【正文】 本研究表明, 丁酸梭菌B1 株在體外對引起仔豬腹瀉的常見腸道致病菌———豬大腸桿菌K8K9O139 株和豬腸炎沙門氏菌以及有害菌金黃色葡萄球菌的拮抗作用較強, 作為飼料添加劑將具有非常廣闊的開發(fā)應用前景。由于金黃色葡萄球菌代謝不產酸, 丁酸梭菌發(fā)酵產酸使混合培養(yǎng)pH 值顯著低于單獨培養(yǎng)。mL 1, mL 接種到試管中, 置37℃靜止培養(yǎng), 分別在0、112348 h 取出1 支混勻, 測活菌數(shù)和pH 值。丁酸梭菌即酪酸菌, 是一種革蘭氏陽性厭氧芽孢桿菌, 是人和動物體內正常的有益菌群。結果發(fā)現(xiàn), 培養(yǎng)48 h后, 致病菌菌數(shù)顯著低于對照, 說明丁酸梭菌B1 株對豬大腸桿菌K8K9O139 株和豬腸炎沙門氏菌O4Hi 株、金黃色葡萄球菌均有顯著抑制作用。 培養(yǎng)基梭菌增殖培養(yǎng)基(RCM培養(yǎng)基) : 酵母浸膏3 g、牛肉浸膏10 g、胰蛋白胨10 g、葡萄糖5g、可溶性淀粉1 g、氯化鈉5 g、三水合乙酸鈉3 g、 g、% mL、蒸餾水1 000 mL。由圖1 可知, 菌株B1 在培養(yǎng)基中3～4 h 進入對數(shù)生長期, 菌數(shù)指數(shù)上升, 代謝產生酸性物質, 使培養(yǎng)基pH 值也隨之急速下降,對數(shù)生長期維持約8 h 后進入穩(wěn)定期, 此后菌數(shù)不再增加, pH ~, 而后在約24 h時由于形成芽孢, pH值略有上升。張樹波等研究發(fā)現(xiàn), 丁酸梭O3131對腸出血性大腸桿菌、痢疾志賀菌、霍亂沙門菌、霍亂弧菌均有顯著的抑制作用, 24 h 混合培養(yǎng)與單獨培養(yǎng)相比, 致病菌菌數(shù)減少4 個數(shù)量級以上[5]。試驗證明, 二次免疫長期效果明顯好于一次免疫效果。上述結果表明: ①丁酸梭菌對致病菌的體外拮抗作用具有菌株特異性, 不同的丁酸梭菌菌株對不同來源的致病菌菌株的抑制作用差異較大。 對大腸桿菌O139 株的拮抗作用兩種菌混合培養(yǎng)時, 大腸桿菌O139 株菌數(shù)一直顯著低于單獨培養(yǎng), 特別是培養(yǎng)后期, 菌數(shù)差異擴大到約兩個數(shù)量級, 說明丁酸梭菌對大腸桿菌O139 株有顯著的抑制作用。 活菌計數(shù)方法致病菌采用稀釋平板計數(shù)法: 將待測菌液搖勻, 10 倍連續(xù)稀釋, mL分別滴加在3 個LB 培養(yǎng)基平板上, 置37℃培養(yǎng)48 h 后, 計算其菌數(shù), 取平均值。 Technology,Wuhan 430070, China)Abstract: Antagonism effect of Clostridium butyricum B1 strain against five animal pathogens in vitro were studied. The pureClostridium butyricum B1 were mixed with Escherichia. coli K88, E. coli K99, E. coli O139, Salmonella enteritidis O4Hi andStaphylococcus aureus respectively in GAM liquid medium, and were incubated in anaerobic way, the data obtained from thesingle and mixed culture were pared. After 48 hours, the