5、轉(zhuǎn)錄調(diào)控(更新版)
【正文】 基因的表達(dá)調(diào)控主要是調(diào)節(jié)反式作用因子的活性，隨后反式作用因子調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄起始。只有在反式作用因子(基因特異性轉(zhuǎn)錄因子）的協(xié)助下，RNA 聚合酶Ⅱ和TFⅡ才能有效地形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物。在基因轉(zhuǎn)錄起始階段，通用轉(zhuǎn)錄因子協(xié)助 RNA 聚合酶與啟動子結(jié)合，但其作用很弱，不能高效率地啟動轉(zhuǎn)錄。反式作用因子處于無活性狀態(tài)時(shí)，與之相應(yīng)的基因就不能表達(dá)；反式作用因子處于有活性狀態(tài)、并與相應(yīng)的順式作用元件結(jié)合時(shí)，就可以促進(jìn) RNA 聚合酶和通用轉(zhuǎn)錄因子與相應(yīng)的啟動子結(jié)合，形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物。2．研究思路： 3 擴(kuò)增基因B上游啟動子區(qū) 3 PCR 產(chǎn)物和 pGL3Basic 質(zhì)粒 3 構(gòu)建 pGL3Basic基因BP(1761/+37)質(zhì)粒 P（promoter） 3 3 3 對基因B的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用 5 5 上調(diào)基因B的轉(zhuǎn)錄表達(dá) 5 結(jié)合基因B啟動子 5 結(jié)合基因B啟動子 5 結(jié)合位點(diǎn)顯著下調(diào)基因B轉(zhuǎn)錄活性 6 對基因B轉(zhuǎn)錄激活作用 6 參與基因B轉(zhuǎn)錄調(diào)控 6 擴(kuò)增基因B上游啟動子區(qū)以基因B的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)為+1，擴(kuò)增基因B啟動子區(qū)（1796bp 到+37bp），電泳結(jié)果顯示條帶特異，大小符合預(yù)期設(shè)計(jì)。我們將成功構(gòu)建的基因B啟動子區(qū)的熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，并同時(shí)轉(zhuǎn)入pRLTK載體作為內(nèi)對照。注釋：如上是尋找轉(zhuǎn)錄因子與基因結(jié)合位點(diǎn)的套路方案，通過截短不同區(qū)域?qū)ふ业交钚躁P(guān)鍵區(qū)域。用 ChIP 的方法檢測了基因B高表達(dá)的cell1細(xì)胞和基因B 低表達(dá)的cell2細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子A的結(jié)合情況。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)錄因子A結(jié)合位點(diǎn)突變的基因B啟動子熒光報(bào)告載體的轉(zhuǎn)錄活性與對照相比顯著下降，這部分結(jié)果提示，轉(zhuǎn)錄因子A通過結(jié)合位于基因B啟動子上108至42之間的轉(zhuǎn)錄因子A結(jié)合位點(diǎn)，進(jìn)而激活基因B的轉(zhuǎn)錄表達(dá)
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