【正文】 把某種抗原反復(fù)注射到動(dòng)物體內(nèi)，然后從動(dòng)物血清中別離出所需的抗體。然后檢測(cè)各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體〔常用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法〕，那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。 (一 )動(dòng)物細(xì)胞融合的概念 動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交 ,是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。 第二十七頁，共四十六頁。 ? 作為診斷試劑 ： 在臨床生化診斷、病理組織定位、體內(nèi)腫瘤的定位等 ,與常規(guī)抗體相比 ,具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速 特點(diǎn) . 單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)： 特異性強(qiáng)，靈敏度高，可大量制備。 1. 動(dòng)物特異性免疫 2. 別離 B淋巴細(xì)胞〔 B〕；找到骨髓瘤細(xì)胞〔 G〕。 注射抗原 B淋巴細(xì)胞 骨髓瘤細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞 細(xì)胞培養(yǎng) 篩選，繼續(xù)培養(yǎng) 足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群 體外培養(yǎng) 注射到小鼠腹腔 單克隆抗體 第十二頁，共四十六頁。 第四頁，共四十六頁。 (三 )動(dòng)物細(xì)胞融合的應(yīng)用 ,使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。 單克隆抗體的制備 第十三頁，共四十六頁。注意 B淋巴細(xì)胞是一個(gè)系列。 單克隆抗體的應(yīng)用 第二十一頁，共四十六頁。 資料： 目前世界各國(guó)已經(jīng)研制出數(shù)以百計(jì)的單克隆抗體。 〔二〕動(dòng)物細(xì)胞融合的過程 與植物原生質(zhì)體融合原理相同，方法類似。陽性孔中的細(xì)胞還不能保證是來自單個(gè)細(xì)胞，挑選陽性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋，一般需進(jìn)行 3～ 4次，直至確信每個(gè)孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理。 內(nèi)容總結(jié) 電影。將雜交瘤細(xì)胞稀釋，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超過一個(gè)，通過培養(yǎng)讓其增殖。 兩個(gè)細(xì)胞正在融合 受精作用 第三十三頁，共四十六頁。 么不同？ 植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)根本相同，不同的是植物體細(xì)胞融合前需去掉細(xì)胞壁，然后再融合；動(dòng)物細(xì)胞融合是兩個(gè)體細(xì)胞直接融合。 問題強(qiáng)化： 1〕、本過程利用了哪些原理？ 免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理 2〕、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與 B細(xì)胞融合？ 這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有 B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體 第二十頁，共四十六頁。 第十八頁，共四十六頁。 如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？ ? ? ? ? 第十一頁，共四十六頁。 ) 化學(xué)法：聚乙二醇 PEG誘導(dǎo)融合 . 物理法：電激融合 病毒顆粒黏 附細(xì)