【正文】 用的電壓 4 瓊脂糖的種類 5 電泳緩沖液 6 嵌入染料的存在 7 染色劑溴化乙錠插入雙鏈 DNA造成其負(fù)電荷減少、剛性和長(zhǎng)度增加，因此，線性 DNA染料復(fù)合物在凝膠中的遷移率約降低 15%。 瓊脂糖凝膠載樣緩沖液 載樣緩沖液是上樣時(shí)與樣品一起加入泳道的。 注意：總液體量不宜超過(guò)三角錐瓶的 50%容量。瓊脂糖的結(jié)構(gòu)單元是 D半乳糖和 L半乳糖；瓊脂果膠是由許多更小的分子組成的異質(zhì)混合物。分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)專題 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)專題 凝膠電泳技術(shù) ? 瓊脂糖凝膠電泳 ? 聚丙烯酰胺凝膠電泳 分子雜交技術(shù) ? Southern blot ? Northern blot 質(zhì)粒提取、細(xì)菌總 DNA提取 電泳技術(shù)簡(jiǎn)介 什么是電泳技術(shù)？ 電泳法，是指帶電荷的供試品（蛋白質(zhì)、核苷酸等）在 惰性支持介質(zhì) （如紙、醋酸纖維素、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等）中，于電場(chǎng)的作用下，向其對(duì)應(yīng)的電極方向按各自的速度進(jìn)行泳動(dòng)，使組分分離成狹窄的區(qū)帶，用適宜的檢測(cè)方法記錄其電泳區(qū)帶圖譜或計(jì)算其百分含量的方法。它們的結(jié)構(gòu)相似，但瓊脂果膠帶硫酸根和羧基組分，凝膠能力差。 3. 在微波爐中加熱溶解瓊脂糖 注意：必須保證瓊脂糖充分完全溶解，否則，會(huì)造成電泳圖像模糊不清。載樣緩沖液有三個(gè)作用： 增加樣品密度以保證 DNA沉入加樣孔內(nèi)； 使樣品帶有顏色便于上樣操作； 其中的染料在電場(chǎng)中以可以預(yù)測(cè)的泳動(dòng)速率向陽(yáng)極遷移。 DNA電泳常見(jiàn)問(wèn)題分析 問(wèn)題 原因 解決辦法 DNA帶模糊 1) DNA降解 避免核酸酶污染 2) 電泳緩沖液陳舊 電泳緩沖液多次使用后，離子強(qiáng)度降低， pH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果。 瓊脂糖凝膠載樣緩沖液 溴酚藍(lán)在瓊脂糖凝膠中遷移速率是二甲苯氰FF的 ，這一特性與瓊脂糖凝膠的濃度無(wú)關(guān)； 在 TBE瓊脂糖凝膠電泳中溴酚藍(lán)的速率約與長(zhǎng)約 300bp的線性雙鏈 DNA相同，而二甲苯氰 FF約與長(zhǎng) 4kb的 DNA相同。微波爐中加熱時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。質(zhì)量較好的瓊脂糖硫酸根含量比較低，通常在 %以下，電內(nèi)滲比較小，通常在%以下。 自由電泳包括