【正文】 率 (resolution) 分辨率是指能分辨出的相鄰兩個(gè)物點(diǎn)間最小距離的能力， 這種距離稱為分辨距離。 3. 熒光顯微鏡 (Fluorescence microscope) 以紫外線為光源，用以照射被檢物體，使之發(fā)出熒光，然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。 5. 放射自顯影 (autoradiography) 放射自顯影的原理是利用放射性同位素所發(fā)射出來的帶電離子 (α或β粒子 )作用于感光材料的鹵化銀晶體，從而產(chǎn)生潛影，這種潛影可用顯影液顯示，成為可見的 像 ，因此，它是利用鹵化銀乳膠顯像檢查和測(cè)量放射性的一種方法。 STEM能夠獲得 TEM 所不能獲得 的一些關(guān)于樣品的特殊信息。 10. 鑄型技術(shù) (shadow casting) 鑄型技術(shù)是電子顯微鏡中一種重要的增強(qiáng)背景和待觀察樣品反差的方法。在真空條件下，用冰刀橫切冰凍樣品，使樣品內(nèi)層被 分開露出兩個(gè)表面。該顯微鏡設(shè)計(jì)的沿 Z字形掃描， 可保持電流的恒定。 ⑤ 不需任何透鏡， 體積小，有人稱之為 口袋顯微鏡 (pocket microscope)。如免疫鐵蛋白技術(shù)是將 含鐵蛋白通過一種低分子量的雙功能試劑與抗體結(jié)合，成為一種雙分子復(fù)合物，它既保留抗體的免疫活性，又具有電鏡下可見的高電子密度鐵離子核心，因此用鐵蛋白標(biāo)記的抗體可通過電鏡免疫化學(xué)的方法在電鏡下定位細(xì)胞中的抗原。 19. 顯微熒 光光度術(shù) (microfluorometry) 利用顯微分光光度計(jì)對(duì)細(xì)胞內(nèi)原有能發(fā)光的物質(zhì)或?qū)?xì)胞內(nèi)各種化學(xué)成分用不同的熒光經(jīng)熒光探針標(biāo)記后進(jìn)行定位、定性和定量地測(cè)定，稱為顯微熒 光 光 度 術(shù) ， 也 稱 細(xì) 胞 熒 光 光 度 術(shù)(cytofluorometry)。由于不同分子中原子核的化學(xué)環(huán)境不同， 將會(huì)有不同的共振頻率， 產(chǎn)生不同的共 振譜。最常用的原代培養(yǎng)有組織塊培養(yǎng)和分散細(xì)胞培養(yǎng)。基本過程包括細(xì)胞融合形成異核體 (heterokaryon)、異核體通過細(xì)胞有絲分裂進(jìn)行核融合、最終形成單核的雜種細(xì)胞。其原理是 : B 淋巴細(xì)胞能夠產(chǎn)生抗體， 但在體外不能進(jìn)行無限分裂 。 28. 移動(dòng)區(qū)帶離心 (movingzone centrifugation) 這一方法需要用蔗糖或甘油制備輕微的連續(xù)密度，然后將待分離的樣品加在離心管的最上層，形成一狹窄的帶，再通過較長時(shí)間的離心。只要被分離顆粒間的密度差異大于 1% 就可用此法分離。 30. 層析分離技術(shù) (chromatography) 根據(jù)蛋白質(zhì)的形態(tài)、大小和電荷的不同而設(shè)計(jì)的物理分離方法。那些沒有親和力的蛋白質(zhì)由于不被吸附，直接流出，從而與被分離的蛋白質(zhì)分開，然后選用適當(dāng)?shù)南疵撘海? 改變結(jié)合條件將被 結(jié)合的蛋白質(zhì)洗脫下來，這種分離純化蛋白質(zhì)的方法稱為親和層析?；蚬こ碳夹g(shù)的兩個(gè)最基本的特點(diǎn)是分子水平上的操作和細(xì)胞水平上的表達(dá)，而分子水平上的操作即是體外重組的過程，實(shí)際上是利用工具酶對(duì) DNA 分子進(jìn)行 外科手術(shù) 。存在于細(xì)胞結(jié)構(gòu)中的膜不 僅薄 , 而 且 具 有 半 透 性(semipermeable membrane),允許一些不帶電的小分子自由通過。由于細(xì)菌沒有內(nèi)膜 ,所以細(xì)菌的細(xì)胞質(zhì)膜代行胞質(zhì)膜的作用。兩個(gè)亞基鏈呈現(xiàn)反向平行排列 , 扭曲成麻花狀，形成異二聚體 , 兩個(gè)異二聚體頭 頭連接成 200nm 長的四聚體。 9. 帶 3 蛋白 (band 3 protein) 與血型糖蛋白一樣都是紅細(xì)胞的膜蛋白 ,因其在PAGE 電泳分部時(shí)位于第三條帶而得名。帶 蛋白本身不同肌動(dòng)蛋白相連，因?yàn)樗鼪]有與肌動(dòng)蛋白連接的位點(diǎn)。磷脂又分為兩大類 : 甘油磷脂和鞘磷脂。膽固醇的分子較其他膜脂要小 , 雙親媒性也較低。實(shí)際上 ,整合蛋白幾乎都是完全穿過脂雙層的蛋白 ,親水部分暴露在膜的一側(cè)或兩側(cè)表面 。實(shí)際上 ,有時(shí)外周蛋白與整合蛋白是難以區(qū)分的 ,因?yàn)樵S多膜蛋白是由多亞基組成的 ,其中有的亞基插入在脂雙層 ,有些亞基則是外周蛋白。一種很少見的貧血 陣發(fā)性血紅蛋白夜尿就是 GPI 合成缺陷 ,導(dǎo)致紅細(xì)胞容易破裂所至。 20. 單位膜模型 (unit membrane model) 1959 年 所提出。 單位膜也有一些不足∶首先該模型把膜看成是靜止的 ,無法說明膜如何適應(yīng)細(xì)胞生命活動(dòng)的變化；其二，不同的膜其厚度不都是 nm,一般在 5～ 10 nm 之間；其三，如果蛋白質(zhì)是伸展的 , 則不能解釋 酶的活性同構(gòu)型的關(guān)系。 22. 孔蛋白 (porin) 孔蛋白是存在于細(xì)菌質(zhì)膜的外膜、線粒體和葉綠體的外膜上的通道蛋白 ,它們?cè)试S較大的分子通過 ,其中線粒體孔蛋白可通過的最大分子為 6000道爾頓 ,而葉綠體的孔蛋白則可通過相對(duì)分子質(zhì)量在10,000 到 13,000 之間的物質(zhì)。若是要標(biāo)記膜內(nèi)側(cè)的蛋白 ,則需將膜置于低離子強(qiáng)度的溶液中以提高膜的通透性 ,使乳過氧化物酶進(jìn)入膜泡進(jìn)行內(nèi)側(cè)蛋白的標(biāo)記。這種運(yùn)動(dòng)始終保持脂分子在質(zhì)膜中的排布方向，親水的基團(tuán)朝向膜表面，疏水的尾指向膜的內(nèi)部。 人、鼠細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)分三步進(jìn)行∶首先用熒光染料標(biāo)記抗體∶將小鼠的抗體與發(fā)綠色熒光的熒光素(fluorescin)結(jié)合 , 人的抗體與發(fā)紅色熒光的羅丹明(rhodamine)結(jié)合；第二步是將小鼠細(xì)胞和人細(xì)胞在滅活的仙臺(tái)病毒的誘導(dǎo)下進(jìn)行融合；最后一步將標(biāo)記的抗體加入到融合的人、鼠細(xì)胞中，讓這些標(biāo)記抗體同融合細(xì)胞膜上相應(yīng)的抗原結(jié)合?？梢詮耐米拥难褐蟹蛛x這種抗體 ,并將這種抗體共價(jià)連接到熒光染料上 ,就可以通過熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。由于膜的流動(dòng)性 ,漂白斑周圍的熒光物質(zhì)隨著膜蛋白或膜脂的流動(dòng)逐漸將漂白斑覆蓋，使淬滅區(qū)域的亮度逐漸增加 , 最后恢復(fù)到與周圍的熒光光強(qiáng)度相等。這實(shí)際上是膜蛋白不對(duì)稱分布帶來膜功能的不對(duì)稱。如果被標(biāo)記的脂位于脂雙層，根據(jù)共振譜就可以判斷膜脂的流動(dòng)性。 35. 膜運(yùn)輸?shù)鞍?(membrane transport protein) 膜運(yùn)輸?shù)鞍资悄ふ系鞍?, 或是大的跨膜分子復(fù)合物 , 功能是參與被動(dòng)運(yùn)輸 (促進(jìn)擴(kuò)散 )或主動(dòng)運(yùn)輸(運(yùn)輸泵 )。將纈氨霉素插入脂質(zhì)體后，通過環(huán)的疏水面與脂雙層相連 , 極性的內(nèi)部能精確地固定 K+。 (osmosis) 是指水分子以及溶劑通過半透性膜的擴(kuò)散。 ② 簡(jiǎn)單擴(kuò)散的速率與溶質(zhì)的濃度成正比，而膜蛋白幫助的促進(jìn)擴(kuò)散可以達(dá)到最大值 , 當(dāng)溶質(zhì)的跨膜濃度差達(dá)到一定程度時(shí) ,促進(jìn)擴(kuò)散的速度不再提高。通道蛋白的運(yùn)輸作用具有選擇性 ,所以在細(xì)胞膜中有各種不同的通道蛋白。因此這類通道被稱為配體 門控通道，它分為細(xì)胞內(nèi)配體和細(xì)胞外配體兩種類型。載體蛋白對(duì)物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)過程具有類似于酶與底物作用的動(dòng)力學(xué)曲線、可被類似物競(jìng)爭(zhēng)性抑制、具有競(jìng)爭(zhēng)性抑制等酶的特性。 AQP1 及它的同系物能夠讓水自由通過 (不必結(jié)合 ),但是不允許離子或是其他的小分子 (包括蛋白質(zhì) )通過。 ② V型泵 (Vtype pump),或稱 V型 ATPase,主要位于小泡的膜上 ( V代表 vacuole 或 vesicle), 如溶酶體膜中的 H+泵 , 運(yùn)輸時(shí)需要 ATP 供能 , 但不需要磷酸化。 運(yùn)輸?shù)臋C(jī)理是 : 載體蛋白有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn) , 可分別與細(xì)胞外的 Na+、糖 (氨基酸 )等結(jié)合。在細(xì)菌細(xì)胞中，這種運(yùn)輸作用主要是進(jìn)行一些糖的運(yùn)輸，如乳糖、葡萄糖、甘露醇等。它們都是在細(xì)胞內(nèi)合成 ,最后分泌出來并附著到細(xì)胞質(zhì)膜上。 在功能上 ,細(xì)胞表面是細(xì)胞質(zhì)膜功能的擴(kuò)展 ,它保護(hù)細(xì)胞 ,使細(xì)胞有一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的內(nèi)環(huán)境；負(fù)責(zé)細(xì)胞內(nèi)外的物質(zhì)交換和能量交換 ,并通過表面結(jié)構(gòu)進(jìn)行細(xì)胞識(shí)別、信息的接收和傳遞、進(jìn)行細(xì)胞運(yùn)動(dòng) , 以及維護(hù)細(xì)胞的各種形態(tài) ,并且與免疫、癌變都有十分密切的關(guān)系。如果同時(shí)轉(zhuǎn)運(yùn)的兩種物質(zhì)是相反的方向 ,則稱為異向 (antiport),如心肌細(xì)胞中 Na+與 Ca2+的交換 ,也是由 Na+離子梯度驅(qū)動(dòng)的。 ④ ABC 運(yùn) 輸 蛋 白 (ATPbinding cassettle transportor), 這是一大類以 ATP 供能的運(yùn)輸?shù)鞍?, 已發(fā)現(xiàn)了 100多種 , 存在范圍很廣 ,包括細(xì)菌和人。其他幾種 AQP1 與腎功能有關(guān)。在動(dòng)物細(xì)胞中已經(jīng)鑒定了水通道蛋白家族中的六個(gè)成員 ,在植物中發(fā)現(xiàn)了具有類似功能的蛋白質(zhì)。載體蛋白促進(jìn)擴(kuò)散時(shí)同樣具有高度的特異性 ,其上有結(jié)合點(diǎn) ,只能與某一種物質(zhì)進(jìn)行暫時(shí)性、可逆的結(jié)合和分離。開放往往只有幾毫秒時(shí)間。膜運(yùn)輸?shù)鞍椎倪\(yùn)輸作用也會(huì)受到類似于酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制 ,以及蛋白質(zhì)變性劑的抑制作用。 一般說來 , 氣體分子（如 O CO N2）、小的不帶電的極性分子（如尿素、乙醇）、脂溶性的分子等易通過質(zhì)膜，大的不帶電的極性分子（如葡萄糖）和各種帶電的極性分子都難以通過質(zhì)膜。這種移動(dòng)方式是單個(gè)分子的隨機(jī)運(yùn)動(dòng)，無論開始的濃度有多高，擴(kuò)散的結(jié)果是兩邊的濃度達(dá)到平衡。根據(jù)改變離子通透性的機(jī)制不同 ,將離子載體分為兩種類型 :通道形成離子載體 (channelforming ionophore)和離子運(yùn)載的離子載 體 (ioncarrying ionophore)。包括細(xì)胞核、線粒體、葉綠體、溶酶體、過氧化物酶體、高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等與細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)交換。為了克服這些不足 ,發(fā)展了單顆粒示綜(singleparticle tracking,SPT)技術(shù) ,可以用抗體金 (直徑 15～ 40 nm)來標(biāo)記單個(gè)膜蛋白 ,然后通過計(jì)算機(jī)控制的攝像顯微鏡進(jìn)行觀察 。膜蛋白一旦被標(biāo)記就可用激光束進(jìn)行局部照射處理 ,使熒光脫色 ,形成直徑約為 1μ m 的白斑。斑逐漸聚集擴(kuò)大 ,當(dāng)小鼠淋巴細(xì)胞質(zhì)膜表面抗體全部同兔子的抗小鼠抗體結(jié)合后 ,將會(huì)在細(xì)胞表面的一側(cè)形成“帽子”結(jié)構(gòu) ,最后通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。如果將對(duì)照實(shí)驗(yàn)的融合細(xì)胞置于低溫 (1℃ )下培育 , 則抗原蛋白基本停止運(yùn)動(dòng)。但是有些細(xì)胞含有翻轉(zhuǎn)酶 (flipase)能夠促使某些磷脂從膜脂的一葉翻轉(zhuǎn)到另一葉，所以這些酶在維持膜脂的不對(duì)稱分布中起重要作用。一定溫度下 , 晶態(tài) 又可溶解再變成液晶態(tài)。 24. 膜蛋白放射性標(biāo)記法 (radioactive labeling procedure) 研究細(xì)胞膜蛋白分布不對(duì)稱的一種方法。其一 ,蛋白質(zhì)不是伸展的片層 ,而是以折疊的球形鑲嵌在脂雙層中 ,蛋白質(zhì)與膜脂的結(jié)合 程度取決于膜蛋白中氨基酸的性質(zhì)。它與片層結(jié)構(gòu)模型有許多相同之處，最重要的修改是膜脂雙分子層內(nèi)外兩側(cè)蛋白質(zhì)存在的方式不同。該模型認(rèn)為膜的骨架是脂肪形成的脂雙層結(jié)構(gòu) ,脂雙層的內(nèi)外兩側(cè)都是由一層蛋白質(zhì)包被 ,即蛋白質(zhì) 脂 蛋白質(zhì)的三層結(jié)構(gòu) ,內(nèi)外兩層的蛋白質(zhì)層都非常薄。同脂的結(jié)合有兩種方式，一種是蛋白質(zhì)直接結(jié)合于脂雙分子層，另一種方式是蛋白并不直接同脂結(jié)合，而是通過一個(gè)糖分子間接同脂結(jié)合?？缒さ鞍滓话愫?25%～ 50%的α螺旋 , 也有β折疊，如線粒體外膜和細(xì)菌質(zhì)膜中的孔蛋白。 15. 脂質(zhì)體 (liposome) 將少量的磷脂放在水溶液中 ,它能夠自我裝配成脂雙層的球狀結(jié)構(gòu) ,這種結(jié) 構(gòu)稱為脂質(zhì)體，所以脂質(zhì)體是人工制備的連續(xù)脂雙層的球形脂質(zhì)小囊。 磷脂烴鏈的長度和不飽和度的不同可以影響磷脂的相互位置 , 進(jìn)而影響膜的流動(dòng)性。 13. 磷脂 (phospholipids) 含有磷酸基團(tuán)的脂稱為磷脂 ,是細(xì)胞膜中含量最豐富和最具特性的脂。 10. 錨定蛋白 (ankyrin) 又稱 蛋白。血型糖蛋白是第一個(gè)被測(cè)定氨基酸序列的蛋白質(zhì) ,有幾種類型，包括 A、 B、 C、 D。膜骨架首先是通過紅細(xì)胞膜研究出來的。質(zhì)膜的基本作用是維護(hù)細(xì)胞內(nèi)微環(huán)境的相對(duì)穩(wěn)定 ,并參與同外界環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)交換、能量和信息傳遞。實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物通常是小鼠，被敲除了功能基因的小鼠就稱為敲除小鼠 (knockout mice)。 (gene engineering) 基因工程是以分子遺傳學(xué)為理論基礎(chǔ)， 以分子生物學(xué)和微生物學(xué)的現(xiàn)代方法為手段， 將不同來源的基因 (DNA分子 )，按預(yù) 先設(shè)計(jì)的藍(lán)圖， 在體外構(gòu)建雜種 DNA分子， 然后導(dǎo)入活細(xì)胞， 以改變生物原有的遺傳特性、獲得新品種、 生產(chǎn)新產(chǎn)品。層析的方法很多，其中凝膠過濾層析、離子交換層析、親和層析等是目前最常用的層析方法。 離心分離密度大于 ，如 DNA、RNA，需要使用密度比蔗糖和甘油大的介質(zhì)。常用的是蔗糖密度梯度離心 (sucrose density gradient centrifugation)。顯微操作儀是在顯微鏡下對(duì)細(xì)胞進(jìn)行顯微操作的裝置，可用于細(xì)胞核移植、基因注入、染色體微切和胚胎切割等手術(shù)。病毒外殼上的某些糖蛋白可能還有促進(jìn)細(xì)胞融合的功能。 23. 愈傷組織 (callus， culli) 植物受創(chuàng)傷后，在傷面新生的組織稱為愈傷組織。主要內(nèi)容包括：細(xì)胞融合、細(xì)胞生物反應(yīng)器、染色體轉(zhuǎn)移、細(xì)胞器移植、基因轉(zhuǎn)移、細(xì)胞及組織培養(yǎng)。進(jìn)動(dòng)有一定的頻率， 它與所加磁場(chǎng)的強(qiáng)度成正比。在染色體分選中，使用 的探針是同所感興趣染色體互補(bǔ)的寡聚核苷酸，這種探針也可同熒光染料偶聯(lián)。第二反應(yīng)是捕捉劑與初級(jí)反應(yīng)產(chǎn)物的作用，稱捕捉反應(yīng)，產(chǎn)生最終反應(yīng)產(chǎn)物： 15. 免疫熒光技術(shù) (immunofluorescence) 將免疫學(xué)方法 (抗原抗體