【正文】 University of Technology and Science Teaching and Research Section 如白蛋白 不利因素： 疏水性，包括暴露的疏水基團、疏水蛋白所占的 %等。沉淀內部離子排列雜亂無章，并且包含有大量水分子，因而結構疏松，體積龐大，難以沉降。 Department of Biochemical Engineering 3 第三章 沉淀技術 第一節(jié) 概述 ?沉淀是溶液中的溶質有液相變成固相析出的過程，表示一個新的凝結相的形成過程，或由于加入沉淀劑使某些離子成為難溶化合物而沉積的過程。 ?沉淀 VS結晶，本質上同一種過程。 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section 如纖維蛋白原。 Department of Biochemical Engineering 11 第三章 沉淀技術 加入高濃度中性鹽后，鹽離子與生物分子表面的帶相反電荷的離子基團結合， 中和 了生物分子表面的電荷，降低了生物分子與水分子之間的相互作用，此時生物分子很容易相互聚集，在溶液中的溶解度降得很低，從而形成沉淀從溶液中析出。 2. β分段鹽析 ：在一定的離子強度下（ I ） ，改變溶液的 pH、 T ，達到沉淀的目。 Department of Biochemical Engineering 18 第三章 沉淀技術 不易引起變性，有穩(wěn)定酶與蛋白質結構的作用。 將其研成細粉，在攪拌下緩慢均勻少量多次地加入，接近計劃飽和度時，加鹽的速度更要慢一些，盡量避免局部硫酸銨濃度過大而造成不應有的蛋白質沉淀。 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 25 第三章 沉淀技術 脫鹽 透析 超濾 凝膠過濾層析 over Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 29 第三章 沉淀技術 影響有機溶劑沉析的因素 （一）溫度 多數生物大分子如蛋白質、酶和核酸在有機溶劑中對溫度特別敏感，溫度稍高就會引起變性，且有機溶劑與水混合時產生放熱反應，因此必須 預冷 ，操作要在冰鹽浴中進行，加入有機溶劑時必須 緩慢且不斷攪拌 以免局部過濃。 Department of Biochemical Engineering 32 第三章 沉淀技術 （四）離子強度 ?少量的中性鹽對蛋白質變性有良好的保護作用，但鹽濃度過高會增加蛋白質在水中的溶解度，降低了沉淀效果，通常是在 低濃度緩沖液中沉淀蛋白質 。 ? 沉析所得的固體樣品，如果不是立即溶解進行下一步的分離，則應盡可能抽干沉析物，減少其中有機溶劑的含量，如若必要可以裝透析袋透析脫除有機溶劑，以免影響樣品的生物活性 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section ? 由于許多蛋白質的等電點十分接近，而且?guī)в兴さ牡鞍踪|等生物大分子仍有一定的溶解度，不能完全沉淀析出，因此，單獨使用此法分辨率較低，因而此法常與鹽析法、有機溶劑沉淀法或其他沉淀劑一起配合使用 ，以提高沉淀能力和分離效果。 原理 聚合物的作用認為與有機溶劑相似，能降低水化度，使蛋白質沉淀。所用的PEG濃度通常為 20％，濃度再高，會使粘度增大，造成沉淀的回收比較困難。 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 50 第三章 沉淀技術 β 甘露聚糖酶（ β mannanase） 枯草芽孢桿菌發(fā)酵 丙酮沉淀 /(NH4)2SO4/PEG 比較后丙酮最佳 ? 不同沉淀技術的比較 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section 選擇性熱變性 選擇性酸堿變性 選擇性變性劑 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section 但它的存在會干擾 A280和 Lowry法測定蛋白質． Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section 使低分子量的蛋白質沉淀，需加入大量 PEG：而使高分子量的蛋白質沉淀，加入的量較小 。 Department of Biochemical Engineering 39 第三章 沉淀技術 實例 ① 從豬胰臟中提取胰蛋白酶原：胰蛋白酶原的 pI＝，可先于 pH ，除去共存的許多酸性蛋白質 (pI=3． O)。 Department of Biochemical Engineering 36 第三章 沉淀技術 ?等電點沉淀法 原理 ?調節(jié)兩性生化物質溶液的 pH值，以達到某一生化物質的等電點，使其從溶液中沉淀析出而實現分離的技術稱為等電點沉析技術。 Anhui University of Technology and Science Teaching and Rese