【正文】 脂酰乙醇胺 (DOPE) 聚賴氨酸 (PLL)、硫酸魚精蛋白 (PS) 13 陽離子納米脂質(zhì)體的結構 1. 小單層納米脂質(zhì)體 (SUVs) 20~100nm 2. 大單層納米脂質(zhì)體 (LUVs) 100nm 3. 多層納米脂質(zhì)體 (MLVs) 300~700nm 少層脂質(zhì)體 已經(jīng)商品化的陽離子脂質(zhì)體 Lipofectin TransfectACE LipofectAMINE (GIBCO BRL) Transfectam TfxTM50 (Promega) DCChol (Sigma) DOTAP (Boehringer Mannheim) 14 陽離子納米脂質(zhì)體的結構 SUVs or LUVs MLVs 15 陽離子納米脂質(zhì)體介導基因轉(zhuǎn)移的機制 DNA/脂質(zhì)體復合物 內(nèi)吞作用 內(nèi)體 細胞核 蛋白質(zhì) 細胞質(zhì) 治療作用 1 2 3 4 5 6 16 陽離子納米脂質(zhì)體介導基因轉(zhuǎn)移的機制 17 陽離子納米脂質(zhì)體介導基因轉(zhuǎn)移的機制 1. 陽離子納米脂質(zhì)體與基因形成復合物 (1)復合物的形成及結構 (2) 復合物的理化性質(zhì) SIZE ζ電位 膠體化學穩(wěn)定性 影響因素 —— 脂質(zhì)體與 DNA濃度 介質(zhì)的離子強度與溫度 樣品加入順序、混合速率 靜電模型 內(nèi)含模型 細面條模型 Radler模型 “蜂窩”模型 18 陽離子納米脂質(zhì)體介導基因轉(zhuǎn)移的機制 19 20 陽離子納米脂質(zhì)體介導基因轉(zhuǎn)移的機制 2. 陽離子納米脂質(zhì)體 —— DNA復合物與細胞外物質(zhì)的相互作用 相互作用的物質(zhì) —— 血液成分（ RBC、蛋白質(zhì)、脂蛋白） 細胞外介質(zhì)（糖蛋白、 CS、膠原） 黏膜分泌物（透明質(zhì)酸、黏蛋白） 表現(xiàn) —— 聚集（脂質(zhì)融合、 ζ電位降低、靜電排斥力降低） 轉(zhuǎn)染效率低（ DNA提前釋放、酶降解） 肺部蓄積和表達（第一毛細血管床） 21 陽離子納米脂質(zhì)體介導基因轉(zhuǎn)移的機制 3. 陽離子納米脂質(zhì)體 —— DNA復合物在細胞內(nèi)轉(zhuǎn)運 進入細胞 —— 細胞內(nèi)吞作用 —— 內(nèi)涵體 —— 初級溶酶體 與質(zhì)膜直接融合 —— Rhodanine標記 小孔模式 ——