【正文】 動(dòng)相的選擇 8　容量因子的選擇 8　本課題研究的意義 82 實(shí)驗(yàn) 9　實(shí)驗(yàn)儀器 9 試劑與溶液 9 10　樣品前處理 10 色譜條件 10 質(zhì)譜條件 103 結(jié)果與討論 10 提取液的選擇 10 色譜條件的優(yōu)化 11 流動(dòng)相的選擇 11 流速的選擇 11 進(jìn)樣量的選擇 12 色譜柱及柱溫的選擇 12 方法的靈敏度 12　黃曲霉毒素B1的標(biāo)準(zhǔn)曲線 13 重復(fù)性與檢出限 14　樣品測(cè)定 14　根據(jù)質(zhì)譜圖分析黃曲霉毒素BBGG MM2 17結(jié) 論 21致 謝 22參考文獻(xiàn) 23231 引言　背景介紹黃曲霉毒素(aflatoxin,AF)是對(duì)人類和動(dòng)物危害大的真菌毒素之一。黃曲霉毒素主要危害動(dòng)物的肝臟器官，有誘導(dǎo)突變、抑制免疫和致癌的作用，可引起人和動(dòng)物的急性中毒、慢性中毒和引起癌癥。　黃曲霉毒素的分布黃曲霉毒素存在于土壤、動(dòng)植物、各種堅(jiān)果、特別是花生和核桃中?！〔煌N類的糧食作物中黃曲霉毒素成份的介紹　大豆原料大豆和豆粕在運(yùn)輸、貯藏過程中，若水分、溫度控制不當(dāng)，很容易受到霉菌污染，發(fā)生霉變。同時(shí)在比較多的樣品中都檢測(cè)到了MM2，盡管MM2的毒性相對(duì)于BB2要弱一些，但是由于其在一些樣品花生及其制品中竟然達(dá)到了4ppb，表明MM2可能不僅僅是由BB2在體內(nèi)的代謝轉(zhuǎn)化而成，僅存在于動(dòng)物乳汁及乳制品中，在花生及其制品長(zhǎng)期不良儲(chǔ)存條件下或加工過程中，各種產(chǎn)毒霉菌的嚴(yán)重污染也有可能導(dǎo)致MM2的產(chǎn)生[10]。環(huán)境溫度超過30℃，黃曲霉菌落生長(zhǎng)都較迅速，高水活度的培養(yǎng)條件下在10天時(shí)間里菌絲基本覆蓋90mm的培養(yǎng)皿。AF的檢測(cè)程序可分為3個(gè)步驟：萃取、凈化、測(cè)定。盧艷杰等介紹了過壓薄層色譜法OPLC結(jié)合光度計(jì)，成功地對(duì)多種食品中的黃曲霉毒素BB2 、G1和G2進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)該方法還適用于樣品的提純和分離，一次可對(duì)十個(gè)樣品進(jìn)行分析，做到快速、有效、低耗地定量食品中的AFB。因此，通常用兩種方法來提高B1和G1的熒光性，一是通過改變流動(dòng)相或改進(jìn)檢測(cè)器來降低物質(zhì)熒光性的損失，二是對(duì)熒光性弱的物質(zhì)進(jìn)行柱前或柱后衍生以增強(qiáng)其熒光性。該方法具有快速、靈敏、特異性強(qiáng)、成本低等特點(diǎn)，適合于 AFB 大批樣品的檢測(cè)。 液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)解決了傳統(tǒng)液相檢測(cè)器靈敏度和選擇性不夠的缺點(diǎn)，提供了可靠、精確的相對(duì)分子質(zhì)量及結(jié)構(gòu)信息，簡(jiǎn)化了試驗(yàn)步驟，節(jié)省了樣品準(zhǔn)備時(shí)間和分析時(shí)間，特別是適合親水性強(qiáng)、揮發(fā)性強(qiáng)的有機(jī)物，熱不穩(wěn)定化合物及生物大分子的分離分析，因此是對(duì)食品的生產(chǎn)、運(yùn)輸?shù)冗^程進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控的有效分析手段，在食品工業(yè)中一定會(huì)得到更加廣泛的應(yīng)用。 K1與K2容量因子是衡量色譜柱對(duì)某組分保留能力總的平衡常數(shù)，分配系數(shù)是反映組分與固定相，流動(dòng)之間的熱力學(xué)平衡常數(shù)，其中Vs/Vm稱為相比，是固定相體積與流動(dòng)相體積之比。因此，許多研究者在不同的領(lǐng)域研究。2 實(shí)驗(yàn)　實(shí)驗(yàn)儀器1200LC—6310MSDTrap 系統(tǒng)，美國(guó)安捷倫公司出品。甲醇(一級(jí)色譜純)，天津市四友精細(xì)化學(xué)品有限公司出品?！悠非疤幚矸Q取粉碎過篩（10目）樣品20 g（ g）于250mL的具塞錐形瓶中，加入5g氯化鈉和30mL正己烷，搖勻，在25℃水浴恒溫振蕩器中振蕩30min，經(jīng)15cm快速定性濾紙將正己烷濾去。用1mL色譜純甲醇潤(rùn)洗指形管。稱取四份樣品，分別加入100%的丙酮、氯仿、甲醇、乙醇，結(jié)果表明用甲醇提取的效果較好，分離效果較好。 進(jìn)樣量的選擇 本文考察了進(jìn)樣量13181。從表2可見，在試驗(yàn)溫度范圍內(nèi)，隨著色譜柱溫度的升高，組分的容量因子隨之增加，保留時(shí)間相應(yīng)的減少。L，共9次，以測(cè)定進(jìn)樣的重復(fù)性，DAD1 A檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為364nm，甲醇—水為流動(dòng)相，結(jié)果見表4。g/kg）無損大豆甲醇60%無無無無無玉米甲醇60%無無無無無小麥甲醇60%無無無無無小麥甲醇80%無無無無無小麥甲醇90%無無無無無花生甲醇80%無無無無無受損大豆甲醇60%無無無無無受損大豆甲醇90%無無無無無受損大豆甲醇80%無無無無無受損大豆甲醇70%無無無無無圖2 進(jìn)樣量為7181。其中未檢測(cè)到黃曲霉毒素的花生、玉米、小麥、無損大豆的色譜圖如下：圖3 60%甲醇提取花生的色譜圖（甲醇/水為流動(dòng)相）圖4 60%甲醇提取玉米的色譜圖（甲醇/水為流動(dòng)相）圖5 60%甲醇提取小麥的色譜圖（甲醇/水流動(dòng)相）圖6 60%甲醇提取無損大豆的色譜圖（甲醇/水流動(dòng)相）　根據(jù)質(zhì)譜圖分析黃曲霉毒素BBGG MM2黃曲霉毒素的相對(duì)分子質(zhì)量分別為B1：31B2：31G1：32G2：3分子式：B1：C17H12OB2：C17H14OG1：C17H12OG2：C17H14OM1：C17H12OM2：C17H14O7，黃曲霉毒素可以與H、Na、K結(jié)合形成不同的有機(jī)化合物，兩分子的黃曲霉毒素也可以與H、Na、K結(jié)合，具體分子量見下表：表6 不同分子式的黃曲霉毒素分子量黃曲霉毒素[M+H]+[M+Na]+[M+K]+[2M+H]+[2M+Na]+[2M+K]+B1313335351625663647B2315337353629651667G1329351367657679695G2331353369661683699M1329351367657679695M2331353369661683699在樣品質(zhì)譜圖中查找上表中所給的分子量，看樣品的質(zhì)譜圖中是否含有黃曲霉毒素的準(zhǔn)分子離子峰，根據(jù)這些條件，判斷樣品中是否含有黃曲霉毒素，質(zhì)譜圖如下：圖7 60%甲醇提取玉米中黃曲霉毒素B2（分子量353）的質(zhì)譜圖圖7顯示，在玉米（60%甲醇）質(zhì)譜圖中，正離子ESI在m/z （分子量353）的準(zhǔn)分子離子峰[M+K]+ 峰，提示該樣品中可能含有黃曲霉毒素B2。本實(shí)驗(yàn)凈化的時(shí)候用的是C18反向柱，甲醇為洗脫劑，這樣只是除去了一些非極性的物質(zhì)，以免在進(jìn)樣時(shí)損壞柱子，而一些極性大的物質(zhì)被洗脫了出來，結(jié)果造成出峰較雜，黃曲霉毒素濃度更小，低于最低檢出限而不出峰。韓老師精益求精，事實(shí)就是的研究態(tài)度讓我受益匪淺，韓老師學(xué)識(shí)淵博，無論是在理論學(xué)習(xí)階段，還是在論文的選題、資料查詢、開題報(bào)告、研究和撰寫的每一個(gè)環(huán)節(jié)，都給予悉心的指導(dǎo)和幫助，循循善誘的教導(dǎo)和不拘一格的思路給予我無盡的啟迪。同時(shí)，感謝同組實(shí)驗(yàn)的張德剛、王宏偉、余明朝等同學(xué)實(shí)驗(yàn)過程中給予的無私幫助，還有學(xué)姐郭衛(wèi)的耐心指導(dǎo)！最后，我要向關(guān)心和支持我的所有老師、同學(xué)和朋友們表示真摯的謝意！感謝他們對(duì)我的關(guān)心、關(guān)注和支持！