凝膠層析法測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量-powerpoint(專業(yè)版)
【正文】 只要測(cè)得幾種標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的 Ve，并以它們的相對(duì)分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)(logMr)對(duì) Ve作圖得一直線，再測(cè)出待測(cè)樣品的 Ve，即可從圖中確定它的相對(duì)分子質(zhì)量。 ? 2. 裝柱與平衡 裝柱前須將凝膠上面過多的溶液傾出，將層析柱垂直裝好。大分子物質(zhì)沿凝膠顆粒間隙隨洗脫液移動(dòng)，流程短，移動(dòng)速率快，先被洗出層析柱；而小分子物質(zhì)可通過凝膠網(wǎng)孔進(jìn)入顆粒內(nèi)部，然后再擴(kuò)散出來，故流程長(zhǎng)，移動(dòng)速度慢，最后被洗出層析柱，從而使樣品中不同大小的分子彼此獲得分離。若分子大小介于上述完全排阻或完全滲入凝膠的物質(zhì)，則居二者之間從柱中流出。關(guān)閉出口，向柱管內(nèi)加入約 1/3柱容積的洗脫液，然后在攪拌下，將濃漿狀的凝膠連續(xù)地傾入柱中，使之自然沉降，待凝膠沉降約 2— 3cm后，打開柱的出口，調(diào)節(jié)合適的流速，使凝膠繼續(xù)沉集，待沉集的膠面上升到離柱的頂端約 5cm處時(shí)停止裝柱，關(guān)閉出水口。 注意事項(xiàng) ? 各接頭不能漏氣，連續(xù)用的小乳膠管不要有破損，否則造成漏氣、漏液。 計(jì)算 分子量的測(cè)定和計(jì)算，一般都采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法。待溶脹平衡后用傾瀉法除去不易沉下的細(xì)小顆粒，最后凝膠經(jīng)減壓抽氣除去氣泡，即可準(zhǔn)備裝柱。當(dāng)含有分子大小不一的蛋白質(zhì)混合物樣品加到用此類凝膠顆粒裝填而成的層析柱上時(shí)
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