【正文】 ldrich公司 (Milwaukee,WI,USA)。本文通過(guò)將殼聚糖 (CS)掃集 ,反轉(zhuǎn)電場(chǎng)堆積和場(chǎng)放大樣品堆積多步濃縮方法聯(lián)合 ,在芯片上實(shí)現(xiàn)了細(xì)菌的高效檢測(cè)?！擦私狻? 第三頁(yè)，共九十一頁(yè)。殼聚糖 ,牛璜酸和半胱氨酸購(gòu)置于上海國(guó)藥集團(tuán)。最后 ,標(biāo)記的細(xì)菌細(xì)胞懸浮在含有牛磺酸的緩沖溶液 ,濃度約。芯片清洗過(guò)后 ,將含有 CS〔殼聚糖〕的別離緩沖芯片對(duì)通道進(jìn)行預(yù)涂敷處理。 (A)預(yù)上樣 。由于使用的濃縮方法局部是基于運(yùn)行緩沖和樣品緩沖中不同的電導(dǎo)率 ,因此必須過(guò)濾水樣以去除水中含有的離子?！仓馈? 第十三頁(yè)，共九十一頁(yè)。因此準(zhǔn)確對(duì) miRNA進(jìn)行定量檢測(cè)具有重要的生物學(xué)和臨床意義。 氧化錫銦 (ITO )玻璃 ( mm厚 ,lOohm/m2):深圳萊寶高科技股份有限責(zé)任公司 ,深圳。 硝酸 (HN03):國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劍有限責(zé)任公司 ,上海。 M熒光素納溶液 :用于多步加樣過(guò)程的觀察。 實(shí)時(shí)定量 RTPCR系統(tǒng)構(gòu)建：將芯片置于商品化基因擴(kuò)增儀 (MGL96G/Y,杭州朗基科學(xué)儀器有限責(zé)任公司 )的載物合上 ,用 PCR儀控制熱循環(huán)溫度。以參加 miRNA122的拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)值作為橫坐標(biāo) ,CT值為縱坐標(biāo)擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線。清潔后的芯片置于干凈的培養(yǎng)皿中 ,室溫存放。利用平面液滴的優(yōu)勢(shì) ,在經(jīng)外表修飾的親水點(diǎn)陣列芯片上 ,實(shí)現(xiàn)了液滴的定位和多步加樣操作。 〔了解〕 第二十六頁(yè)，共九十一頁(yè)。 實(shí)驗(yàn)芯片：采用AutoCAD 2024軟件繪制芯片掩膜圖?！矆D〕 第二十九頁(yè)，共九十一頁(yè)。 實(shí)時(shí)定量 RTPCR檢測(cè)系統(tǒng)示意圖 第三十三頁(yè)，共九十一頁(yè)。細(xì)胞染色后 ,使用 PBS(磷酸鹽緩沖液 )溶液清洗三次 ,并重懸于 PBS溶液 (含有BSA〔牛血清蛋白〕 mg/mL)中。 數(shù)據(jù)釆集處理：釆用自編的 Labview程序讀取各個(gè)循環(huán)焚光照片上液滴的焚光強(qiáng)度值 ,得到熒光強(qiáng)度隨反響循環(huán)數(shù)增加而改變的曲線。 儀器與試劑： VersaSTAT3 電化學(xué)工作站 ( 美國(guó)普林斯頓 ) 、 Sension5 電導(dǎo)率儀 ( 美國(guó)哈希公司 ) 、 OLYMPUS IX71顯微鏡 ( 日本奧林巴斯公司 ) 、SWCJO 超凈臺(tái) ( 蘇州凈化公司 ) 。 試驗(yàn)方法：芯片上陣列式電極是通過(guò) MEMS 技術(shù)在玻璃基片上沉積的電極，對(duì)電極間距 k 分別為 130， 110， 90， 70 和 50 um，電極寬 d1為 100 um，相鄰電極間距 d2為 20 um， L 為 1780 um， D 為 1100 um。 擾動(dòng)振幅優(yōu)化：將大腸桿菌標(biāo)本靜置 90 min，測(cè)定不同擾動(dòng)振幅 ( 50 ～ 900 mV) 下大腸桿菌標(biāo)本的阻抗譜 。〔了解〕 第四十六頁(yè)，共九十一頁(yè)。 〔了解〕 第四十八頁(yè)，共九十一頁(yè)。 SX2410箱式電阻爐 (沈陽(yáng)市電爐廠 )。 試劑： 葡萄糖氧化酶 (GOD, Sigma)。 鹽酸 (優(yōu)級(jí)純 ,哈爾濱化工化學(xué)試劑廠 )。 實(shí)驗(yàn)用水均為二次蒸館水。此時(shí) ,微流控芯片既是酶反響器 ,又是電化學(xué)檢測(cè)池 ,葡萄糖檢測(cè)過(guò)程中的所有反響均在微流控芯片的微通道中進(jìn)行 ,實(shí)現(xiàn)反響儀器的集成化。 第六十頁(yè)，共九十一頁(yè)。在 4個(gè) DNA合成反響體系中分別參加一定比例的帶有放射性同位素標(biāo)記的某種ddNTP，通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳和 X射線放射自顯影后，可以根據(jù)電泳帶的位置確定待測(cè)分子的 DNA序列。 、第二代測(cè)序方法： GS FLX測(cè)序技術(shù)〔 454法〕 原理：一種依靠生物發(fā)光進(jìn)行 DNA序列分析的新技術(shù)；在 DNA聚合酶、 ATP硫酸化酶、熒光素酶和雙磷酸酶的協(xié)同作用下，將引物上每一個(gè) dNTP〔對(duì)硫磷〕的聚合與一次熒光信號(hào)釋放偶聯(lián)起來(lái)。 誤差來(lái)源： 454FLX測(cè)序的準(zhǔn)確率在 99%以上，其主要限制來(lái)自同聚物，也就是相同堿基的連續(xù)摻入，如 AAA或 GGG。在下一步合成反響中，參加改造過(guò)的 DNA聚合酶和帶有 4種熒光標(biāo)記的 dNTP〔對(duì)硫磷〕。 第七十六頁(yè)，共九十一頁(yè)。 Solexa技術(shù)特點(diǎn)： 技術(shù)優(yōu)勢(shì)：測(cè)序性價(jià)比最高，運(yùn)行本錢(qián)低； 可擴(kuò)展的高通量； 需要樣品量少； 簡(jiǎn)單、快速、自動(dòng)化 誤差來(lái)源：每次添加核苷酸之前對(duì)熒光信號(hào)的切割，如果切割不完全，產(chǎn)生誤差。 洗脫未參與合成的 dNTP和 DNA聚合酶，檢測(cè)雜交位置的熒光信號(hào) 化學(xué)試劑去熒光標(biāo)記 重復(fù)合成、洗脫、成像、猝滅過(guò)程，完成測(cè)試。在下一個(gè) dNTP被添加到合成鏈之前，這個(gè)dNTP的磷酸基團(tuán)會(huì)被氟聚合物〔 fluoropolymer〕切割并釋放，熒光分子離開(kāi)熒光信號(hào)檢測(cè)區(qū)。 第三代測(cè)序方法：納米孔單分子法 Oxford NanoporeTechnologies公司正在研究的納米孔單分子技術(shù)是一種基于電信號(hào)測(cè)序的技術(shù)。 納米孔單分子測(cè)序的特點(diǎn)： 準(zhǔn)確度高，納米孔單分子技術(shù)準(zhǔn)確率能到達(dá) %，且一旦發(fā)現(xiàn)替換錯(cuò)誤也能較容易地更改。 2% RNase去除剖 (體積比 ):使用娃哈哈純潔水稀釋 RNase去除刻 ,用于芯片及 PCR耗材清潔。優(yōu)勢(shì)： 速度很快，利用這種技術(shù)測(cè)序速度可以到達(dá)每秒 10個(gè) dNTP?！? 另外由于每次只測(cè)定一個(gè)核苷酸因此該方法可以很容易地解決同聚物長(zhǎng)度的測(cè)量問(wèn)題。用核酸外切酶切割 ssDNA〔單鏈 DNA〕時(shí)，被切下來(lái)的單個(gè)堿基會(huì)落入納米孔，并和納米孔內(nèi)的環(huán)糊精相互作用，短暫地影響流過(guò)納米孔的電流強(qiáng)度，這種電流強(qiáng)度的變化幅度就成為每種堿基的特征。 SMRT測(cè)序流程 第八十五頁(yè)，共九十一頁(yè)。 Heli Scope的優(yōu)勢(shì)： 單分子測(cè)序減少了試劑的使用，測(cè)序本錢(qián)價(jià)格大大降低。 、第三代測(cè)序技術(shù)： Heliscope單分子測(cè)序儀 原理：將基因組 DNA切割成隨機(jī)的小片段 DNA分子并且在每個(gè)片段末端加上polyA〔多聚腺嘌呤核糖核苷酸〕尾巴。 第七十七頁(yè)，共九十一頁(yè)。用激光掃描反響板外表，在讀取每條模板序列第一輪反響所聚合上去的核苷酸種類后，將這些熒光集團(tuán)化學(xué)切割，恢復(fù) 3`端黏性，隨后添加第二個(gè)核苷酸。這個(gè)過(guò)程可能產(chǎn)生誤差。 〔知道〕〔圖〕 第六十九頁(yè)，共九十一頁(yè)。 Roche 生化資訊 2024年 1月 第六十五頁(yè)，共九十一頁(yè)。 肼，又稱聯(lián)氨，在堿性環(huán)境中作用于 C〔胞嘧啶〕和 T〔胸腺嘧啶〕 的 C4 和 C6 位置，導(dǎo)致糖苷鍵斷裂。 工作電極循環(huán)伏安掃描曲線 a:固定未 GOD的曲線 ,b:固定 GOD的曲線 第五十六頁(yè)，共九十一頁(yè)。 原理：基于葡萄糖經(jīng)過(guò)固定有葡萄糖氧化酶的酶反響器時(shí)產(chǎn)生過(guò)氧化氫 ,過(guò)氧化氫在一定的正的工作電位下在工作電極外表被氧化 ,釋放出電子 ,產(chǎn)生氧化電流。 硝酸 (分析純 ,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限責(zé)任公司 )。 殼聚糖 (脫乙酰度 90%,上海伯奧生物科技有限責(zé)任公司 )。 鉻版玻璃 (長(zhǎng)沙韶光鉻版有限責(zé)任公司 )。正常人的血糖濃度在神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)下保持相對(duì)恒定的水平。 以某污水為分析樣本，進(jìn)行采樣、計(jì)數(shù)、預(yù)處理及檢測(cè)。研究顯示只要不出現(xiàn)高次諧波，高阻抗系統(tǒng)的擾動(dòng)幅值可以稍大。蓋片采用 SU8 陽(yáng)膜制作的帶有微管道網(wǎng)絡(luò)的聚二甲基硅氧烷 ( PDMS) 薄膜，微管道深度為 30 um，寬度為 300 um，長(zhǎng)度為 15000 um，微管道體積 104 mL。 甘露醇 ( AR，溫州東升化工 ) 。 、微流控芯片上大腸桿菌的電化學(xué)阻抗檢測(cè)方法研究