8抗體技術(shù)-文庫吧在線文庫
【正文】 % 7% ● 人源化和人源抗體制備技術(shù)的成熟是治療性單抗進展的關(guān)鍵 在目前進入臨床的單抗中： ▲ 60%為人源化鼠單抗 ▲ 20%為人源單抗 ▲ 20%為鼠單抗（其中 70%用于腫瘤） 人源抗體研制的基本路線 ? 人血清來源 ? 人雜交瘤 — 單克隆抗體 ? 鼠單抗人源化 ? 噬菌體抗體庫 ? 轉(zhuǎn)基因小鼠 轉(zhuǎn)基因小鼠制備人源抗體 滅活小鼠胚系 Ig基因 ? 基因敲除 JH、 JK和 CK基因段 將人胚系 Ig基因轉(zhuǎn)移到小鼠染色體 ? 人工染色體技術(shù) ? 微胞介導(dǎo)的染色體轉(zhuǎn)移 ? 微基因位點胚胎細胞注射 微胞介導(dǎo)的染色體轉(zhuǎn)移 治療性抗體的發(fā)展趨勢 ● 人源抗體制備技術(shù)已經(jīng)成熟，今后將進入以人源抗體為主的時代 ● 基因工程抗體逐漸從研究走向臨床 ● 靶向抗原的研究和選擇已逐漸成為研制治療性單抗的關(guān)鍵 泰欣生 ? 泰欣生 ? （ hR3， Nimotuzumab）重組人源化抗人表皮生長因子受體單克隆抗體，是全球第三個治療實體瘤的單抗藥物，是我國批準的第一個人源化抗體藥物，屬國家 Ⅰ 類新藥。OKT3主要通過細胞清除、不育性激活、功能性受體封阻、免疫調(diào)變、刺激抑制細胞增殖以及直接作用于效應(yīng)細胞等途徑殺傷成熟 T細胞或阻斷機體細胞免疫反應(yīng)達到抗排斥目的。構(gòu)建過程復(fù)雜，周期長，產(chǎn)量低，純化技術(shù)復(fù)雜，基因組過大不穩(wěn)定。 – 20世紀末期構(gòu)建了為數(shù)眾多的抗各種惡性腫瘤的嵌合抗體，但真正應(yīng)用于臨床的較少，主要是因為該技術(shù)已被日益成熟的 人源化抗體 技術(shù)所取代。如加入一段有疏水性和一定伸展性的肽鏈，可緩解兩種蛋白的相互干擾。 2. 鑒定病原體，準確診斷傳染病。但產(chǎn)量不高。 ? 小鼠腹腔巨噬細胞還能清除死亡細胞，應(yīng)用較多。 （一）多克隆抗體 (Polyclonal antibody) 1. 概念 給動物接種抗原所獲得的免疫血清或抗血清是多種抗體的混合物 , 它是由多種抗原決定簇刺激多株 B細胞增殖分化所產(chǎn)生的 , 稱為多克隆抗體 . 2. 多克隆抗體的應(yīng)用 ? 免疫學(xué)檢測 ? 被動免疫治療和緊急預(yù)防 ? 特異性差 , 用于免疫學(xué)檢測容易出現(xiàn)交叉反應(yīng) （二）單克隆抗體 (Monoclonal antibody,McAb) 通過 B細胞雜交瘤技術(shù) , 獲得特異性針對某一種抗原決定簇的細胞克隆，產(chǎn)生均一性的抗體 . 單克隆抗體的特性 高度均一性： 純度很高的均一性抗體 高度專一性： 只對抗原分子上某一抗原決定 簇起反應(yīng) 大量產(chǎn)生及穩(wěn)定性： 雜交瘤細胞能在體內(nèi)外無限繁殖 之傳代 １、細胞工程抗體 —— 雜交瘤 單克隆抗體 雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體的主要步驟包括 （ 1）抗原制備； （ 2）免疫動物； （ 3）免疫脾細胞和骨髓瘤細胞的制備； （ 4）細胞融合； （ 5）雜交瘤細胞的選擇培養(yǎng)； （ 6）雜交瘤細胞的篩選； （ 7）雜交瘤細胞的克隆化； （ 8）單克隆抗體的檢定； （ 9）分泌單克隆抗體雜交瘤細胞系的建立； （ 10）單克隆抗體的大量制備。 Metchnikoff 抗體生成、吞噬 1972 Edelman amp。 HAT選擇性培養(yǎng)的原理 ? 融合后產(chǎn)生脾脾、脾瘤、瘤瘤融合細胞和未融合的骨髓瘤細胞。 ? 盡早克隆化。 – 操作簡便，經(jīng)濟，所得單克隆抗體量多且效價高，可有效保存雜交瘤細胞株。 小分子抗體 鼠單抗人源化 基因工程改造的抗體 小分子抗體 小分子抗體 ? 基因工程小分子抗體僅表達鼠源性 McAb的V區(qū)（ CDR ）片段，其相對分子質(zhì)量僅為原抗體的
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