【正文】 解析： 短期內(nèi)要得到大量的基因可利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增；構(gòu)建基因表達(dá)載體需要切割目的基因和運(yùn)載體，還需要將目的基因和運(yùn)載體連接起來，培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物用顯微注射法，目的基因?qū)胫参锍Ｓ棉r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 ；檢測是否翻譯成蛋白質(zhì)應(yīng)用抗原－抗體雜交法。 【 答案 】 (1)B (2)C (3)篩選 (4)BD 1．下列有關(guān)基因工程中限制酶的描述，錯(cuò)誤的是 ( ) A．一種限制性內(nèi)切酶只能識(shí)別一種特定的脫氧核苷酸序列 B．限制性內(nèi)切酶的活性受溫度影響 C．限制性內(nèi)切酶能識(shí)別和切割 RNA D．限制性內(nèi)切酶可從原核生物中提取 解析： 考查限制酶的來源和作用特點(diǎn)。 (5)胚胎分割是利用機(jī)械方法將早期胚胎等分，經(jīng)移植后獲得同卵雙胎或多胎的技術(shù)，可以看做動(dòng)物無性繁殖或克隆的方法，利用了細(xì)胞的全能性。載體上的抗性基因有利于篩選含重組 DNA的細(xì)胞，但由于它和目的基因是相互獨(dú)立的，并不能促進(jìn)目的基因的表達(dá)。 答案： (1)DNA (2)使血細(xì)胞吸水漲破，放出 DNA 使濾液中的 DNA溶于鹽溶液 使 DNA析出 (3)甲基綠 5． (2020年高考江蘇卷 )某生物興趣小組開展 DNA粗提取的相關(guān)探究活動(dòng)，具體步驟如下： 材料處理：稱取新鮮的花菜、辣椒和蒜黃各 2份，每份 10 g。 (5)為使外源基因在后代長期保持，可將轉(zhuǎn)基因小鼠體細(xì)胞的________轉(zhuǎn)入 ________細(xì)胞中構(gòu)成重組細(xì)胞，使其發(fā)育成與供體具有相同性狀的個(gè)體。其過程大致如圖所示： (1)基因工程的操作程序主要包括的四個(gè)步驟是 ____________、 ________、 ____________、 _____________ 。 (2)人工合成目的基因的常用方法 ① 已知核苷酸序列的較小基因，直接利用 DNA合成儀用化學(xué)方法合成，不需要模板。 ② DNA連接酶起作用時(shí)不需要模板。 請回答問題： (1)這種限制酶的切點(diǎn)是 ______，形成 ________個(gè) ________末端，特點(diǎn)是 ________________。 4．目的基因的檢測與鑒定 [知識(shí)拓展 ] (1)只有第三步將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞不需堿基互補(bǔ)配對，其余三個(gè)步驟都涉及堿基互補(bǔ)配對。 (2)進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移時(shí)，通常要將外源基因轉(zhuǎn)入 ________中，原因是________________。 (2)要明確區(qū)別兩次加蒸餾水的目的，第一次目的是讓雞血細(xì)胞吸水漲破，放出 DNA，第二次加蒸餾水是為了降低 NaCl溶液的濃度，使溶解于 2 mol為了進(jìn)一步提高 DNA純度，依據(jù)氯仿的特性，在 DNA粗提取第三步的基礎(chǔ)上繼續(xù)操作的步驟是： ______， 然后用體積分?jǐn)?shù)為 95%的冷酒精溶液使 DNA析出。 (2)啟動(dòng)子是一段有特殊序列的 DNA片段，位于目的基因的首段，它是 RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，在啟動(dòng)子存在時(shí)才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出 mRNA，最終獲得所需要的蛋白質(zhì)。若新基因未導(dǎo)入，或?qū)氲幢磉_(dá)，受體細(xì)胞未產(chǎn)生新基因表達(dá)的物質(zhì)，細(xì)胞在選擇培養(yǎng)基中無法生長。選育優(yōu)良動(dòng)物，目的基因?qū)氲某Ｓ梅椒ㄊ?__________；選育優(yōu)良植物，目的基因?qū)氩捎米疃嗟姆椒ㄊ?_______。 (1)獲得耐鹽基因后，構(gòu)建重組 DNA 分子所用的限制性核酸內(nèi)切酶作用 于圖中的 ________處， DNA連接酶 作用于 ______處。下列說法正確的是 ( ) A． DXT基因的編碼區(qū)由內(nèi)含子和外顯子組成 B． DXT基因在大白菜細(xì)胞中沒有表達(dá) C．該技術(shù)所用的工具酶是限制酶、連接酶 D．限制酶的切口一定是 GAATTC堿基序列 解析： DXT基因?qū)儆谠嘶?，其編碼區(qū)是連續(xù)的，故 A錯(cuò)；限制酶的種類不同，其切口也不同，故 D錯(cuò)；抗蟲效果明顯，說明 DXT基因已經(jīng)正常表達(dá)， B錯(cuò)誤。 取同種生物的不同類型細(xì)胞， 檢測其基因表達(dá)，結(jié)果如圖。 據(jù)圖回答： (1)圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用 ________限制酶同時(shí)酶切載體和人乳鐵蛋白基因。用兩層紗布過濾，取濾液備用。顯微注射法的優(yōu)點(diǎn)是導(dǎo)入的外源基因片段可長達(dá) 50 kb，且無需載體，外源基因在宿主染色體上的整合率相對較高。 (4)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法有很多種，該題中涉及的是________。 (2)基因表達(dá)載體的組成：目的基因＋ 啟動(dòng)子＋終止子＋標(biāo)記基因。 (2)具備的條件 ① 能在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定保存并大量復(fù)制。 (2)獲取一個(gè)目的基因需限制酶剪切兩次 ， 共產(chǎn)生