20xx年醫(yī)學(xué)專題—大腸桿菌的保存與培養(yǎng)(專業(yè)版)
【正文】 1）小量培養(yǎng):(1) 取滅菌 16 或 18mm 口徑培養(yǎng)管，加 35mlLB 培養(yǎng)基，再加 50mg/ml 氨芐青霉素 35ul（宿主菌不加抗生素）(2) 無菌牙簽挑取單菌落，送入培養(yǎng)液中，或取菌液 510ul，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中，封好管口(3) 37℃搖床培養(yǎng) 100200r/min 至生長飽和，約 612 小時(shí)2）大量培養(yǎng):取 500ml 培養(yǎng)瓶內(nèi)裝培養(yǎng)基 100200ml，及相應(yīng)抗生素。甘油菌從冰箱取出使用時(shí)應(yīng)置于低溫或 0℃冰浴中，用完盡快放回，接種時(shí)挑取表面已融化部分即可，不可全溶，因反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞壁破裂。由于菌種的代謝相對(duì)靜止，生命活動(dòng)將處休眠狀態(tài)，從而可以保藏較長時(shí)間。能夠長期在研究上應(yīng)用。因此，為了避免0℃—70℃冰晶的形成和細(xì)菌膜兩側(cè)離子平衡的破壞，需要加保護(hù)劑。2）含瓊脂的固體培養(yǎng)基配制（1）普通培養(yǎng)基:固體培養(yǎng)基是在液體培養(yǎng)基中加 %瓊脂制成，先配液體培養(yǎng)基，然后加入 %瓊脂，高壓滅菌20min，取出后再無菌狀態(tài)下鋪平板（2）選擇性培養(yǎng)基:將消毒好的固體培養(yǎng)基置室溫
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