菌種改造技術(shù)word版-文庫(kù)吧在線文庫(kù)
【正文】 測(cè)定 純種分離后需要對(duì)菌株的生產(chǎn)性能做測(cè)定，一般使用兩步法，即初篩和復(fù)篩。由于紫外線應(yīng)用最為廣泛 ,效果好，操作方便，我們?cè)诖藢?duì)紫外線誘變做以詳細(xì)介紹。同一誘變劑對(duì)不同微生物或同一微生物不同條件下處理作用效果也不同，因此在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)認(rèn)真考慮。 和方法 誘變育種的一般方法 [3]，如圖所示： 從圖中可以看出，誘變育種的一般過程與上述出發(fā)菌株的選擇步驟基本一致，只是加入了誘變處理的操作。協(xié)調(diào)功能控制酶的合成量，一旦酶合成，其活性又受到激活因 子和抑制因子的調(diào)節(jié)。 初級(jí)代謝產(chǎn)物調(diào)節(jié)的方式主要有： （ 1）降低產(chǎn)物的濃度 在一些較為簡(jiǎn)單的代謝途徑中用這種辦法能積累中間產(chǎn)物。限量添加不同的營(yíng)養(yǎng)物酶活在不同的生長(zhǎng)速率下達(dá)到峰值。在實(shí)際應(yīng)用中，可根據(jù)需要靈活運(yùn)用。 （ 3）營(yíng)養(yǎng)缺陷型的檢出 檢出方法很多，包括逐個(gè)測(cè)定法、夾層檢出法、限量補(bǔ)充培養(yǎng)基檢出法、影印培養(yǎng)法等。 的方法 以酵母菌的雜交為例，步驟包括酵母子囊孢子的形成，子囊孢子的分離和酵母雜種的獲得。其步驟包括 DNA的提取，轉(zhuǎn)化操作及轉(zhuǎn)化體的檢出。 育種 基因工程又稱重組 DNA技術(shù)，是指講一種或多種生物的基因與載體在體外進(jìn)行拼接重組，然后轉(zhuǎn)入另一種生物，是受體按人們的愿望表現(xiàn)出新的性狀。相信今后會(huì)有更多實(shí) 驗(yàn)室研究出適用于工業(yè)生產(chǎn)的菌種，菌種改造的技術(shù)也會(huì)日益完善。其主要思想是將酸性蛋白酶基因通過酵母的整合型表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到工業(yè)酒精酵母中，酸性蛋白酶的表達(dá)可以水解原料中的蛋白質(zhì)，增加醪液中酵母可吸收性氮，促進(jìn)酵母的增殖。所以轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵是選擇合適的噬菌體。 （ 3）取集中子囊孢子的液蠟 ，加入 %的明膠，涂 CM板，就可獲得單倍體菌落。然后在含菌體平皿上放置少量試驗(yàn)物質(zhì)，觀察生長(zhǎng)情況，確定缺陷型的類別?？股刂饕怯们?霉素，將中間培養(yǎng)后的菌種在基本培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，野生型可大量生長(zhǎng)，而突變型由于營(yíng)養(yǎng)缺陷生長(zhǎng)受到抑制，這時(shí)用青霉素處理，殺死正在分裂繁殖的野生型，而保留了突變型。經(jīng)典的化學(xué)培養(yǎng)基含有葡萄糖和乳糖，在這樣的培養(yǎng)基中產(chǎn)黃青酶在生長(zhǎng)期時(shí)快速利用葡萄糖，當(dāng)葡萄糖耗盡后，乳糖利用的阻遏去除了，生長(zhǎng)期開始緩慢利用乳糖 ，抗生素便能夠大量合成。講培養(yǎng)物涂布到含有這種抗代謝物的平皿上能殺死大多數(shù)細(xì)胞從而篩到抗性突變株，其中有些可能過量代謝。 代謝的調(diào)控類型主要有誘導(dǎo)、碳分解代謝產(chǎn)物調(diào)節(jié)、氮分解代謝產(chǎn)物調(diào)節(jié)、磷硫的調(diào)節(jié)、反饋調(diào)節(jié)。紫外線照射和光照復(fù)活交替的處理方法能夠大大提高突變的概率；兩種誘變劑復(fù)合處理的作用效果也要明顯優(yōu)于單一誘變劑處理。引起 DNA和核苷酸組成成分變化的化合物主要是指烷化劑和亞硝酸類物質(zhì)。一般微生物營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞在上述條件下幾十秒鐘即可死亡，因此要選用適當(dāng)劑量照射。 （工業(yè)菌種基因超級(jí)誘變技術(shù)的開發(fā)與應(yīng)用研究） 二戰(zhàn)期間，
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