【正文】 1. 計數(shù)法 基因頻率 =某基因座特定等位基因數(shù) /某基因座所有等位基因數(shù) 例： MN系統(tǒng)： 1000個體 MM有 372個， MN有 496個， NN有 132個 等位基因數(shù)為 2023個 M（ 等位基因數(shù)） =2MM+MN=2 372+496=1240 M（ 基因頻率） =2MM+MN/2023= P（ A） =2 AA+AB/2 個體總數(shù) Q（ B） =2 BB+AB/2 個體總數(shù) 多個等位基因： P（ A） =2 AA+AB+AC+AD /2 個體總數(shù) 三、 HardyWeinberg定律： 在一個無限大的、不發(fā)生突變、遷移和選擇并隨機交配的群體中，基因頻率和基因型頻率在世代傳遞中保持不變，處于平衡狀態(tài)。 3）遺傳標記檢測： A： 二步消化法，檢測常染色體遺傳標記。 常用抗體：抗人血紅蛋白抗體 — 種屬、器官雙特異性。 檢測指標：血紅蛋白或正鐵血紅素 血液的主要成分。 X染色體 977bp產(chǎn)物； Y染色體 977bp與 788bp兩個產(chǎn)物。 E： 屬于序列多態(tài)性，檢測方法 RFLP； ASPCR； PCRASO； 測序等。 特點： A： DNA片段數(shù)目多，類似 DNA指紋圖。 B： 泳動中根據(jù)等位基因標準品認定型別。 10bp左右。常用尼龍膜。 （二）等位基因特異性寡核苷酸探針雜交分析法 allele specific oligonucleotide,ASO 根據(jù)鹼基互補的原則 ,制備識別特定寡核苷酸序列的單鏈 DNA探針 ,并標記示蹤物 ,在高強度條件下與變性 DNA樣品雜交 ,檢測示蹤物 ,陽性者為檢出相應的等位基因。 （ 2） 識別部位間的片段插入與缺失。 泳速指示劑：溴酚藍（ 5%， 65bp） 二甲苯青（ 5%， 260bp） C： 電壓： 100200V （ 3） 譜帶顯示： A： 溴乙啶染色： ethidium bromide,EB,嵌合與 DNA雙鏈間，紫外線激發(fā)紅色熒光。 B： 內部的互補序列。 (4)常規(guī)處理。 5. 溶解 DNA適量 TE（ 10mmol/L Tris ,1mmol/LEDTA,長時間。 4. 乙醇與鹽類沉淀 DNA。 移碼突變（ frameshift mutation)： DNA鏈中插入 1個或幾個單堿對，使突變處以下部位密碼發(fā)生變化，使合成的氨基酸種類或序列變化，產(chǎn)生突變效應。 2） DNA的復性 復性（ renaturation） 撤除變性條件后，變性的單鏈 DNA根據(jù)堿基互補的原則，恢復成 DNA雙鏈的過程。 ，等位基因多，鑒別能力 強。 二、基因 1. 基因與基因組 基因（ gene）： 合成有功能的蛋白質多肽鏈 或 RNA所需的全部核苷酸序列 基因組（ genome）： 一個生物體的所有基因。 B： 差別 ： VNTR STR 重復序列組成 27 bp 7數(shù)十 bp 重復序列數(shù)目 210數(shù)個 10數(shù)個 數(shù)百個 鑒別能力 高 極高 優(yōu)勢擴增現(xiàn)象 不明顯 極明顯 檢測靈敏度 極高 稍差 片段總長度 200500 bp 數(shù)千以上 bp C： STR的命名 ： 非編碼區(qū) D3S1358 D3 第三號染色體 S 單拷貝（ single copy） 1358 VNTR序列的發(fā)現(xiàn)序號 編碼區(qū)內含子 HumHPRTB 次黃嘌呤磷酸核糖轉移酶基因 （ hypoxanthine phosphoribosyl transferase） 1） 序列多態(tài)性 ： DNA片段堿基排列順序的個體差別。 蛋白酶 K：酶解組蛋白。 基本方法：血液（ 14μ l） TES（ 100μ l） SDS （ 20μ l） 煮沸 5min； 300μ lGuSCN溶液 與 20μ l硅珠液保溫 15 min； 離心；離心 加 GuSCN溶液；離心加乙醇漂洗； TES56℃10 min 離心取上清。 一、 PCR的基本過程 （ denaturation） :在加熱的條件下（ 94℃ 左右），模板 DNA配對堿基間氫鍵斷裂，DNA雙鏈變成單鏈。 F： 濃度： 021μmol/L。 C： 熒光顯色 : (P78)染料標記在引物 5ˊ端，激光激發(fā)。 （ 3）分類： A： Ⅰ 型：遠離識別部位隨即切割，非特異。 C： 容易標記示蹤物。 利于復性不特異。 五、 PCR單鏈構型多態(tài)性分析 PCRsingle strand conformation polymorphism,PCRSSCP 基本原理： PCR產(chǎn)物熱變性后形成單鏈 DNA， 在非變性凝膠中，因 DNA 片段堿基排列順序的不同，單鏈 DNA形成不同的（空間構型，導 致電泳遷移率的差別而呈現(xiàn)多態(tài) 性，根據(jù)譜帶的位置判定型別。 C： 不同基因座 PCR產(chǎn)物片段長度分布不交叉。 八、 DNA序列分析（雙脫氧核苷酸末端終止法） 基本原理： 在常規(guī) PCR反應體系中加入四種 2， 3雙脫氧 單核苷酸，由 1條引物進行 PCR反應，在正常的模 DNA 復制同時，當有 2， 3雙脫氧單核苷酸結合到產(chǎn)物 3端 后，下一個單核苷酸不能夠與之形成磷酸二酯鍵，使 DNA 片段延伸終止于該 2， 3雙脫氧單核苷酸處，根據(jù) 不同長度含有 2， 3雙脫氧單核苷酸片段的檢測結果判 定 PCR產(chǎn)物的單核苷酸序列。 二、 Y染色體 DNA遺傳標記的法醫(yī)學意義 DNA特征與法醫(yī)學意義 A： 父系伴性遺傳：父系血緣男性具有完全相同的 Y染色 體 DNA遺傳標記。 2. DNA分子水平的種屬鑒定 DNA分子水平的種屬鑒定的基本原理是染色體上人類特異基因 (片段 )的檢測。 檢測指標：血紅蛋白或其衍生物 血液的主要成分。 遺傳標記檢測 A： ABO型檢測：吸收實驗 absorption標準化抗體 1： 32 解離試驗 elution高效價抗體 混合凝集試驗 mixed agglutination高親合力抗體。 B： 陰道肽酶（ vaginal peptidase,Vp） 的檢出。 n ΣPi2為群體中隨機抽取兩名個體，基因型由于機會而一致的概率。 源于精囊腺，為精液 ABH物質，應用其抗體分離混合斑的男性 ABH物質，檢測 ABO血型。意義同精子檢出。 氯化血紅素結晶試驗 氯化血紅素結晶。 C： mtDNA細胞色素 b基因：人與其他哺乳動物細胞色素