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【正文】是標(biāo)本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低。降低甲醇濃度或者使用乙醇或異丙醇代替轉(zhuǎn)移時間不夠對于厚的膠以及高分子量蛋白需要延長轉(zhuǎn)移時間膜沒有完全均勻濕透使用100% methanol浸透膜洗膜不充分增加洗液體積和洗滌次數(shù) 阻斷不充分增加封閉液孵育時間，或者提高溫度。洗膜過度縮短洗滌時間 HRP抑制劑所用溶液和容器中避免含有疊氮化鈉抗體活性降低選擇在有效期內(nèi)的抗體，工作液現(xiàn)配現(xiàn)用，避免長時間放置蛋白轉(zhuǎn)移不充分見上述封閉過度減少封閉劑的量或縮短時間；換用不同封閉劑類型曝光時間過短延長曝光時間

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