using the gene gun. (The red head is untransformed。 Ikeno等分別以 GFP 和 Ps 作為報告基因和啟動子，轉(zhuǎn)入 E. coli 重組子中，用以檢測水體中微量的苯衍生物。以 GFPS65T基因作為篩選標記的新型克隆載體，以綠白斑篩選法篩選陽性重組子，替代 Lacz藍白斑篩選，不需 X一 gal。 綠色熒光蛋白的發(fā)光基團 Stereo view of the fluorophore and its environment. His148, Gln94 and Arg96 can be seen on opposite ends of the fluorophore and probably stabilize resonant forms of the fluorophore. Charged, polar, and nonpolar side chains all contact the fluorophore in some way. 綠色熒光蛋白的發(fā)光基團 His48 Gln94 Arg96 Model of the fluorophore and its environment superposed on the MADphased electron density map at 197。 ? 盡管 450～ 490nm(藍光 )是 GFP的副吸收峰，但由于長波能量低，細胞忍受能力強 ,因此更適合于活體檢測。 沙爾菲 ? 如果說下村修是綠色熒光蛋白的“接生婆”，沙爾菲則是綠色熒光蛋白的價值發(fā)現(xiàn)者。 Boston University Medical School Massachusetts, MA, USA Columbia University New York, NY, USA University of California San Diego, CA, USA。 綠色熒光蛋白的研究史 ? 1