【正文】 織也得到增殖 , 分化得到的苗必須及時(shí)轉(zhuǎn)移，否則苗的基部又會(huì)轉(zhuǎn)化為愈傷組織。 1 材料和方法 試驗(yàn)材料 供試材料為寧夏農(nóng)科院枸杞研究所培育的高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)枸杞新品種 —— 寧杞１號(hào)。增殖培養(yǎng)基以 MS + 6BA + IBA 。用無(wú)菌水淋洗 3～ 5 次后 ,在無(wú)菌條件下將葉片橫切成 1 厘米左右的切段 ,接種在 Murashige和 Skoog 培養(yǎng)基上 ,培養(yǎng)基附加激動(dòng)素 (K),吲哚乙酸 (IAA) 或 ,IAA 枸杞髓組織離體培養(yǎng)及高頻率植株再生的研究 * 曹有龍 陳 放 羅 青 曲 琳 摘 要 ： 枸杞髓組織在 4 種 MS 培養(yǎng)基上都能誘導(dǎo)出愈傷組織，誘導(dǎo)率%～ 100%。 表 2 2,4D 對(duì)枸杞愈傷組織的影響 Table 2 Effects of 2,4D on calli of Lycium barbarum L. 培養(yǎng)基編號(hào) medium 激素濃度 (mg/L) Hormone concentration 生長(zhǎng)情況 Growth status 褐化時(shí)間（ d） Time of calli bee brown 愈傷組織特點(diǎn) Calli characteristics （ 1） MS+2,4D2 ++++ 10 白色水質(zhì)狀，生長(zhǎng)快 （ 2） MS+2,4D1 +++ 12 白色水質(zhì)狀，生長(zhǎng)快 （ 3） MS+2, ++ 25 白色松散，生長(zhǎng)較快 （ 4） MS+2,+CH ++ 28 白色松散，生長(zhǎng)較快 （ 5） MS+2,+ + 2 白色緊密，顏色由白 轉(zhuǎn)綠 （ 6） MS++ +++ － 淡黃色，顆粒狀 注 :愈傷組織生長(zhǎng)情況分四級(jí) :+很少 ++少 +++中等 ++++大量 Four classes were divided according to the callus growth:+very small ++small +++medium ++++large. 表 2 可以看出 , 2, 4D 對(duì)枸杞愈傷組織的形成在一定范圍內(nèi) (～2 mg／ L)隨 2, 4D 濃度的增加 , 愈傷組織生長(zhǎng)加快 , 但褐化時(shí)間提前。 植物激素 2,4D 在枸杞髓組織的愈傷組織誘導(dǎo)中有重要的作用，但高濃度的 2,4D 不利于愈傷組織的誘導(dǎo)，而以 mg／ L 效果最佳，誘導(dǎo)率達(dá) 100 %。在栽培條件下，它既能在海拔 2807． 7m、年平均氣溫 4． 2。當(dāng) 4 月初氣溫達(dá) 5℃ 以上時(shí)，春芽開(kāi)始萌動(dòng)，花芽開(kāi)始分化； 4 月中旬氣溫達(dá) l0％以上時(shí)，開(kāi)始展葉； 12。據(jù)測(cè)定，在同一株樹(shù)上，樹(shù)冠頂部光照充足，鮮果的可溶性固形物含量為 16． 33％，而樹(shù)冠中部光照弱的果實(shí)可溶性固形物含量為13． 68％。據(jù)調(diào)查，枸杞在地下水位 1． 5m 以下、 20。甚至在含鹽量達(dá) 0． 5％l． 0％的輕鹽土上也能生長(zhǎng)。 2250 千克／ hm2；寧夏主產(chǎn)區(qū)寧夏枸杞能在 pH 值 8． 2。在葉色綠、果枝節(jié)間短、粗壯、刺少、生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害危害的植株上，選摘成熟而果粒大、果色鮮紅、含糖量較高的果實(shí)。 (二 )扦插育苗它是用植物體的某一營(yíng)養(yǎng)器官繁殖成新植株，是無(wú)性繁殖方法中最簡(jiǎn)單易行的方法。用枸杞生根劑 1 號(hào)加水 2500 倍，再 加滑石粉調(diào)成糊狀，或枸杞生根劑 2 號(hào)加水 1000 倍，速沾插條下端 11． 5cm 處后扦插。不過(guò)二者也好區(qū)別，由于根蘗苗是從母樹(shù)根上長(zhǎng)出的，它的末端帶有 T形根 ；而實(shí)生苗的主根發(fā)達(dá)，無(wú) T形根。其中，誘導(dǎo)枸杞愈傷組織和腋芽分化的培養(yǎng)基是 MS+芐基腺嘌呤 (BA)0． 5m9／ L+萘乙酸 (NAA)0． 5m9／ L+吲哚丁酸 (mA)lm9／ L+激動(dòng)素 (Kt)3m9／ L；繼代的培養(yǎng)基是 Ms+芐基腺嘌呤 lm9／ L+生長(zhǎng)素 0． hn9／ L；生根的培養(yǎng)基是 l／ 2MS+吲哚丁酸 0． 1m9／ L。單獨(dú)配制，單獨(dú)保存。培養(yǎng)條件同上。嫩枝扦插在生根前每天噴 24 次水。 8．防 蟲(chóng) 構(gòu)杞幼苗的害蟲(chóng)主要有枸杞蚜蟲(chóng)、枸杞癭螨、枸杞銹螨、構(gòu)杞木虱、枸杞負(fù)泥蟲(chóng)、地老虎和蠐螬等。 2．栽植密度 栽植密度對(duì)枸杞的產(chǎn)量、品質(zhì)、樹(shù)冠、葉面積、結(jié)果枝數(shù)、果實(shí)千粒重及可溶 性固形物含量等都有影響。一般幼齡枸杞，樹(shù)冠未定型，雜草容易滋生，中耕除草要勤；樹(shù)冠定型后，中耕除草次數(shù)可酌減。秋施基肥的好處是： ① 此時(shí)枸杞樹(shù)地上部已開(kāi)始落葉，逐步進(jìn)入休眠期，樹(shù)液停止流動(dòng)，挖斷了根系對(duì)樹(shù)體影響不大； ② 秋施農(nóng)家肥比春施農(nóng)家肥腐熟早，有利于根系早日吸 收； ③ 若能施人部分速效肥，則可在當(dāng)年吸收，有利于樹(shù)體內(nèi)養(yǎng)分積累，提高樹(shù)體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)水平，增強(qiáng)抗寒能力，對(duì)翌年生長(zhǎng)結(jié)果都很有利。環(huán)狀溝施：在樹(shù)冠邊緣下方，挖深 30cm、寬 40cm 的環(huán)狀施肥溝。霧滴越細(xì)越好，以葉面不滴水為度。 15 天灌 l 次水，這一時(shí)期共需灌水 34 次，其中 2 次結(jié)合追肥進(jìn)行。直觀感覺(jué)是，對(duì)于壤土或沙壤土，取根系層土手握成團(tuán)，擠壓不易碎裂為宜，否則應(yīng)加大灌水量。所以修剪時(shí)，只考慮骨干枝和結(jié)果枝組的搭配及培養(yǎng)，不用考慮小枝上是留里芽還是留外芽，里芽或外芽對(duì)枸杞生長(zhǎng)結(jié)果沒(méi)有多大影響。這種樹(shù)形主枝多，但主枝不大，小側(cè)枝多，樹(shù)冠向空間發(fā)展形成高而窄的錐形樹(shù)冠。 五、枸杞的整形修剪技術(shù) (一 )幼齡枸杞的整形修剪定植后的枸杞在大量結(jié)果前的 45 年為幼齡期。第 3 年隨著主干增粗，支撐能力增強(qiáng)，仍采取留徒長(zhǎng)枝剪頂?shù)姆椒ㄟM(jìn)行修剪整形，在第 2 年培養(yǎng)的骨干枝上，對(duì)發(fā)生的徒長(zhǎng)枝于 2030cm 處短剪。因此，在整形修剪時(shí)還必須靈活處理，做到因樹(shù)修剪， 隨枝作形。有些地區(qū)枸杞黑果病 嚴(yán)重，除了用藥劑防治外，在 7 月下旬至 8 月初進(jìn)行一次全面修剪，剪去全部小枝，發(fā)出的新枝還能在當(dāng)年秋季開(kāi)花結(jié)果。通過(guò)生產(chǎn)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的總結(jié)，對(duì)于干果產(chǎn)量在 3000 千克／ hm2的寧杞 l 號(hào)， 20cm 以上的當(dāng)年生結(jié)果枝一般需要 37． 5 萬(wàn)一 45． O 萬(wàn)支／ l。樹(shù)冠補(bǔ)頂?shù)姆秶话悴淮?，高度也較低。 補(bǔ)形修剪主要是通過(guò)對(duì)徒長(zhǎng)枝的修剪，促使發(fā)生側(cè)枝，用側(cè)枝補(bǔ)滿樹(shù)冠所空缺的部分。為了不漏剪，應(yīng)從上到下，圍繞樹(shù)冠順一定方向修剪。一般相隔 58天就需抹芽、短截或疏剪一次。 經(jīng)過(guò) 45 年的整形修剪，就會(huì)形成一個(gè)樹(shù)高 1． 6m 左右、上層冠幅 1． 5m 左右、下層冠幅 2． Om 左右、根頸粗 5。 培養(yǎng)基層：定植后的第 2 至第 4 年，主要是培養(yǎng)樹(shù)冠基層，使樹(shù)冠不斷增高、擴(kuò)大、充實(shí)，第 4 年樹(shù)高達(dá)到 1． 2m，冠幅 1． 21． 5m。 5． 鱉曬蓋 樹(shù)形枸杞樹(shù)進(jìn)入盛果期后，為了控制樹(shù)高的生長(zhǎng)，每年修剪時(shí)都將樹(shù)冠頂部萌發(fā)的新枝全部剪掉，于是出現(xiàn)了樹(shù)冠頂部主枝及其他骨干枝裸露的現(xiàn)象，茨農(nóng)稱(chēng)之為 鱉曬蓋 。 ② 開(kāi)心半圓形有 3． 5 個(gè)大主枝，無(wú)中央主干，靠主枝發(fā) 側(cè)枝及向下延長(zhǎng)枝構(gòu)成樹(shù)冠，樹(shù)冠枝條層次不明顯，樹(shù)膛內(nèi)部空間大，通風(fēng)透光好。 5．通過(guò)修剪可除去病、蟲(chóng)枝，縮小病、蟲(chóng)源，減弱病、蟲(chóng)害蔓延的速度及減少病、蟲(chóng)害。因?yàn)殍坭綀@土壤在冬季經(jīng)過(guò)數(shù)月風(fēng)吹日曬變得很干了，所以頭水的灌溉量要大些。 1．采果前的生長(zhǎng)結(jié)實(shí)期指從 4 月下旬至 6 月中旬的一個(gè)半月時(shí)間。一般在 67 月第一結(jié)果期噴 4 次， 8。一般施肥量是大樹(shù)比小樹(shù)多，弱樹(shù)比旺樹(shù)多，結(jié)果多的樹(shù)比結(jié)果少的樹(shù)多，瘠薄沙地比深厚肥沃的壤土多。 基肥以農(nóng)家肥為主，化肥為輔。如果秋季枸杞樹(shù)上花果多，翻曬秋園的時(shí)間可以推遲到秋果采完的 9 月下旬或 10 月上旬。當(dāng)株間郁閉時(shí)，挖去臨時(shí)性苗，移栽到新栽植的枸杞園里。每瞄保苗 22． 530． 0 萬(wàn)株。 1．一般播后 710 天出苗，凡覆草保墑的，待出苗時(shí)要及時(shí)撤去覆草；凡覆蓋地膜播種或插條發(fā)芽的，也要及時(shí)揭膜，以免妨礙苗木生長(zhǎng)。 ① 芽的誘導(dǎo)將經(jīng)過(guò)消毒的枸杞嫩莖，在接種臺(tái)的無(wú)菌條件下切成 0． 5em 長(zhǎng)的帶 12個(gè)芽原基的小段，接種在 MS+激動(dòng)素 3m9／ L+芐基腺嘌呤 0． 5meCL+萘乙酸 0． 5m9／ L+吲哚丁酸 lm9／ L 的分化培養(yǎng)基上，在 溫度 (25177。 ② 微量元素：培養(yǎng)基中用量小的幾種鹽類(lèi) (除鐵外 )，常 配成 l00 倍或 l000 倍的混合母液，用時(shí)每配 1000ml 取 10ml 或 lml。 自行設(shè)計(jì)一般需要以下一些主要儀器設(shè)備： (1)大型儀器：高壓蒸汽滅菌鍋、干燥箱、分析天平 (精確度 0． 1mg)、電冰箱、超凈工作臺(tái)、搖床、蒸餾水發(fā)生器； (2)常用儀器用品：扭力天平 (感量 19 或 0． 19)、三角瓶 (50ml、 100m1)、移液管 (0． 2ml、lml、 2ml、 5na)、量筒 (5ml、 10ml、 202 50ml、 100ml、 500ml、 10001111)、燒杯 (10ml、50ml、 100ml、 500ml、 1000ml、 2022m1)、試管 (2cm X 15cm)、試劑瓶 (50ml、 100m1)、鋁鍋、電爐、酒精燈、鑷子、解剖刀、彎頭剪子、培養(yǎng)皿 (直徑 6cm)、接種紙、石蕊試紙、紗布等； (3)培養(yǎng)架：高 1． 7m，長(zhǎng) l． 5m，寬 0． 4m，每層問(wèn)距 0． 4m，每層用玻璃隔開(kāi)，在每層上方安裝 2 支 40w 13 光燈。 為了保證苗木的品質(zhì)，應(yīng)注意以下幾點(diǎn)： ① 根蘗育苗應(yīng)在品種優(yōu)良、純一的枸杞園內(nèi)進(jìn)行，以避免混入劣質(zhì)種苗。因此，在生產(chǎn)上應(yīng)大力推廣使用這種繁殖方法。為了減少跑墑，播后稍加鎮(zhèn) 壓再蓋上濕碎草。 1．種子準(zhǔn)備作為播種育苗用的種子，應(yīng)選用品種優(yōu)良、籽粒飽滿、生活力強(qiáng)、發(fā)芽率高的種子為宜。豐產(chǎn)枸杞園土 壤的鹽分組成是以含鈣的重碳酸鹽為主，HC03占陰離子總量的 50． 4％ 74． 6％， Ca2+占陽(yáng)離子總量的 40． 2％。在生長(zhǎng)季節(jié)，若連續(xù)陰雨時(shí)間長(zhǎng)，枸杞易得霜霉病和黑果病，紅熟了的果實(shí)會(huì)破裂，從而降低果實(shí)質(zhì)量。寧夏枸杞老產(chǎn)區(qū)的茨農(nóng)說(shuō)： 枸杞離不開(kāi)水，又怕水 。被遮蔭樹(shù)的葉片薄，色澤發(fā)黃，花果很少。冬季休眠時(shí)期耐寒能力很強(qiáng)，在一 41． 5℃ 的絕對(duì)低溫條件下能安全越冬。 E，年平均氣溫 4． 4℃ 12． 7℃ ， 7 月份平均氣溫 17． 2℃ 26． 6。 3 討 論 細(xì)胞胚的誘導(dǎo)和植株再生已有過(guò)報(bào)道 〔 4,5〕 , 并已用愈傷組織進(jìn)行了懸浮培養(yǎng) 〔 6,7,8〕 , 最近 , 通過(guò)原生質(zhì)體培養(yǎng)得到了愈傷組織 , 但沒(méi)有形成再生植株。培養(yǎng)條件：溫度 20～ 25 ℃ ，每日光照 10～ 12 h，光照強(qiáng)度為 2 500～ 3 000 lx。培養(yǎng)溫度 25～ 30℃ ,自然光照。長(zhǎng)芽培養(yǎng)基中的激素成分為 (毫克 /升 ):① ,KT1,② ,BA1。 分化培養(yǎng) 將上述繼代過(guò)程中產(chǎn)生的胚性愈傷組織轉(zhuǎn)移到含不同濃度的 6－ BA 和 NAA 的 MS 培養(yǎng)基上， 4 周后觀察不同培養(yǎng)基上愈傷組織的分化出芽情況。 生根培養(yǎng) 將叢生芽沿基部切下，接種到生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，結(jié)果如表 5． 表 5 不同植物激素濃度對(duì)枸杞幼芽生根的影響 Table 5 Effects of different hormones of Lycium barbarum L 培養(yǎng)基（ mg／ L） Medium 接種苗數(shù)（個(gè)） Number of planted shoots 生根芽數(shù)（個(gè)） Number of shoots with induced root 生根率（％） Rate of root formation MS0 50 2 4 MS+NAA1 50 0 0 MS+ 50 1 2 MS+ 50 46 92 從表 5 可以看出，無(wú)激素或者高濃度的生長(zhǎng)素不利于枸杞幼芽根的形成，低濃度的生長(zhǎng)素對(duì)根的形成有促進(jìn)作用，當(dāng)培養(yǎng)基中含有 NAA mg/L 時(shí)，能形成大量完整植株（圖版 Ⅰ ： 5），生根率可達(dá) 92%，且不定根較粗，并有側(cè)根出現(xiàn)。 45。 C，年平均氣溫為 4． 4℃ 12． 7℃ 也能生長(zhǎng)良好，并獲得較高產(chǎn)量。光照強(qiáng)弱和日照長(zhǎng)短直接影響枸杞的生長(zhǎng)和發(fā)育。但是，在栽培條件下若是獲得豐產(chǎn)，就必須有足夠的土壤水分供應(yīng)。 69／ L 的苦水灌溉枸杞園，也生長(zhǎng)良好。 枸杞的耐鹽堿能力很強(qiáng)，適應(yīng)范圍也很廣。播種育苗的優(yōu)點(diǎn)是在短期內(nèi)能快速地、集中地育出大量苗木，滿足生產(chǎn)上對(duì)種苗的需要，而且通過(guò)選種和加強(qiáng)管理，可以培育出健壯、根系完整的良種壯苗，并且成本低，易掌握。種子育苗多用條播，行距 3040cm，開(kāi) 35cm寬、 23cm 深的播種溝，將催芽后的種子與 l0 倍細(xì)沙拌勻，撒入溝內(nèi)。此法操作簡(jiǎn)便，生產(chǎn)上已普遍采用。根蘗苗是母樹(shù)的營(yíng)養(yǎng)體形成的，所以它也能保持母樹(shù)的優(yōu)良性狀。為了使工作方便，現(xiàn)根據(jù)有關(guān)資料，簡(jiǎn)單介紹此方法。7H20) 8 ． 6 硼酸(H3803) 6． 2 甘氨酸 2． 0 鹽酸硫胺素 0． 4 鹽酸吡哆素 0． 5 煙酸 0． 5．肌醇 100 蔗糖 30000瓊脂 l0000pH 5． 8 培養(yǎng)基母液 (貯備液 )的配制：在配制培養(yǎng)基時(shí)，為了減少每次稱(chēng)取大量藥品的麻煩，可以把各種藥品一次稱(chēng)取所需要量的 10 倍或 l00 倍配成母液，待用時(shí)再稀釋。在接種時(shí)，先將經(jīng)過(guò)高溫滅菌消毒的各種接種用具插入70％酒精中，用時(shí)再在酒精 燈的火焰上消毒，待冷卻后使用，用完再插回酒精中。 ⑤ 栽后 34 天將塑料拱棚兩端的塑料薄膜稍微揭開(kāi)透氣， 1 星期后兩端揭開(kāi)， 2 星期后揭去拱棚，