【正文】 對于動物細(xì)胞常用顯微注射法，對于植物細(xì)胞最常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。 (2)PCR 過程中退火 (復(fù)性 )溫度必須根據(jù)引物的堿基數(shù)量和種類來設(shè)定。具體原理是在農(nóng)桿菌的 Ti質(zhì)粒上存在 T－ DNA片段，它具有可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞并整合到受體細(xì)胞 ________上的特點(diǎn)，因此只要將攜帶外源基因的 DNA片段插入到 ________(部位 )即可。 ③ 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中的目的是 ________。 (1)反轉(zhuǎn)錄的原料是 ______________。此過程運(yùn)用的技術(shù)及流程分別是 ( ) A．基因突變； DNA→RNA→ 蛋白質(zhì) B．基因工程； RNA→RNA→ 蛋白質(zhì) C．基因工程； DNA→RNA→ 蛋白質(zhì) D．蛋白質(zhì)工程；蛋白質(zhì) →RNA→DNA→RNA→ 蛋白質(zhì) [答案 ] D [解析 ] 該過程采 用的是蛋白質(zhì)工程。下列有關(guān)敘述正確的是 ( ) A．基因 amp和 tet是一對等位基因，常作為基因工程中的標(biāo)記基因 B．質(zhì)粒指細(xì)菌細(xì)胞中能自我復(fù)制的小型環(huán)狀的 DNA和動植物病毒的 DNA C．限制酶的作用部位是 DNA分子中特定的兩個(gè)核苷酸之間 的氫鍵 D．用質(zhì)粒 4將目的基因?qū)氪竽c桿菌，該菌不能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長 [答案 ] D [解析 ] 等位基因是位于一對同源染色體的相同位置的基因，且控制相對性狀，因而基因 amp和 tet不是一對等位基因，但它們常作為基因工程中的標(biāo)記基因。而乙方法是用反轉(zhuǎn)錄的方法人工合成目的基因，它只能得到生物的部分基因，基因中只有編碼區(qū)，所以組成的是該細(xì)菌的 cDNA文庫。 4．中美科學(xué)家通過改變一種名為 NR2B 的基因研制出了轉(zhuǎn)基因超級小鼠 Hobbie－ J，Hobbie－ J比普通老鼠更加聰明，大腦運(yùn)轉(zhuǎn)更加迅速，它能夠輕松完成迷宮任務(wù)。動植物病毒的 DNA不是質(zhì)粒。從預(yù)期蛋白質(zhì)功能入手，對蛋白質(zhì)控制基因進(jìn)行改造以達(dá)到改造蛋白質(zhì)的目的。 (2)在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，目的基因應(yīng)插入到該質(zhì)粒的位置是 ______________，此過程需使用的酶是 ________________________。 (2)用含目的基因的農(nóng)桿菌感染番茄原生質(zhì)體后，可用含有 ________的培養(yǎng)基進(jìn)行篩 選，與此同時(shí)，為能更好地達(dá)到培養(yǎng)目的，還需在培養(yǎng)基中加入 ________。 (2)根據(jù) T－ DNA這一轉(zhuǎn)移特點(diǎn)，推測該 DNA片段上可能含有控制 ________(酶 )合成的基因。表 1 為根據(jù)模板設(shè)計(jì)的兩對引物序列，圖 2為引物對與模板結(jié)合示意圖。故本小題所用的細(xì)菌 B通常為農(nóng)桿菌。 (4)將外源基因?qū)氩煌荏w細(xì)胞時(shí)，所用的方法是不同的。 (1)在采用常規(guī) PCR 方法擴(kuò)增目的基因的過程中，使用的 DNA 聚合酶不同于一般生物體內(nèi)的 DNA聚合酶，其最主要的特點(diǎn)是 ________。下圖為農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的示意圖，試回答下列問題： (1)一般情況下農(nóng)桿菌不能感染的植物是 ________，利用農(nóng)桿菌自然條件下感染植物的特點(diǎn)，能實(shí)現(xiàn) ________。已知 BamHⅠ 的識別序列如下圖中甲所示，請?jiān)谙聢D中乙相應(yīng)位置上，畫出目的基因兩側(cè)的黏性末端。 (E、 F、 H分別為限制酶 E、 F、 H的酶切位點(diǎn) )。有人試圖通過破解蛛絲蛋白的結(jié)構(gòu)從而推測出其相應(yīng)的基因結(jié)構(gòu)，以指導(dǎo)對蠶絲蛋白的修改，從而讓蠶也吐出像蛛絲蛋白一樣堅(jiān)韌的絲。 臺州檢測 )下面是四種不同質(zhì)粒的示意圖，其中 ori為復(fù)制必需的序列， amp為氨芐青霉素抗性基因， tet為四環(huán)素抗性基因，箭頭表示同一種限制酶的酶切位點(diǎn)。 3．甲、乙兩圖表示從細(xì)菌細(xì)胞中獲取目的基因的兩種方法，以下說法中錯誤的是 ( ) A．甲方法可建立該細(xì)菌的基因組文庫 B．乙方法可建立該細(xì)菌的 cDNA文庫 C．甲方法要以脫氧核 苷酸為原料 D．乙方法需要逆轉(zhuǎn)錄酶參與 [答案 ] C [解析 ] 甲方法是以細(xì)菌中的 DNA為基礎(chǔ)，用限制酶進(jìn)行切割，它包括了細(xì)胞所有的基因，可以建立基因組文庫，并且可以從中選出所需的目的基因，不需要模板，不需要原料。下列關(guān)于Hobbie－ J產(chǎn)生過程的描述，錯誤的是 ( ) A． NR2B基因可通過 PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增 B．改變后的 NR2B基因作為目的基因，可直接注入小鼠受精卵內(nèi) C．通常采用顯微注射法將改變后的 NR2B基因重組質(zhì)粒導(dǎo)入小鼠受精卵內(nèi) D．可采用基因探針檢測改變后的 NR2B基因是否導(dǎo)入小鼠體內(nèi) [答案 ] B [解析 ] 目的基因可通過 PCR技術(shù)擴(kuò)增；獲取的目的基因需與載體結(jié)合成重組質(zhì)粒后才可通過顯微注射法導(dǎo)入小鼠的受精卵內(nèi)，直接導(dǎo)入的目的基因不能在小鼠體內(nèi)表達(dá)；檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，可采用放射性同位素標(biāo)記的基因探針。限制酶的作用部位是兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵，而非氫鍵。 17． (2021為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加 ____________________的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng) 24～ 48h后取樣，在質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 25%的蔗糖溶液中，觀察細(xì)胞 ________現(xiàn)象來鑒別細(xì)胞壁是否再生。 (3)圖中 c過程中，能促進(jìn)農(nóng)桿菌向植物細(xì)胞轉(zhuǎn)移的物質(zhì)是 ________類化合物。請判斷哪一對引物可采用較高的退火溫度？ ________。 (5)由圖中 ① 過程可知，用