細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)ppt課件-文庫(kù)吧在線(xiàn)文庫(kù)
【正文】 應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速？ ? 欲回收動(dòng)物細(xì)胞，其離心速率一般為300xg (約 1,000rpm)， 5 10 分鐘， 過(guò)高之轉(zhuǎn)速， 將造成細(xì)胞死亡 細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí)， 是否應(yīng)馬上去除 DMSO？ ? 除少數(shù)特別注明對(duì) DMSO 敏感之細(xì)胞外， 絕大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞），在解凍之后，應(yīng)直接放入含有 1015ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除 DMSO 即可，如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)或貼附之問(wèn)題 支原體 (mycoplasma) 污染的細(xì)胞，是否能以肉眼觀察出異狀？ ? 不能。 細(xì)胞培養(yǎng)的污染和檢測(cè) ? 細(xì)胞污染的種類(lèi) 細(xì)菌、酵母菌、霉菌和病毒 ? 污染源 無(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng) 操作室環(huán)境不佳 污染之血清 污染之細(xì)胞 細(xì)菌培養(yǎng)液被洋蔥佰克霍爾德菌污染了。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果，將造成細(xì)胞生長(zhǎng)停滯或死亡。 ? 試劑保存不當(dāng) – 血清需保存在 5℃ 到 20℃ 。 ?冷凍過(guò)程要緩慢。 注意事項(xiàng) ? 1．傳代培養(yǎng)時(shí)要注意 無(wú)菌操作 并防止細(xì)胞之間的交叉污染。 ? 癌細(xì)胞則由于營(yíng)養(yǎng)成分的消耗和細(xì)胞代謝產(chǎn)物的影響而發(fā)生 密度抑制 （三）停滯期： 即細(xì)胞數(shù)量達(dá)到飽和密度后，細(xì)胞與營(yíng)養(yǎng)液的交換面積減少，代謝產(chǎn)物積累， pH下降細(xì)胞停止增殖，進(jìn)入停滯期。過(guò)濾。原代培養(yǎng)細(xì)胞離體時(shí)間短，性狀與體內(nèi)相似，適用于研究。用 消過(guò)毒的剪刀 在軀干中部環(huán)行剪開(kāi)皮膚，剖腹取出子宮置于無(wú)菌平皿中。在一代中，細(xì)胞培增 3～ 6次 培養(yǎng)細(xì)胞一代生長(zhǎng)過(guò)程 （一） 潛伏期（ Latent phase） ： 細(xì)胞從接種到貼壁生長(zhǎng)繁殖的一段時(shí)間 。 ? 倒去瓶中的舊培養(yǎng)液 ，加入 2～ 3ml的 DHanks液，輕輕振蕩漂洗細(xì)胞，以除去懸浮在細(xì)胞表面的碎片。每一種細(xì)胞使用一套器材。清潔支架和培養(yǎng)箱。除極有經(jīng)驗(yàn)之專(zhuān)家外，大多數(shù)遭受支原體污染的細(xì)胞株， 無(wú)法以其外觀分辨之。 洋蔥佰克霍爾德菌（ Burkholderiacepacia）原屬假單胞菌屬，是植物病原菌。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑 (通常為 phenol red) 的顏色也會(huì)隨堿性增加而更偏暗紅?；蛴?
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