【正文】 Wilson D B。Ichida J M。E C de Waal。應(yīng)用廣泛的DGGE技術(shù)，盡管其凝膠上的條帶可以在回收后用于測序比較，但是研究人員一般僅利用DGGE等技術(shù)進行微生物群落的初步分析。嗜溫性真菌地霉菌)和嗜熱性真菌煙曲霉是堆肥生料中的優(yōu)勢種群，其他一些真菌，如擔子菌、子囊菌、橙色嗜熱子囊菌也具有較強的分解木質(zhì)纖維素的能力。放線菌在堆肥過程中始終數(shù)量不高，但在后期的堆肥過程中有所增加。在一定條件下，微生物醌的含量相對穩(wěn)定，故可利用微生物醌測定環(huán)境中的活性微生物的濃度。根據(jù)研究對象的rDNA序列或者相關(guān)數(shù)據(jù)庫中的信息設(shè)計探針，探針的設(shè)計要求專一性較高。Kowalchuk等用DGGE法和競爭PCR法從不同的堆肥原料中得到了B—subgmup Proteobacteria中含有的具有氨氧化樣的16s rRNA和rDNA序列。同時，也制約了人們對堆肥微生物學(xué)機理的深入了解。隨著其產(chǎn)量的不斷增長，有機固體廢物的累積和對環(huán)境污染的日趨嚴重，其處理處置已成為人類面的重要問題之一。l，1分離培養(yǎng)方法傳統(tǒng)培養(yǎng)分離方法是最早的認識微生物群落結(jié)構(gòu)和多樣性的方法，也是微生物學(xué)研究的經(jīng)典方法，自1880年發(fā)明以來一直到現(xiàn)在仍被廣泛使用。PcR在1985年首次被發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)在已成為包括與環(huán)境微生物學(xué)相關(guān)的重要實驗方法。這兩種軟件可在相關(guān)數(shù)據(jù)庫中得到。用假單胞菌屬和低G+c含量的革蘭氏陽性rRNA基因特異性探針得到相應(yīng)的靶結(jié)合率在16％～87％之間。Klamer和Biith利用PLFA圖譜技術(shù)研究了芒屬草和豬糞混合堆肥過程中微生物量和微生物群落結(jié)構(gòu)。2．1 細菌細菌憑借其大的比表面積，可快速利用可溶性物質(zhì)，在數(shù)量上通常要比體積更大的微生物(如真菌)多得多。這類傳統(tǒng)、經(jīng)典的研究方法在微生物學(xué)研究中具有重要的地位。McCarthy A J Penninckx M J Towards elucidation of the lignin degradation pathway in actinomycetes 1992【2】.Tuomela M。W C Ghiorse。張所明 城市垃圾堆肥原理與工藝 1990【17】.Klamer M。Y J Chang。張甲耀。P J L Derikx。Ball A S。諾卡氏菌、鏈霉菌、高溫放線菌和單孢子菌等都是在堆肥中占優(yōu)勢的嗜熱性放線菌，它們不僅出現(xiàn)在堆肥過程中的高溫階段，同樣也在降溫階段和熟化階段出現(xiàn)。當堆肥物料中的可利用有機物耗盡時，微生物進入內(nèi)源呼吸期，堆肥溫度下降，中溫微生物叉重新占據(jù)優(yōu)勢，腐殖質(zhì)增多，堆肥產(chǎn)品達到穩(wěn)定。PLFA方法適合跟蹤研究微生物群落的動態(tài)變化，能夠快速有效的從環(huán)境樣品中提取大部分脂肪酸。第四層次是與rDNA的擴增產(chǎn)物或rRNA的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA進行southem雜交。同時，還可利用the Ribosomal DaLabasePmject提供的分析軟件進行同源性分析。Howeler等對堆肥樣品微生物DNA提取、純化方法及其質(zhì)量進行了定量分析，定量研究腐殖質(zhì)污染對電泳和PcR擴增的影響及其消除方法，為堆肥樣品DNA的提取和純化提供了基本思路，也為后續(xù)研究奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。然而，微生物種類繁多，自然界中僅有極少數(shù)微生物得到鑒定，“存活而能培養(yǎng)”的種類至多為1％。堆肥化的實質(zhì)是微生物在適宜條件下的代謝作用。自從Muyzer等首次報道了16SrDNA應(yīng)用，該技術(shù)現(xiàn)已成為環(huán)境樣品微生物多樣性研究的重要工具。1．2．2．DNA序列測定與系統(tǒng)發(fā)育分析為了得到更為精確的分析序列，需要將PcR擴增產(chǎn)物克隆到載體中以構(gòu)建文庫。第一層次是直接在環(huán)境樣品上進行原位雜交，通過原位雜交不僅可以測定不可培養(yǎng)微生物的形態(tài)特征及豐度，而且可以在原位分析其空間分布和動態(tài)。用微生物醌指紋研究堆肥過程中微生物群落結(jié)構(gòu)的變化結(jié)果表明，微生物量先升后降，而微生物群落多樣性一直連續(xù)增加。當適宜條件時，微生物迅速生長繁殖，中溫微生物數(shù)量快速增長，堆肥溫度隨之上升；當達到不適于中溫微生物生長繁殖的溫度時，盡管中溫微生物數(shù)景還會進一步增長，但其生長繁殖速度減慢或結(jié)束。當溫度下降到60℃以下時，嗜溫性真菌和嗜熱性真菌又都會重新出現(xiàn)在堆肥中。雜交技術(shù)具有簡便的特點，但需要具有很強的研究基礎(chǔ)和特異性的序列，以便從中篩選出有效的序列。劉德明 滾動式高溫堆肥中微生物種類數(shù)量的研究[期刊論文]中國環(huán)