5、轉(zhuǎn)錄調(diào)控(專(zhuān)業(yè)版)
【正文】 結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)錄因子A結(jié)合位點(diǎn)突變的基因B啟動(dòng)子熒光報(bào)告載體的轉(zhuǎn)錄活性與對(duì)照相比顯著下降，這部分結(jié)果提示，轉(zhuǎn)錄因子A通過(guò)結(jié)合位于基因B啟動(dòng)子上108至42之間的轉(zhuǎn)錄因子A結(jié)合位點(diǎn)，進(jìn)而激活基因B的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。注釋?zhuān)喝缟鲜菍ふ肄D(zhuǎn)錄因子與基因結(jié)合位點(diǎn)的套路方案，通過(guò)截短不同區(qū)域?qū)ふ业交钚躁P(guān)鍵區(qū)域。2．研究思路： 3 擴(kuò)增基因B上游啟動(dòng)子區(qū) 3 PCR 產(chǎn)物和 pGL3Basic 質(zhì)粒 3 構(gòu)建 pGL3Basic基因BP(1761/+37)質(zhì)粒 P（promoter） 3 3 3 對(duì)基因B的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用 5 5 上調(diào)基因B的轉(zhuǎn)錄表達(dá) 5 結(jié)合基因B啟動(dòng)子 5 結(jié)合基因B啟動(dòng)子 5 結(jié)合位點(diǎn)顯著下調(diào)基因B轉(zhuǎn)錄活性 6 對(duì)基因B轉(zhuǎn)錄激活作用 6 參與基因B轉(zhuǎn)錄調(diào)控 6 擴(kuò)增基因B上游啟動(dòng)子區(qū)以基因B的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)為+1，擴(kuò)增基因B啟動(dòng)子區(qū)（1796bp 到+37bp），電泳結(jié)果顯示條帶特異，大小符合預(yù)期設(shè)計(jì)。在基因轉(zhuǎn)錄起始階段，通用轉(zhuǎn)錄因子協(xié)助 RNA 聚合酶與啟動(dòng)子結(jié)合，但其作用很弱，不能高效率地啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄。所以，真核基因的表達(dá)調(diào)控主要是調(diào)節(jié)反式作用因子的活性，隨后反式作用因子調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄起始。48 小時(shí)后進(jìn)行熒光素酶報(bào)告基因分析。用轉(zhuǎn)錄因子A抗體沉淀交聯(lián)復(fù)合體，然后經(jīng)RTPCR檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子A 在基因B啟動(dòng)子上的結(jié)合序列。3．應(yīng)用案例：1. Kong LM, Liao CG, Fei F, Guo X, Xing JL, Chen ZN: Transcription factor Sp1 regulates expression of cancerassociated molecule CD147 in human lung cancer. Cancer science 2010, 101(6):1
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