【正文】 iRNA遞送手段來實現(xiàn)其完整的治療潛力?；隗w積小，屏蔽疏水核心，受體介導(dǎo)的攝取能力等這些有效特征，HDL納米粒是一種理想的藥物載體。例如，乳腺癌細胞通過增加SR B1的表達來增加膽固醇酯的攝取。在卵巢癌患者中， FAK過度表達與侵襲性腫瘤的特征相關(guān)，這有助于弱勢細胞生存。膽酸鈉，140μL （ 100mg/ml溶于為PBS ）形成的蛋黃卵磷脂摩和膽酸的摩爾比為1: 。顆粒明顯可見（放大50000倍），通過使用Zeiss 910透射型電子顯微鏡。所有的細胞都保存在37176。 ）均購自SigmaAldrich公司 ，RNAiFect轉(zhuǎn)染試劑按照廠家建議使用。從微序列分析得到的基因表達數(shù)據(jù)，加載到異丙醇獨創(chuàng)性通路數(shù)據(jù)庫，關(guān)于凋亡基因的不同表達可以驗證選擇性。C孵育過夜。高表達或低表達都是由婦科病理學(xué)家使用下列程序來決定的:強度從1到3,分布是從1到4。每張幻燈片有十個高倍區(qū)域，取平均值。兩個星期后，按照前面描述的開始用奧沙利鉑處理，根據(jù)圖2C所示。本研究中所有的數(shù)據(jù)使用雙側(cè)分析。在50種人類卵巢上皮癌, 96%的腫瘤細胞表達了SRB1受體(圖1 C)。我們進一步驗證rHDL納米粒的遞送是否由受體介導(dǎo)。第四天，我們發(fā)現(xiàn)降低了88% STAT3蛋白水平(圖W3B)，在第6天，蛋白表達有些回升。在HeyA8 模型中，單獨給STAT3 siRNA / rHDL或多烯紫杉醇減少了的62%的腫瘤重量(P ,兩者)。腫瘤節(jié)數(shù)量也有類似的效果（圖2）。與對照組相比，奧沙利鉑和STAT3 siRNA / rHDL偶聯(lián)治療可使腫瘤重量（ 96 ％，P ）和肝臟中轉(zhuǎn)移損壞數(shù)目（86％ ，P ）顯著減少。　STAT3靶向腫瘤微環(huán)境的影響 為了了解STAT3 / rHDL的生物效應(yīng)，在藥物敏感的(SKOV3ip1)和藥物耐藥(HeyA8MDR)卵巢癌模型中進行一系列的體內(nèi)體外實驗。同樣,在HeyA8MDR模型中，就多烯紫杉醇處理對MVD　的降低沒有影響，但多烯紫杉醇和 STAT3 siRNA / rHDL偶聯(lián)治療可顯著降低(圖W6)。從表中知，我們使用RTPCR驗證STAT3基因沉默后最顯著改變的12個基因(圖4 C)。與多烯紫杉醇治療相比，STAT3 siRNA可增高41%的細胞凋亡(P )，這表明在體內(nèi)凋亡效應(yīng)的確實受到直接影響(圖5A)。因此,非特異性遞送系統(tǒng)可能需要更高的劑量來達到有效性和持續(xù)的基因沉默。此外,我們的安全研究表明，對照組siRNA相比，STAT3 / rHDL在小鼠肝臟中吸收沒有任何不良反應(yīng)。所以，藥理干預(yù)靶向STAT3對于這里描述的納米技術(shù)是可能的。Figure of SRB1 mRNA in different human organs and tumors using RTPCR. Actin is used as a loading control.Figure of systemic delivery of fluorescentlabeled siRNA/ control siRNA/rHDL or untagged siRNA/rHDL was injected (IV or IP), and 48 hours later, organs were harvested. Freshfrozen tissues were counterstained with Hoechst, and the level of fluorescentlabeled siRNA (red) was assessed with fluorescent microscopy. Average fluorescence uptake is represented by the graphs. *P .05 pared with untagged siRNA/rHDL. Hamp。在卵巢癌患者中，F(xiàn)AK的過度表達與腫瘤相關(guān)功能在所有存活者中并不明顯。STAT3是一個良好的轉(zhuǎn)錄因子，涉及到腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移的許多關(guān)鍵過程。遞送siRNA的rHDL傳輸系統(tǒng)具有許多的優(yōu)點。Figure of STAT3 silencing on apoptosis. STAT3 was silenced using STAT3specific siRNA in (A)SKOV3ip1 and (B) HeyA8MDR cells with and without docetaxel treatment, and apoptosis was assessed using flow cytometry (annexin V). Average percent apoptosis (Annexin V/PE–positive SKOV3 cells) and average percent apoptosis pared with control (annexin V/PE–positive HeyA8MDR cells) are reported. Error bars, SEM 討論 本研究的關(guān)鍵發(fā)現(xiàn)就是在體內(nèi)rHDL納米粒能有效地傳遞siRNA以沉默基因，這些基因?qū)Π┌Y的增長和發(fā)育很重要。STAT3基因沉默大量減少了關(guān)鍵生存基因，這些基因主要用來調(diào)節(jié) MAP 激酶和AKT通路（圖4）。因此，我們在SKOV3ip1卵巢癌模型中用TUNEL染色法(圖3)，在HeyA8MDR模型活化型半胱天冬酶染色法(圖W6)研究了腫瘤細胞的凋亡效果。與對照組比較，STAT3 siRNA / rHDL 和多烯紫杉醇聯(lián)合治療可抑制48%腫瘤細胞增殖(P )(圖3)。在兩個不同治療組中，動物體重或肝功能測試（ AST和ALT比值）沒有顯著差異（圖W5 ，A和B ）。相比于對照組和多烯紫杉醇單藥療法，STAT3 siRNA / rHDL是否偶聯(lián)多烯紫杉醇都能顯著降低上腹部和薄壁肝組織的轉(zhuǎn)移。在SKOV3ip1模型中結(jié)果類似(圖2 B)。另一個關(guān)于癌癥生長和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵基因，F(xiàn)AK也具有類似的結(jié)果(圖W3C)。rHDL納米粒在肝臟中的吸收最高，而在大腦、心臟、肺、腎、或脾中吸收很少。用RTPCR也檢測了一些細胞系(圖1 D)。反義寡賴氨酸多肽含有大約40賴氨酸殘基，這可使siRNA偶聯(lián)到rHDL。小鼠在第2，4或6天解剖 。所有的實驗都是由MD安德森癌癥中心機構(gòu)動物護理和使用委員會批準。凋亡小體通過綠色熒光表示。肌動蛋白或黏著斑蛋白證實相同的負載量。人類肝中的cDNA利用SRB1表達作為陽性對照組。分別使用1:，對照siRNA和STAT3 siRNA組無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)6 h?！◇w外基因沉默STAT3 （靶序列539。細胞系和培養(yǎng)條件衍生和源于人體上皮卵巢癌細胞系的HeyA8 ， SKOV3ip1，HeyA8 MDR細胞系在之前已有研究。4 ℃孵育12h， 接著用2L的PBS透析 2天，換 3次透析緩沖液。原料與方法rHDL納米粒的制備和siRNA的偶聯(lián)siRNA偶聯(lián)到rHDL納米粒，并儲存在20176。 siRNA基因沉默治療非常有效，其他方法很難靶向這些基因。該rHDL納米粒的組成部分有磷脂酰膽堿，載脂蛋