【正文】 王金良，作者：趙銳，張小江，王輝，謝秀麗。 106/L，特別有“核左移”未成熟的或桿狀核白細(xì)胞 )，皮膚粘膜出血，昏迷，多器官衰竭，血壓降低， CRP 升高及呼吸快，特殊患者 (如血液病 )出現(xiàn)粒細(xì)胞減少 (成熟的多形核白 細(xì)胞 1000179。 3．培養(yǎng)瓶 消毒程序 1)70％酒精擦拭血培養(yǎng)瓶橡皮塞，作用 60s。 5．采血量 成人采血量是 8～ l0ml，兒童 l～ 5ml。入院前兩周內(nèi)接受抗菌藥物治療的患者，連續(xù)三天，每天采集 2 份。 2．不合格血培養(yǎng)標(biāo)本的處理 1)拒收培養(yǎng)瓶：血培養(yǎng)瓶標(biāo)識(shí)與化驗(yàn)申請(qǐng)單不符，培養(yǎng)瓶破裂或明顯污染。 發(fā)現(xiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)信號(hào)，應(yīng)無(wú)菌抽取培養(yǎng)物，涂片行革蘭染色，發(fā)現(xiàn)細(xì)菌，盡快報(bào)告染色結(jié)果；根據(jù)染色特征，選擇合適的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)種，見(jiàn)表 1。 細(xì)菌鑒定見(jiàn) M16，藥敏試驗(yàn)見(jiàn) M5。大多數(shù)播散性分枝桿菌感染是由鳥(niǎo)分枝桿菌復(fù)合體引起，通常出現(xiàn)于 CD4 細(xì)胞 100／ mm3 的 AIDS 患者。固相培養(yǎng)基采用瓊脂補(bǔ)充到胰酶消化大豆瓊脂，胰蛋白胨瓊脂或布魯菌瓊脂，使瓊脂的終濃度為 2． 5％。也可將血培養(yǎng)物傳種至血瓊脂乎板上，然后交叉劃線接種金黃色葡萄球菌，在金黃色葡萄球菌菌落周?chē)袪I(yíng)養(yǎng)變異鏈球菌衛(wèi)星樣菌落。如果懷疑真菌性心內(nèi)膜炎，應(yīng)進(jìn)行裂解一離心血培養(yǎng)。 氯化血紅素 5mg 維生素 K 0． 5mg 制備方法： 加熱溶解上述成份，高壓 121℃， 15 分鐘，水浴冷卻至 50C，無(wú)菌手續(xù)加實(shí)驗(yàn)室 主 題 文件編號(hào) W001 廣東省汕尾逸輝基金醫(yī)院 檢驗(yàn)科臨床微生物室 血培養(yǎng)操作規(guī)范 第 13 頁(yè) 共 137 頁(yè) 第 1 版 第 0次修改 撰寫(xiě)日期： 2020． 05． 10． 起 草 人 操 作 人 批 準(zhǔn) 人 生效日期 入脫纖維馬血 (或羊血 )，氯化血紅素和維生素 K。從腎臟排泌出來(lái)的尿液正常情況下是無(wú)菌的。這種方式引起的感染多為單一細(xì)菌感染，大腸埃希菌是主要致病菌，其次是克雷伯菌屬和變形桿菌屬 (后兩者遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于前者 )，有時(shí)也會(huì)發(fā)生混合感染?？梢蚧颊叩哪挲g和健康情況而不同，新生兒尿路感染的癥狀往往是非特異性的、模糊的，可表現(xiàn)有厭食，嘔吐，倦怠，無(wú)發(fā)熱的菌血癥等；嬰兒期直到 2 歲，常有高熱； 2 歲以后的尿路感染才會(huì)有典型的臨床表現(xiàn)；老年患者的尿路感 染常缺乏明顯的癥狀，更易造成菌血癥和 急性腎功能衰竭。該方法是評(píng)估膀胱內(nèi)細(xì)菌感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”。 其他方法 收集特定部位的尿標(biāo)本可以通過(guò)侵入的方式如膀胱鏡或手術(shù)中進(jìn)行采集。l 接種于血平板和麥康凱平板或中國(guó)蘭平板， 3537℃培養(yǎng) 18～24h。1 接種量者，將平板菌落數(shù)乘以 102(CFU／ m1)。 (五 )結(jié)果報(bào)告 l、初步報(bào)告：在分離出細(xì)菌后，根據(jù)其在培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)結(jié)果，做革蘭染色，并做出初步報(bào)告。清潔中段尿是最常用獲得尿培養(yǎng)標(biāo)本的方法，但在留取標(biāo)本前須向病人詳細(xì)說(shuō)明標(biāo)本的留取方法和注意事項(xiàng)，以保證留取標(biāo)本的質(zhì)量，同時(shí)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)進(jìn)行正確評(píng)價(jià)。不同的培養(yǎng)基有助于分離不同種類(lèi)的細(xì)菌，所以不能以血平板代替“規(guī)范”中規(guī)定的中國(guó)蘭、麥康凱和巧克力平板。 尿頻時(shí)，膀胱內(nèi)細(xì)菌停留時(shí)間短。 用中段尿做厭氧菌培養(yǎng) 附錄 血瓊脂平板 配方一 [成分 ] 普通瓊脂 100ml 無(wú)菌脫纖維綿羊血 8— l0ml [制法 ]： 將已滅菌的無(wú)菌普通瓊脂 (Ph 7． 6)隔水加熱融化。 巧克力平板 配方一 [成分 ]：與血瓊脂平板配方一相同。 IsoVitaleX 添加物 Vit B12 g L 一谷氨酰胺 腺嘌呤 鹽酸鳥(niǎo)嘌呤 L 一胱氨酸 (先溶于 lmol／ L NaOH) P 一氨基苯甲酸 g 葡萄糖 100g 輔酶 1 g 脫羧輔酶 g 硝酸鐵 鹽酸硫胺素 鹽酸半胱氨酸 蒸餾水 1000ml 過(guò)濾除菌，分裝備用。 冷卻至 50℃ 左右，傾注平板。 下呼吸道感染患者可有發(fā)熱、咳嗽和咳痰，痰呈膿性、粘稠或血性，可伴有胸痛、氣急，肺部聞及濕羅音、白細(xì)胞總數(shù)及嗜中性粒細(xì)胞比例明顯增高， x線檢查提示肺部有炎癥性浸潤(rùn)或胸腔積液等體癥，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致感染性休克和呼吸衰竭，因此臨床診斷一般不難；細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)?zāi)苊鞔_感染病原，并提供有關(guān)抗菌藥物對(duì)分離菌的抗菌活性等信息，有助于疾病治療、流行病學(xué)調(diào)查研究和醫(yī)院感染的監(jiān)測(cè)。 3．小兒取痰法 用彎壓舌板向后壓舌，將拭子伸入咽部，小兒經(jīng)壓舌刺激咳嗽時(shí)，可噴出肺部或氣管分泌物粘在拭子上送檢。 標(biāo)本涂片細(xì)胞學(xué)檢查 白細(xì)胞數(shù) 10/低倍鏡和鱗狀上皮細(xì)胞數(shù) 25/低倍鏡，提示該標(biāo)本已污染正常菌群，建議重送標(biāo)本。 2．細(xì)菌涂片染色檢查 挑取痰液中膿性或帶血部份涂成均勻薄片，革蘭染色后鏡檢，油鏡下觀察細(xì)菌形態(tài)，排列和染色性，可初步推定菌屬 (或種 )，涂片中所見(jiàn)細(xì)菌的量及吞噬細(xì)胞內(nèi)是否有細(xì)菌等。 實(shí)驗(yàn)室 主 題 文件編號(hào) W003 廣東省汕尾逸輝基金醫(yī)院 檢驗(yàn)科臨床微生物室 下呼吸道感染 細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn) 操作規(guī)范 第 24 頁(yè) 共 137 頁(yè) 第 1 版 第 0次修改 撰寫(xiě)日期： 2020． 05． 10． 起 草 人 操 作 人 批 準(zhǔn) 人 生效日期 痰及下呼吸道分泌物標(biāo)本 ↓ 肉眼觀察及涂片革蘭染色細(xì)菌學(xué)和細(xì)胞學(xué)顯微鏡鏡檢 ↓ ↓ ↓ 初步報(bào)告 合格標(biāo)本 不合格標(biāo)本 ∣ 培養(yǎng)前處理 ∣ ∣ ∣ ↓ ∣ ∣ 拒收及建議重新采集合格標(biāo)本 ∣ ∣ ∣ ↓ ↓ ↓ ∣ 血平板 巧克力平板 麥康凱 /中國(guó)蘭平板 ∣ (5％ C02 環(huán)境 ) (5％ C02，環(huán)境 ) (需氧環(huán)境 ) ∣ ↓ ∣ 菌落觀察 涂片染色鏡檢 ↓ ↓ 結(jié)合涂片細(xì)胞學(xué)和細(xì)菌學(xué)顯微鏡鏡檢結(jié)果與培養(yǎng)結(jié)果綜合分析 ↓ ↓ ↓ 細(xì)菌鑒定 藥敏試驗(yàn) ↓ ↓ 結(jié)合涂片細(xì)胞學(xué)和細(xì)菌學(xué)顯微鏡鏡檢與細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)鑒定、藥敏結(jié)果綜合分析 ↓ 結(jié)果報(bào)告 (最終報(bào)告 ) 圖 1 痰及下呼吸道標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的操作流程 (3)結(jié)果分析 痰及下呼吸道分泌物標(biāo)本易受到定植在上呼吸道的正常菌群污染，進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)時(shí)通常可從送檢的標(biāo)本中分離出多種細(xì)菌，確定哪一種分離細(xì)菌是引起下呼吸道感染的病原菌，這對(duì)臨床診斷與治療感染性疾病至關(guān)重要。 四、分離培養(yǎng) 1．痰標(biāo)本培養(yǎng)前處理 不含或含粘液很少的標(biāo)本，可直接接種，遇有含大量粘液的標(biāo)本，應(yīng)加入等量的液化劑 (如 的 10g/L 胰酶溶液等 )，放置 35℃待充分液化再行接種。 運(yùn)送不符合規(guī)定 標(biāo)本采集后送檢時(shí)間超過(guò) 2h 拒收。 (二 )標(biāo)本驗(yàn)收 遇有不合格標(biāo)本，應(yīng)及時(shí)與臨床聯(lián)系，報(bào)告不合格標(biāo)本拒收的具體理由。 (一 )采集方法 1．自然咳痰法 以晨痰為佳，采集標(biāo)本前應(yīng)用清水、冷開(kāi)水漱口或牙刷清潔口腔和牙齒，有假牙者應(yīng)取下假牙。 待冷卻至 50℃ 左右，加入中國(guó)藍(lán)、玫瑰紅水溶液混勻，立即傾注干板，凝固后備用。 將瓊脂加于余下的 500 mi水中加熱溶解。 取出并冷卻至 50℃ 左右，傾注平板，經(jīng)無(wú)菌試驗(yàn)后存冰箱內(nèi)備用。 待凝固后，抽樣于 37℃ 培養(yǎng) 1 日～ 24 小時(shí)行無(wú)菌試驗(yàn)，如無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)置冰箱中備用。 不同種類(lèi)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度不同、營(yíng)養(yǎng)要求不同，菌落計(jì)數(shù)有所不同。并且在一些病人即使菌落數(shù)較少，也有明顯的臨床意義。定量接種的方法有直接劃線法和傾注平板法兩種，后者由于操作步驟繁瑣，已幾乎不被臨床單位使用。1 無(wú)菌生長(zhǎng) (1000CFU／ m1)”，或“接種 100181。 不同來(lái)源標(biāo)本結(jié)果解釋 (見(jiàn)表 1) 表 l 不同來(lái)源標(biāo)本結(jié)果解釋及實(shí)驗(yàn)室處理方法 標(biāo)本來(lái)源 菌落數(shù) CFU／ m1 結(jié) 果解釋及實(shí)驗(yàn)室處理 清潔中段尿 5179。l接種量。 三、實(shí)驗(yàn)室檢查 (一 )標(biāo)本的驗(yàn)收 工作人員應(yīng)首先檢查化驗(yàn)單所提供的信息，信息應(yīng)包括：標(biāo)本收集時(shí)間、標(biāo)本收集方式、病人是否已使用抗生素等?？蓽p少尿液標(biāo)本污染，準(zhǔn)確地反映膀胱感染情況。 二、標(biāo)本采集和運(yùn)送 (一 )容器： l、由不與尿液成份發(fā)生反應(yīng)的惰性材料制成； 潔凈、無(wú)菌、加蓋、密封、防滲漏； 不含防腐劑和抑菌劑，一次性使用； 容積應(yīng) 50ml、開(kāi)口 — 直徑應(yīng) 4cm、具有較寬的底部、盒蓋易于開(kāi)啟。 血行感染：是一種比較少見(jiàn)的感染方式。尿路感染并非是一種單一的疾病，而是一種臨床綜合癥。 貯藏： 4℃， 30 天 質(zhì)控： 難辨羧菌 ATCCl3124：生長(zhǎng)，雙溶 血 脆弱擬桿菌 ATCC25285：生長(zhǎng) 主要參考文獻(xiàn) 1． Dunne JR， Frederick S Nolte， Michael L Wilson。 附二：主要培養(yǎng)基制備 1．血瓊脂培養(yǎng)基 (1000mi) 成份： 哥倫比亞瓊脂基礎(chǔ) 39g 蒸餾水 950ml 177。裂解一離心技術(shù)是一種分離真菌的有效方法，特別是對(duì)于營(yíng)養(yǎng)要求苛刻的雙相實(shí)驗(yàn)室 主 題 文件編號(hào) W001 廣東省汕尾逸輝基金醫(yī)院 檢驗(yàn)科臨床微生物室 血培養(yǎng)操作規(guī)范 第 12 頁(yè) 共 137 頁(yè) 第 1 版 第 0次修改 撰寫(xiě)日期： 2020． 05． 10． 起 草 人 操 作 人 批 準(zhǔn) 人 生效日期 真菌。卡斯塔涅達(dá)培養(yǎng)瓶?jī)?nèi) CO2 濃度應(yīng)為 5％～ 10％， 35～ 37℃孵育，每 48h 觀察有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。將裂解一離心管中的沉淀物接種至 7Hll培養(yǎng)基中，如果記錄了采集的血標(biāo)本量，裂解一離心法可進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)定量分析。報(bào)告之前，應(yīng)該回顧一下患者近期標(biāo)本微生物培養(yǎng)情況，這些結(jié)果有助于解釋感染微生物的來(lái)源。 b 增加真菌培養(yǎng)基 (如：沙保弱葡萄糖瓊脂 )和 30℃孵育； c：接種硫羥乙酸鹽肉湯中。 2)補(bǔ)做培養(yǎng)瓶：血標(biāo)本采集后放置 12h 以上 (手工法除外 )，用不適當(dāng)類(lèi)型的培養(yǎng)瓶收集標(biāo)本，用過(guò)期的培養(yǎng)瓶收集標(biāo)本，采血量不足等。 7．標(biāo)本運(yùn)送 采血后應(yīng)該立即送檢，如不能立即送檢，需室溫保存或置 35℃～ 37℃孵箱中，切勿冷藏。 6．血培養(yǎng)份數(shù)和采血時(shí)間 采血培養(yǎng)應(yīng)該盡量在使用抗菌藥之前進(jìn)行，在 24h內(nèi)采集 2～ 3份血培養(yǎng) (一次靜脈采血注入到多個(gè)培養(yǎng)瓶中應(yīng)視為單份血培養(yǎng) )。如果是自配帶塞子的三角瓶，此步驟可免去。新生兒菌血癥，應(yīng)該增加尿液和腦脊液培養(yǎng)。一過(guò)性菌血癥 (Transient bacteremia)常發(fā)生于對(duì)感染灶 (如膿腫、癤、蜂窩組織炎 )的外科處理、粘膜的創(chuàng)傷性操作 (如牙齒修復(fù)、膀胱鏡檢、尿道擴(kuò)張術(shù)、各種插管、引產(chǎn)和乙狀結(jié)腸鏡檢查 )和易污染的外科手術(shù) (如經(jīng)尿道的前列腺切除、陰道子宮切除術(shù)和燒傷感染的清創(chuàng)術(shù) )，亦可發(fā)生于全身或局部感染的早期 (如腦膜炎、肺炎、化膿性關(guān)節(jié)炎、骨髓炎、腹膜炎、膽囊炎、小腸結(jié)腸炎、外傷感染或手術(shù)感染 )。 氯化血紅素 5mg