sds-page測(cè)定蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量ppt-powe-文庫吧在線文庫
【正文】 ，它本身帶有大量正電荷，因此，盡管結(jié)合了正常比例的 SDS，仍不能完全掩蓋其原有正電荷的影響，它的分子量是 21,000，但SDS凝膠電泳測(cè)定的結(jié)果卻是 35,000。 ? 5．電泳 將直流穩(wěn)壓電泳儀開關(guān)打開，開始時(shí)將電流調(diào)至 10mA。 （ 2）濃縮膠的制備：按表配制 10ml 3%濃縮膠，混勻后用細(xì)長頭滴管將濃縮膠加到已聚合的分離膠上方，直至距離短玻璃板上緣約 ，輕輕將樣品槽模板插入濃縮膠內(nèi)，避免帶入氣泡。 實(shí)驗(yàn)步驟 ? 1． 安裝夾心式垂直板電泳槽：目前，夾心式垂直板電泳槽有很多型號(hào)，雖然設(shè)置略有不同，但主要結(jié)構(gòu)相同，且操作簡(jiǎn)單，不易泄漏。 （ 4） 10%濃縮膠貯液：稱 Acr 10g及 Bis ，溶于重蒸水中，最后定容至 100mL，過濾后置棕色試劑瓶中， 4℃ 貯存。未知蛋白質(zhì)在相同條件下進(jìn)行電泳，根據(jù)它的電泳遷移率即可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得分子量。 ? 學(xué)習(xí)并掌握 SDS－ PAGE法測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子量的技術(shù)。 ? 3. 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)的分子量在 15000～ 202300之間時(shí)，電泳遷移率與分子量的對(duì)數(shù)值呈直線關(guān)系，符合下列方程： 1gMr =K―bmR 式中： Mr為蛋白質(zhì)的分子量； K為常數(shù)； b為斜率； mR為相對(duì)遷移率。 ? 試劑： （ 1）分離膠緩沖液（ TrisHCl緩沖液 ） :取1mol/L鹽酸 48mL， Tris ,用無離子水溶解后定容至100mL。用來溶解標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)及待測(cè)固體。 試劑名稱 配制 20ml不同濃度分離膠所需各種試劑用量 /ml 配制
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1