利用生物工程法制備重組胰島素-文庫吧在線文庫
【正文】 8日星期三 3時 47分 8秒 03:47:088 February 2023 1一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。勝人者有力，自勝者強。 2023年 2月 8日星期三 上午 3時 47分 8秒 03:47: 1楚塞三湘接，荊門九派通。 2023年 2月 上午 3時 47分 :47February 8, 2023 1行動出成果，工作出財富。 融合蛋白的后處理 ? 用溴化氰裂解該融合蛋白 ， 再經(jīng)胰蛋白酶處理 ， 斷開堿性氨基酸 Arg和 Lys的羧基端 ， 然而會誤切掉 B肽末端 8個或 1個氨基酸 ， 然后再進行連接通過胰酶轉(zhuǎn)肽的方法 ， 接上相應 片段的肽鏈，最終獲得人胰島素。 然后共連接 pKK2233DNA的 PvuⅡ HindⅢ 雙酶切較大片段(2602bp)和 BKRA基因片段 (171bp)與上述接頭 ，獲得 BKRA基因 5’端帶有接頭的重組質(zhì)粒 pKIL P H E P H pKK2233 2806bp pUCI 4584bp E E E P P P P P H H H H E* E* EcoRI HindⅢ PvuII+HindIII P E* pUCI 2806bp 2797bp 2886bp pKIL pUC18 pUC2I 2980bp EcoRI PvuII PvuII不完全 HindⅢ EcoRI HindⅢ ? 用 EcoRIPvuII雙酶切 pUCI DNA，回收 150bp片段 ? 用 PvuIIHindIII雙酶切 pKIL DNA 獲得 195片段 ? 共連接 pUC18 DNA EcoRIHindIII載體片段與上述150bp、 195bp片段，獲得含有串聯(lián) BKRA基因(345bp)的重組質(zhì)粒 pUC2I。 ? 另一種是 A， B鏈重組途徑，即用基因工程方法分別產(chǎn)生胰島素 A， B鏈，純化的 A， B鏈再經(jīng)重組產(chǎn)生胰島素。 人胰島素原類似物 BKRA基因的合成 ? 將 BKRA基因分成 6個片段合成 ， 其中 F F F5片段為正向鏈 ， F F F6片段為反向鏈 （ ） 。 ? 分別經(jīng) EcoRIHindIII雙酶切和 PvuII不完全酶切鑒定，均產(chǎn)生了與其大小的 DNA片段。 三聯(lián)體 BKRA ? 在串聯(lián)的 BKRA基礎上再連接一個 BKRA這樣可以增強表達效率，這與 Shen發(fā)現(xiàn)的隨著串聯(lián)分子數(shù)增加，表達水平升高的結(jié)果相一致，如圖： 靜夜四無鄰，荒居舊業(yè)貧。 2023年 2月 8日星期三 3時 47分 8秒
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1