[工作計劃]大學生創(chuàng)新課題(更新版)
【正文】 鯪生長激素基因cDNA的分子克隆和序列分析[J].中國水產(chǎn)科學，2003， 。蘸取上述大腸桿菌菌落 ,置于含 2 mL的 2 LB /Amp培養(yǎng)基的試管中在 37℃條件下振搖 4～5 h,加 IPTG使其終濃度為 1 mmoL。 RTPCR擴增：溶解總RNA于DEPC水中，RNA終濃度為1ug/ulA RTPCR反應體系如下（表1）：試劑用量Mgcl2ul10 * PCR Buffer 1 ulRNase free dH2O uldNTP Mixture1 ulRNase Inhibitor ulAMV Reverse Transcriptase XL ulOligo dTAdaptor Primer ulRNA1 ulTotal10ul反應條件： 30℃ 10min50℃ 20 min99℃ 5 min 5℃ 5 min 1 cycleB PCR反應體系（表2）：試劑用量5 * PCR Buffer10ul滅菌水 ulTaKaRa Ex Taq HS ulF（上） ulF（下） ul將B與A混合后按以下條件反應：94℃ 5min94℃ 30sec50℃ 30sec72℃ 40sec 35 cycle取PCR產(chǎn)物5ul進行1%瓊脂糖凝膠電泳檢測。1 材料與方法 材料 將黃河裸裂尻魚在實驗室水池短暫養(yǎng)殖。黃河裸裂尻生長激素基因的PCR擴增和克隆摘要：從黃河裸裂尻魚的腦組織提取總RNA，應用RTPCR方法獲得生長激素cDNA。本實驗采用RTPCR方法克隆黃河裸裂尻GH cDNA，進一步獲得黃河裸裂尻生長激素基因序列,并將其連接至載體上，構建黃河裸裂尻魚生長激素基因表達質(zhì)粒,在大腸桿菌系統(tǒng)進行了高效表達,獲得融合蛋白，這對我省開展的高原特有魚種的人工馴化和養(yǎng)殖計劃打下了有力的技術保障。 TGACTAGCAATACATTAGCG 339。再將重組質(zhì)粒轉入大腸桿菌 RB791中 ,于 LB 培養(yǎng)基中(37℃)培養(yǎng) 12～
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