目的基因的獲取ppt課件-文庫吧在線文庫
【正文】 唑與 CPG所連的核苷酸縮合 ? 第四步 蓋帽（ Capping） 封閉未反應的核苷酸單體 1 ? 第五步 氧化（ Oxidation） 三價磷氧化為五價的磷 ? 多次循環(huán)直到合成所需的長度，用濃氨水將DNA從固相上洗脫下來，真空抽干，樣品溶于適量水中進行純化分析。以 mRNA為模板逆轉錄成 cDNA第一條鏈后，用 PCR技術擴增出某個特異位點到 3’或 5‘之間的未知序列的方法，分別稱 3’RACE或 5‘RACE。 二、 cDNA文庫 (plementary DNA library)的構建 cDNA文庫： 以 mRNA為模板在反轉錄酶的作用下將形成的互補 DNA（ cDNA）經過重組擴增得到的基因文庫。 第六節(jié) mRNA差別顯示技術獲得差異表達的基因 ?mRNA差異顯示技術（ mRNA differetial display）：將 mRNA逆轉錄和 PCR技術結合起來的一種 RNA指紋圖譜技術，因此稱 DDRTPCR。其中 M為除了 T以外的任何一種核苷酸（即 A、 G或 C），而 N則為任何一種核苷酸（即 A、 G、 C或 T），故 MN共有 12種不同的排列組合方式。 獲取目的基因的選擇策略 ?已知目的基因的部分序列，或其他物種中同源基因的保守序列； ?已知基因表達的蛋白產物； ?已知與目的基因緊密連鎖的分子標記或有可操作的功能性轉座子； ?組織、細胞或誘導特異表達。 ?應用于真核基因的表達調控，細胞粘合因子間的相互作用、信號轉導通路以及細胞周期與分化、反式因子的鑒定與分離等研究。這種引物通常叫作 339。 ? 轉座子標簽法 導入 轉座子 含轉座子的顯性純合體 AA* 隱性純合體 aa 突變或隱性表型 A*a 顯性表型 Aa aa A*a A*A* 篩選 構建基因文庫 第五節(jié) 圖位克隆獲得目的基因 ?圖位克?。?mapbased cloning），又稱定位克隆，基于某些生物已制備出精確的遺傳圖譜。 For example : 期望值為 ，插入片斷為 20kb的 ( 106 bp) 和 human (3 109 bp) 基因組的克隆數的計算 N = = 103 ln( ) ln[1(2 104/ 106)] Nhuman= = 105 ln() ln[1(2 104/3 109)] 一、基因組文庫 （ genomic library） 的構建 ：將某一生物基因組 DNA片段化并全部克隆后所獲得的重組子群體的總稱。 三、逆轉錄 PCR（ RTPCR) mRNA cDNA PCR 已知目的基因序列的 RTPCR 從基因編碼部分氨基酸序列出發(fā)的RTPCR mRNA 5‘ AAAAAA3’ RTGSP 逆轉錄 5’ AAAAAA3’
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