【正文】 % 氯化鈣 % 氯化銨 % 自然 pH 黑曲霉糖化酶發(fā)酵培養(yǎng)基 玉米粉 10% 豆餅 4% 麩皮 1% pH ~ （二）培養(yǎng)基的種類 斜面培養(yǎng)基： 是供菌種生長繁殖使用的 。 培養(yǎng)基 是人工配制的供微生物生長、繁殖及合成酶的營養(yǎng)物質(zhì)的混合物。 培養(yǎng)基稱為種子培養(yǎng)基。 （三）產(chǎn)酶菌種的保存 保藏方法 :斜面保藏法、沙土保藏法、真空冷凍干燥保藏法、低溫保藏法、石蠟油保藏法等。 ? 分布于土壤、空氣中，常見于淀粉食品上，可引起霉腐變質(zhì)和水果、蔬菜的腐爛。 (二 )形態(tài) 青霉的營養(yǎng)體為無色或淡色的菌絲體 ,菌絲各細胞之間有橫隔膜。霉菌繁殖迅速，常造成食品、用具大量霉腐變質(zhì)，但許多有益種類已被廣泛應(yīng)用，是人類實踐活動中最早利用和認識的一類微生物。另一方面 ,放線菌菌體呈纖細的菌絲狀 ,而且分支 ,又以外生孢子的形式繁殖 ,這些特征又與霉菌相似。 醋酸桿菌 （ Acetobacter） ? 菌體從橢圓至桿狀，單個、成對或成鏈，革蘭氏陰性，不生芽孢。 （ 2）中期合成型： 要從 解除阻遏 和 提高 mRNA的穩(wěn)定性 兩方面進行努力。只有隨著細胞的生長，阻遏物幾乎被細胞用完而使阻遏解除后，酶才開始大量合成。 濃度 酶濃度 細胞濃度 時間 (h) 延續(xù)合成型 ?酶的合成伴隨著細胞生長而開始，但在細胞進入 平衡期后 ，酶還可以 延續(xù)合成 較長的一段時間。 葡萄糖阻遏 223。 CAP：分解代謝物活化劑蛋白，又稱環(huán)腺苷酸受體蛋白(cAMP receptor protein， CRP）。 適于微生物、動植物細胞。 微生物發(fā)酵產(chǎn)酶 目前工業(yè)用酶大多數(shù)來自微生物。 酶發(fā)酵生產(chǎn)的前提之一：選育到性能優(yōu)良的產(chǎn)酶微生物！ 對 產(chǎn)酶微生物 的要求： （ 1）產(chǎn)酶量高； （ 2）易培養(yǎng)和管理； （ 3）產(chǎn)酶性能穩(wěn)定； （ 4）利于酶產(chǎn)品的分離純化； （ 5）安全可靠、無毒性等。 優(yōu)點：解除細胞壁擴散阻礙；易于細胞間質(zhì)中的酶的 分泌；可反復(fù)或連續(xù)使用 缺點：制備復(fù)雜，維持較高的滲透壓，需防止細胞壁再生 第一節(jié) 微生物細胞中酶生物合成的調(diào)節(jié) 一、酶生物合成的基本過程 DNA RNA 蛋白質(zhì)（新生多肽鏈） 成熟蛋白質(zhì)（酶） 胞內(nèi) 胞外 轉(zhuǎn)錄 翻譯 加工 分泌或定位 二、酶生物合成的調(diào)節(jié) 定義： 通過調(diào)節(jié)酶合成的量來控制微生物代謝速度 的調(diào)節(jié)機制，主要是在基因轉(zhuǎn)錄水平上進行的。 酶合成的基因調(diào)控類型： 誘導(dǎo) 和 阻遏 酶合成的誘導(dǎo)作用 加進某些物質(zhì)，使酶的生物合成開始或加速進行的現(xiàn)象，稱為誘導(dǎo)作用。 特點： （ 1）發(fā)酵開始，細胞生長，酶也開始合成，說明 不受分解代謝物和終產(chǎn)物阻遏 。 時間 (h) 濃度 細胞濃度 酶濃度 滯后合成型 ?只有當(dāng)細胞生長一段時間或者進入平衡期以后， 酶才開始合成并大量積累。 同步合成型 中間合成型 延續(xù)合成型 滯后合成型 酶合成起始時間 酶合成停止時間 產(chǎn)酶與生長相關(guān)特點 生長與酶合成偶聯(lián)度 酶 mRNA穩(wěn)定性 酶生物合成與生長關(guān)聯(lián)式比較 生長開始 對數(shù)期 生長開始 平衡期 衰亡期 平衡期后 平衡期 平衡期 同起同停 晚起晚停 同起晚停 晚起同停 非偶聯(lián) 過渡 偶聯(lián) 緊密偶聯(lián) 很穩(wěn)定 較穩(wěn)定 不穩(wěn)定 不穩(wěn)定 小結(jié)： ?影響酶生物合成模式的 主要因素 ：培養(yǎng)基中 阻遏物的存在 和mRNA的穩(wěn)定性 。菌落呈白色至黃白色，擴展，光滑，閃光。 ? 枯草芽孢桿菌是工業(yè)發(fā)酵的重要菌種之一。 霉菌 （ molds） 霉菌 :是一類絲狀真菌。 霉菌與產(chǎn)酶 霉菌產(chǎn)酶舉例 生產(chǎn)糖化酶、 α 淀粉酶、酸性蛋白酶、果膠酶、過氧化氫酶、脂肪酶等； 黑曲霉（ Aspergillus niger） 米曲霉（ Aspergillus oryzae ） 生產(chǎn)糖化酶、蛋白酶、氨基?；?、磷酸二酯酶、果膠酶等。 木霉（ Trichoderma） ? 木霉具有較強分解纖維素能力。 假絲酵母： 脂肪酶、尿酸酶、尿囊酸酶、轉(zhuǎn)化酶、醇脫氫酶等。 無論哪種發(fā)酵法，都要做三方面的工作： （ 1）從原料準(zhǔn)備培養(yǎng)基； （ 2）從原始菌種準(zhǔn)備生產(chǎn)菌種； （ 3）發(fā)酵過程管理。 二、培養(yǎng)基 碳源 ： 提供碳元素；能源。 無機鹽： 大量元素和微量元素 。 三、發(fā)酵條件的控制 溫度的調(diào)節(jié)控制 （ 2）有些微生物 生長最適溫度 與 發(fā)酵產(chǎn)酶的最適溫度 有所不同。 （ 3）有些微生物可以同時產(chǎn)生若干種酶，在生產(chǎn)過程中，通過控制培養(yǎng)基的 pH，往往可以改變各種酶之間的產(chǎn)量比例。 ?調(diào)節(jié)溶氧速率的方法 （ 1）調(diào)節(jié)通氣量； （ 2）調(diào)節(jié)氧的分壓； （ 3）調(diào)節(jié)氣液接觸時間； （ 4）調(diào)節(jié)氣液接觸面積； （ 5）改變培養(yǎng)液性質(zhì)。 誘導(dǎo)物的分類 （ 1）酶作用的底物； （ 2）酶作用底物的類似物； （ 3）酶的反應(yīng)產(chǎn)物； （ 4）底物和底物類似物