【正文】 沖洗多次（3分鐘以上），以沖去痕跡的三氯醋酸。9．鏡下觀察（三）結(jié)果細胞質(zhì)被染成淺紅色，細胞核被染成藍綠色，而其中核仁被染成紫紅色（參照照片）。 2．取出蓋片，用PBS()輕輕沖洗蓋片表面去除殘渣。 3．鞭毛和纖毛有何異同？(朱亞勤編)實驗七 細胞組分的化學反應【實驗目的】了解核酸、蛋白質(zhì)、糖及酶的細胞化學反應原理，掌握Brachet反應及堿性蛋白、酸性蛋白、糖原和過氧化物酶的細胞化學染色方法。 根據(jù)食物泡中剛果紅指示劑的顏色變化(酸性時，為紅色；近中性時，為黃色；堿性時，為藍色)。 結(jié)果： 1．在低倍鏡下可見到視野中有許多精子：頭部呈長錐形，尾為細長的線狀結(jié)構(gòu)。 5．然后，用眼科剪刀剪取咽頭前部的上頜粘膜約22cm2小塊，用牙簽挑取剪下的粘膜，將縱切面貼于載片上。3．放一塊透明玻璃于載物臺透光孔上，用尺子測量光圈孔徑。 4．用注射器抽取腹腔液，滴片，然后蓋上蓋片。它們有許多生理功能，如游走性、變形運動、趨化性、吞噬異物等。在核的四周可見小泡，扁平囊等集合形成的高爾基復合體。 核中的海綿狀球形結(jié)構(gòu)就是核仁，它由纖維和顆粒構(gòu)成。小鼠睪丸間質(zhì)細胞中含有豐富的分支管狀滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，合成固醇類的雄激素。在某些卵細胞內(nèi)，于核附近有圓形的小粒——中心粒，它與周圍致密的細胞質(zhì)——中心球，組成中心體?！緦嶒瀮?nèi)容】 一、三種細胞器的光鏡切片（一）高爾基復合體(Golgi Complex)用鍍銀法染色的豚鼠脊神經(jīng)節(jié)光鏡切片:神經(jīng)細胞因合成運輸大量的蛋白質(zhì)而含有發(fā)達的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復合體，在低倍鏡下觀察，神經(jīng)節(jié)的假單極細胞體被神經(jīng)束分隔成群。 (二)方法 1．剪下一小塊麗藻葉片(1～2cm)，置于載片上，蓋上蓋片。 (三)結(jié)果 光鏡觀察，微絲聚集成的張力纖維束被染成藍色。 4．對恢復的蓋片與第一張沒用藥的蓋片一同做染色處理。二、器材和儀器 光學顯微鏡一臺、鑷子一把、小平皿六個、載片三個、吸水紙、37℃恒溫箱。中性紅是液泡系特殊的活體染色劑，只將液泡系染成紅色，在細胞處于生活狀態(tài)時，細胞質(zhì)及核不被染色，中性紅染色可能與液泡中的蛋白有關。第三張是小鼠睪丸間質(zhì)細胞線粒體，線粒體的脊為分支的管，在照片上呈單層膜泡狀。線粒體的數(shù)目與細胞類型和細胞的生理狀態(tài)有關，線粒體多聚集在細胞生理功能旺盛的區(qū)域。 （二）方法 用空氣栓塞處死兔子，置于解剖盤內(nèi)，迅速打開腹腔，取兔肝邊緣較薄的肝組織一小塊（2～3mm3），放入盛有Ringer氏液的平皿內(nèi)洗去血液(用鑷子輕壓)，用吸管吸去Ringer氏液，在平皿內(nèi)加1／300詹納斯綠B染液，讓組織塊上表面露在染液外面，使細胞內(nèi)線粒體的酶系可進行充分的氧化，這樣才有利于保持染料的氧化狀態(tài)，使線粒體著色?！緦嶒炗闷贰? 一、材料和標本 兔子一只、線粒體的電鏡照片。圓片中央刻有一條直線，此線被分為若干格，每格代表的長度隨不同物鏡的放大倍數(shù)而異。白細胞數(shù)目少，為圓形。然后放在載片上，制片方法同脊髓壓片。將上面的載片取下即可得到壓片?！緦嶒瀮?nèi)容】 一、細胞的基本形態(tài)觀察 (一)原理 細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能相關是很多細胞的共同特點，在分化程度較高的細胞更為明顯，這種合理性是生物漫長進化過程所形成的。二、用鉛筆繪圖，線條要明確清晰，圖的深淺明暗一律以點的疏密來表示，點要圓而一致，不得涂暗影或進行其它美術(shù)加工。前者用于較大力量切開較長距離的堅韌的組織，如大動物的皮膚切口等；后者則用于小力量的短距離切開，或分離皮膚和肌肉等。具體方法是：左手捉住小鼠(如前所述)，在其腹正中線稍外側(cè)(避開膀胱和血管)用酒精消毒后，首先將注射針頭向頭部方向刺入皮下，進針1～2mm后，再以45176。 1．捉拿方法： 將小白鼠放在鼠籠蓋鐵網(wǎng)上，用右手持其尾巴向后拉，小鼠則會盡力向前蹬。其細胞較哺乳類動物的細胞大得多，因此常用于觀察細胞形態(tài)的實驗。班級值日生負責清掃室內(nèi)衛(wèi)生，關好水、電開關 和門、窗等，經(jīng)教師允許后方可離開實驗室。實驗期間不得進行任何與實驗無關的活動。 教材初稿曾于1989年《全國醫(yī)學細胞生物學實驗課培訓班》試用，參加該班的教師提出許多寶貴的經(jīng)驗及修改意見，謹此致謝。細胞生物學實驗手冊前 言 這本實驗教材是為高等醫(yī)學院校細胞生物學教學編寫的，適用于五年制本科、七年制臨床專業(yè)和研究生班。荊永顯、李虹、王序繪制插圖，畢衛(wèi)真負責印刷出版事宜。 四、必須嚴肅認真地進行實驗。實驗結(jié)束后，各組必須認真清理各自的實驗臺面，將器材 清洗后點清數(shù)目，然后擺放整齊。 蟾蜍 蟾蜍是兩棲類動物，由于其取材方便，常用于各種實驗。 小白鼠 小白鼠是哺乳動物，是最為常用的實驗動物。我們常用的是腹腔注射。持法有執(zhí)弓法與執(zhí)筆法兩種。 常用手術(shù)器械執(zhí)手術(shù)刀的姿勢執(zhí)手術(shù)剪的姿勢執(zhí)手術(shù)鑷的姿勢執(zhí)手術(shù)刀、手術(shù)剪、手術(shù)鑷的姿勢(張之曾編)細胞生物學實驗繪圖方法與要求一、在仔細觀察的基礎上，選擇典型結(jié)構(gòu)進行描繪，要求真實、準確(注意各部結(jié)構(gòu)的比例關系)。 三、試劑 1％甲苯胺蘭、1％甲基蘭、Ringer氏液(兩棲類用)。將另一載片壓在脊髓碎塊上，用力擠壓。 3．蟾蜍肝臟壓片的制備與觀察剪開蟾蜍腹腔，取一小塊(約2～3mm 3)肝放在平皿內(nèi)，用Ringer氏液洗凈，用鑷子輕壓將肝中的血擠出。顯微鏡觀察可見蟾蜍紅細胞為橢球形，有核。目鏡測微尺是一個放在目鏡像平面上的玻璃圓片。 計算細胞、細胞核體積的公式： 圓 形 V=4/3πr 3(r為半徑) 橢圓形 V=4/3πab2(a、b為長、短半徑) 核質(zhì)比 N／D=Vn／(Vc—Vn)(Vn為核的體積，Vc是細胞質(zhì)的體積) 實驗二 線粒體(Mitochondrion)的活體染色及電鏡照片觀察【實驗目的】 掌握一種活體染色方法,了解光學顯微鏡和電子顯微鏡下線粒體基本形態(tài)結(jié)構(gòu)。線粒體中細胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態(tài)呈藍綠色，而在周圍的細胞質(zhì)中染料被還原，成為無色狀態(tài)。線粒體的外形多樣，如圓形、橢圓形、啞鈴形和桿狀?？梢娋€粒體體積小、數(shù)目多，脊與線粒體呈同心圓排列。軟骨細胞內(nèi)含有較多的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達的高爾基復合體，能合成與分泌軟骨粘蛋白及膠原纖維等，因而液泡系發(fā)達?！緦嶒炗闷贰? 一、材料和標本 蓋片培養(yǎng)的成纖維細胞三片。兩小時后細胞形狀恢復，接近正常。然后小心地用自來水沖洗，空氣干燥。用細胞松弛素B處理后，就可抑制胞質(zhì)的環(huán)流運動。(時偉紅編)實驗五 細胞器的光鏡切片和電鏡照片觀察【實驗目的】觀察除了實驗二～五以外的其它細胞器在光學顯微鏡和電子顯微鏡下的基本形態(tài)結(jié)構(gòu)。圖5—2 脊髓前角神經(jīng)細胞的尼氏小體(三)中心體(Centrosome) 鐵蘇木素染色的馬蛔蟲子宮切片，在低倍鏡下觀察可見許多受精卵細胞，細胞的外面有卵殼，細胞與卵殼之間的腔叫卵殼腔。 人胃粘膜鹽酸細胞、小鼠睪丸間質(zhì)細胞滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)電鏡照片：鹽酸細胞分泌鹽酸，細胞中密集的圓泡，無核糖體附著即滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，參加鹽酸的合成。核膜外層也附著核糖體并與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相通。分散于細胞質(zhì)中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)間的許多圓形或棒狀膜結(jié)構(gòu)是線粒體。它分為粒細胞系、單核細胞系、淋巴系三類。 3．1小時后，用頸椎脫位法處死小鼠，迅速剖開小鼠腹壁，向腹腔注入O．5ml～1ml生理鹽水，用牙簽輕輕攪拌使生理鹽水與腹腔液混勻。2．取下目鏡，從鏡筒中觀察并調(diào)節(jié)光圈的大小，使其與鏡筒中所見物鏡的視野相等。 4．在上頜中線距喉頭1厘米處放置臘屑，觀察臘屑向什么方向移動？記錄臘屑開始移動到消失的時間(見圖62蟾蜍口腔內(nèi)面圖)。 4．用吸管吸取平皿內(nèi)液體，滴一滴于載玻片上，蓋上蓋玻片，稍待2～3分鐘于鏡下觀察。食物泡隨細胞質(zhì)由體后端到前端不停環(huán)流，并與溶酶體(含酸性水解酶)融合，行使細胞內(nèi)消化?！咀? 業(yè)】 1．畫圖記錄細胞吞噬實驗所見結(jié)果，小鼠巨噬細胞吞噬實驗如何解釋細胞內(nèi)臺盼蘭的著色？ 2．在觀察細胞纖毛和鞭毛運動實驗中,記錄一下臘屑從開始運動到消失的時間。 (二)方法 l．接種Hela細胞于蓋片上并培養(yǎng)24～48小時，使長成單層。8．滴一滴中性樹膠于載玻片上，將蓋片標本面朝下封片。3．放入5％三氯醋酸中60℃30分鐘，抽提出核酸。（二）方法1．取小鼠一只，以頸椎脫位法將其處死，迅速剖開其后肢暴露出股骨，將股骨一端斜向剪斷，用PBS緩沖液濕潤過的注射器針頭吸出骨髓一滴滴到載玻片上。 四、過碘酸雪夫反應(PAS)——顯示細胞內(nèi)糖原(參照照片和示教片) (一)原理 組織、細胞的多糖、粘多糖及粘蛋白等都可用PAS法來顯示，其化學基礎是利用過碘酸的氧化作用，打開碳鏈形成醛，生成的醛基與Schiff試劑中的無色品紅反應形成紫紅色化合物。 7．亞硫酸水洗三次，以洗去多余的非特異性結(jié)合的色素，以及擴散的染料。2．說明著色的堿性蛋白可能是什么物質(zhì)?(紀曉輝編)實驗八 細胞核與線粒體的分級分離【實驗目的】通過細胞勻漿和離心的方法分級分離細胞的組分，以了解其原理及過程。先用低速使較大的顆粒沉淀，再用較高的轉(zhuǎn)速，將浮在上清液中的顆粒沉淀下來，從而使各種細胞結(jié)構(gòu)，如細胞核、線粒體等得以分離。 6．將①、②、③涂片用l％甲苯胺蘭染色后蓋片即可觀察。小白鼠脫頸椎處死，迅速開腹 剪取肝組織％NaCl洗滌，稱1g剪碎加8ml預冷的0．25mol／／L氯化鈣溶液 勻 漿 過濾，濾液移入離心管，濾液涂片① 離 心 普通離心機2500rpm，15分鐘 滴片 滴片 詹納斯綠B染 詹納斯綠B染 色④蓋片 色⑤蓋片鏡檢 油鏡檢圖8—1 細胞核和線粒體分離圖解(朱亞勤編)實驗九 細胞分裂的形態(tài)觀察【實驗目的】 通過標本制備和觀察了解生物體細胞的無絲分裂、有絲分裂形態(tài)特征及生殖細胞的減數(shù)分裂過程。 (二)觀察與結(jié)果 在高倍鏡下，可見到處于不同階段分裂過程中的蛙紅細胞，核仁先行分裂，向核的兩端移動，細胞核伸長呈桿狀；進而，在核的中部從一面或兩面向內(nèi)凹陷，使核成腎形或啞鈴形改變；最后，從細胞中部直接收縮成兩個相似的子細胞；子細胞較成熟的紅細胞小。圖9—1馬蛔蟲受精卵的有絲分裂間期(Interphase) 細胞質(zhì)內(nèi)有兩個近圓形的細胞核，一為雌原核，另一為雄原核。 三、蝗蟲精巢減數(shù)分裂壓片標本的制備與觀察 (一)原理 減數(shù)分裂(Meiosis)是配子發(fā)生過程中的一種特殊有絲分裂，即染色體復制一次，而細胞連續(xù)分裂兩次，結(jié)果使染色體數(shù)日減半的過程。 4．染色 取固定好的精細管2～3條，置于干凈載玻片中央，用45％醋酸處理5分鐘，用吸水紙吸干后，加1～2滴醋酸洋紅染色15分鐘。粗線期（Pachytene stage）每對同源染色體聯(lián)合完成，縮短成較粗的線狀，稱為雙價染色體，因其由四條染單體組成，又叫四分體。到此減數(shù)分裂I結(jié)束?！咀? 業(yè)】 一、說明動植物細胞有絲分裂的區(qū)別。【實驗內(nèi)容】 一、微量全血培養(yǎng) (一)原理 人體外周血中淋巴細胞是成熟的免疫細胞，正常情況下處于G。洗手、換潔凈白大衣后進入操作室。 二、人淋巴細胞染色體標本制備 (一)原理 在淋巴母細胞分裂高峰時加入秋水仙素，破壞細胞紡錘體的形成，使細胞停止在分裂中期。 。 (三)結(jié)果 低倍鏡下，制片質(zhì)量較好的標本上可看到有較多的分裂相，染色體之間分散良好，互不重疊。其余步驟與淋巴細胞染色體制備相同。每個染色體都含有兩條染色單體，兩單體連接處為著絲粒。 第三確定D組和G組：D組三對即第13～15號6條染色體，中等大小均為近端著絲點，短臂末端有隨體。 三、要想制備出好的染色體標本應該注意哪些環(huán)節(jié)?談談自己實驗成功或失敗的體會。 二、方法 (1)％生理鹽水制成10％的懸液。 (6)離心棄上清后，取一滴融合后的細胞懸液滴片，加蓋片鏡檢?！緦嶒瀮?nèi)容】 一、原理 如實驗十一所述，兩個或兩個以上的同種或不同種細胞可以在誘導物的作用下融合成一個細胞。 2．收集培養(yǎng)的HeLa細胞 取一瓶生長良好的HeLa細胞，棄去培養(yǎng)基。然后迅速加入5ml Hanks液以終止PEG