【正文】 to（ 進(jìn)樣口 ） GC Inj1（ 進(jìn)樣口 1） Inject Speed（進(jìn)樣速度） 500ul/s Syr Flushing（氣體吹針時(shí)間） 120s GCRuntime（氣相運(yùn)行時(shí)間） 紅河學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 11 實(shí)驗(yàn)步驟 樣品的預(yù)處理 將草果 不同部位（殼、仁 、果 、莖、葉、芽）、不同產(chǎn)地 （紅河、 楚雄、 麗江 、大理、文山、玉溪）、不同炮制方法 （凈制 、炒制、鹽制、姜 制 、醋制） 的草果 于萬能中藥粉碎機(jī) 中粉碎 ， 過 100 目 中藥篩，并儲(chǔ)存在密封袋中，貼上標(biāo)簽。國外有關(guān)指紋圖譜的報(bào)道無一例外地將指紋圖譜作為鑒別項(xiàng)，評(píng)價(jià)草藥的真實(shí)性以及產(chǎn)品質(zhì)量的一致性，韓國、日本、德國等，都比較重視對植物藥的開發(fā)和利用德國用指紋圖譜技術(shù)控制銀杏制劑的質(zhì)量，在國際上具有很強(qiáng)的競爭力。 在 HSGCMS 優(yōu)化 條件下， 通過 質(zhì)譜（ MS）對草果不同部位（ 果 、殼、仁、莖、葉、芽） 揮發(fā)性 成分進(jìn)行測定 ，采用峰面積歸一法計(jì)算各組分的相對含量，同時(shí)建立草果不同部位（果、殼、仁、莖 、葉、芽）、不同產(chǎn)地 （紅河 、楚雄、麗江、大理、玉溪、文山）、不同炮制方法（ 炒制 、鹽制、 姜制 、凈制、醋制）的 揮發(fā)性 GCMS 指紋圖譜 ，采用“ 中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng) 2020A 版 ”軟件對指紋圖譜進(jìn)行相似度計(jì)算，采用 SPSS 軟件對指紋圖譜進(jìn)行聚類分析、主成分分析 的 文章未見報(bào)道。 《中華人民共和國藥典》 2020 年版 醋制 醋煮 [16] 《嵩崖尊生全書》 1 引 言 4 標(biāo)準(zhǔn)化研究中的一種新的思路。 聚類分析 聚類分析可以將一組數(shù)據(jù)按照本身的內(nèi)在規(guī)律較合理地分為幾類， 通過比較各事物之間的性質(zhì)，將性質(zhì)相近的歸為一類，性質(zhì)差別較大的歸入不同類，縮小主觀判斷所造成的誤差，具有較好的科學(xué)性和客觀性 [18]。 草果 的炮制方法，自古至今有很多種，論文只列舉出典型的五 種， 對 不同 炮制方法的草果的指紋圖譜 和 化學(xué)成分進(jìn)行研究。水蒸氣蒸餾和有機(jī)溶劑提取會(huì)損失掉一些低相對分子質(zhì)量的萜類和小分子量的酯類等易揮發(fā)的化合物，這些化合物往往對揮發(fā)油的氣味起著重要的作用。 草果 揮發(fā)性成分 提取 方法有回流提取、 超臨界 CO2 流體萃取、超聲提取、微波萃取 [5]、 頂空 提取， 分析 方法大多為氣相色譜 質(zhì)譜法（ GCMS）。total chemical constituents extracted a total of 4 principal ponents。 關(guān)鍵詞： 草果， 氣相色譜 質(zhì)譜， 指紋圖譜 ， 相似度 分析，聚類分析， 主成分分析 紅河學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） ABSTRACT The Jinping County in Honghe Prefecture of Amomum Tsao Ko as reference sample,to find the best static headspace gas chromatographymass spectrometry (HSGCMS) condition,optimization of extraction and injection method,under the optimized conditions, The different parts (fruit, fruit shell, seed, stem, leaf, bud) volatile ponents were determined, and the establishment of different parts (fruit of Amomum Tsao Ko, shell, kernel,stem, leaf, bud), different areas (Chuxiong, Lijiang, Honghe, Dali, Yuxi, Wenshan), different processing methods (frying, salt, ginger, vinegar, system) GCMS fingerprint of thevolatile, traditional Chinese medicine chromatographic fingerprint similarity evaluation system 2020A version of software to calculate the similarity of fingerprints, cluster analysis, principal ponent analysis of the fingerprint by SPSS 19 software. Optimization of conditions for GCMS: the split ratio was 20:1, the column flow rate is 1, the column was HPFFAP。 GCMS 的 優(yōu)化條件 為 ： 分流比為 20: 柱流量為 、 色譜柱 為 HPFFAP； 草果超聲提取頂空進(jìn)樣 的振 蕩溫度為 140℃ ， 振 蕩時(shí)間為 20min；草果 干粉頂空進(jìn)樣 振 蕩溫度為 150℃ ，振 蕩時(shí)間為 10min； 草果的最佳提取進(jìn)樣方式為：干粉頂空進(jìn)樣。 the best extract of Amomum Tsao Ko andsampling methods for dry powder: Headspace sampling. Apples in different regions were identified 86 pounds. Volatile fingerprints of different parts of Amomum Tsao Ko, different regions, different processing methods for similarity showed that: large differences in different samples of Amomum Tsao Ko, unstable distribution。具有溫中、健胃、消食、順氣的功能 [2]，主治心腹疼痛、脘腹脹滿、惡心嘔吐、咳嗽痰多、瘧疾寒熱等。 中藥指紋圖譜 主要的 分析方法有 有高效液相色譜 (HPLC) 法、氣相色譜 (GC) 法、高效毛細(xì)管電泳 (HPCE) 法、紅外光譜 ( IR)法、質(zhì)譜 ( MS)法、核磁共振 ( NMR) 法、 X射線衍射 ( XRD) 法等 [7]。 草果 的炮制 中藥必須經(jīng)過炮制之后才能入藥，是中醫(yī)用藥的特點(diǎn)之一。以相似度判斷中藥的質(zhì)量，關(guān)鍵在于中藥中各成分含量發(fā)生變化計(jì)算的相似度結(jié)果是否發(fā)生相應(yīng)的改變。 《云南省中藥咀片炮制規(guī)范》 鹽制 取草果，除去硬殼后，將仁搓散，放入鍋中， 用文火加熱，炒香后，噴放鹽水，繼續(xù)炒干， 取出，晾涼。主成份分析的目標(biāo) ,就是要對多變量的高維系統(tǒng)進(jìn)行最佳簡化。由于中藥注射液的特殊性，我國決定先采用中藥指紋圖譜控制中藥中注射劑的質(zhì)量。英國、印度以及 WTO 等藥品管理機(jī)構(gòu)，也都采用指紋圖譜技術(shù)對植物藥、草藥質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià) [22]。 樣品檢測 將待測樣品于 GCMS 進(jìn)行檢測，檢測條件見 。 所以 柱流量為 時(shí)草果提取 的揮發(fā)性成分多， 且 節(jié)省時(shí)間。 草果揮發(fā)性 成分 提取 和進(jìn)樣方式的比較 在 上述最佳條件下， 對 草果揮發(fā)性成分 提取 進(jìn)樣方式（超聲提取直接進(jìn)樣、超聲提取頂空進(jìn)樣、干粉頂空進(jìn)樣）進(jìn)行比較 ，見 圖 315。 草果不同 部位 揮發(fā)性 成分 的測定 結(jié)果 見表 31。 （ 3） 提取和進(jìn)樣方式 的 優(yōu)化： 干粉 頂空進(jìn)樣。將待測樣品于 GCMS進(jìn)行檢測， GCMS 的 檢測條件見 ，改變 靜態(tài)頂空 振 蕩箱溫度和振蕩時(shí)間，討論靜態(tài)頂空振蕩箱溫度和振蕩時(shí)間對草果揮發(fā)性成分提取的影響 ， 靜態(tài)頂空（ HS） 的 振蕩箱溫度分 別 設(shè)置為 120℃ 、 130℃、 140℃、 150℃，振 蕩時(shí)間 分別設(shè)置為 10min、 15min、 20min、 25min ， 不同振蕩溫度、不同振蕩時(shí)間的 GCMS圖譜 分別見圖 3 39， 時(shí)間、信號(hào)圖譜見圖 3 310。 分流比 為 10:1 時(shí)峰 形沒有 20:1 時(shí) 對稱 ；分流比 為 10:1時(shí)出 峰比 20:1 時(shí) 少，且峰形較小 ； 不分流 時(shí) 峰形雖然比分流比 20： 1 時(shí) 峰形高大 ，但 是 峰 形 放大 之后極不對稱、而且雜 峰 很多 、 重疊峰很多，分離效果最差。 表 21 草果樣品 的 產(chǎn)地、不同 部位的 顏色 產(chǎn)地 部位 顏色 外觀 形狀 平均質(zhì)量（ g） 紅河 殼 棕黑色 圓形 仁 黃色 莖 綠色 葉 綠色 芽 紅色 楚雄 殼 棕 黃 色、 棕黑色 橢圓形 、圓形 仁 棕紅 色 麗江 殼 棕黑 色 橢圓形 仁 棕黃 色 大理 殼 棕黃色 橢圓形 仁 棕紅色 玉溪 殼 棕黑色、 棕黃色 橢圓形 、圓形 仁 淡黃色 文山 殼 棕黃 色 橢圓形 仁 棕紅色 2 實(shí)驗(yàn)部分 8 主要儀器及試劑 表 22 主要 儀器及試劑 儀器 與試劑 型號(hào) 與規(guī)格 生產(chǎn) 廠家 氣相色譜 質(zhì)譜聯(lián)用儀（ 配有AOC5000 自動(dòng) 進(jìn)樣器） GCMSQP 2020 日本島津公司 超聲波清洗器 SK5200HP 上海 科導(dǎo)超聲儀器有限公司 高速 萬能粉碎機(jī) DFY400 溫嶺市 林大機(jī)械有限公司 電子天平 CP224C 奧豪斯儀器（上海）有限公司 電熱 鼓風(fēng)干燥箱 DHG9070A 上海 恒科學(xué) 儀器有限公司 電子 萬用 爐 220V， 1kW 浙江省 上虞市通州實(shí)驗(yàn)儀器廠 直接 進(jìn)樣針 10uL 日本 島津公司 靜 態(tài)頂空進(jìn)樣 針 10uL 美國安捷倫 公司 中藥 篩 100 目 溫嶺市 林大機(jī)械有限公司 直接 進(jìn)樣瓶 2mL 北京欣 惠澤奧科技有限公司 靜態(tài)頂空進(jìn)樣瓶 20mL 廣州 市鴻州實(shí)驗(yàn)器材科技有限公司 漏斗 直徑： 90mm 深圳市鼎鑫宜實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司 化學(xué)分析濾紙 直徑 ： 15cm 上海 敬 智過濾 材料有限公司 色譜柱： Rtx5MS 30m 美國 Restek 公司 色譜柱： DB1701 30m 美國 安捷倫公司 色譜柱： HPFFAP 30m 美國 安捷倫公司 移液管 10mL 深圳 玻璃儀器公司 具 塞三角燒瓶 50mL 深圳 玻璃儀器公司 燒杯 50mL、 100mL 深圳 玻璃儀器公司 自封袋 12 17cm 臺(tái)州市冠 龍塑業(yè)有限公司 正己烷 AR 天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司 丙酮 AR 重慶 川東化工有限公司 生姜 食醋 糯米 白醋 加 加食品集團(tuán)股份有限公司 食鹽 白象牌 云南 鹽 化 股份有限公司 紅河學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 9 實(shí)驗(yàn) 、 儀器條件 表 23 實(shí)驗(yàn) 、 儀器條件 超聲 條件 超聲 時(shí)間 30min 料液比 1:15 提取溶劑 正己烷 超聲功率 200W GC 條件 柱箱溫度 80℃ 進(jìn)樣口溫度 220℃ 分流比 20:1 柱流量 總流量 ml/min 吹掃流量 載氣 He（純度≥ %，壓力 ： 177。 國外對于指紋圖譜的研究較國內(nèi)已達(dá)到了較高階段。 目前 ， 對草果 GCMS 指紋圖譜研究，如吳惠勤等采用 PR 混合溶劑超聲提取中藥材草果的揮發(fā)油，運(yùn)用 GC MS 分析其化學(xué)成分及相對含量 ， 建立草果揮發(fā)油的 GCMS 指紋圖譜，化學(xué)成分相對含 量較高，各組分間比例基本保持恒定，可作為草果的特征成分，為鑒別中藥草果真實(shí)性及評(píng)價(jià)其質(zhì)量的指標(biāo)提供依據(jù)[3]；丁艷霞等采用 GCMS 方法建立草果揮發(fā)油指紋圖譜，探討 GCMS 聯(lián)用技術(shù)在草果揮發(fā)油質(zhì)量控制方面應(yīng)用的可行性，不同產(chǎn)地草果油的指紋圖譜中各成分均得到了較好的分離，具有特征性和唯一性 ， 作為草果油質(zhì)量的控制方法 [21]。每草果仁 100Kg，用生姜 10Kg或干姜 3Kg[15]。論文文采用“ 中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng) 2020A 版 ”軟件對其指紋圖譜進(jìn)行相似度計(jì)算，了解各 樣品之間的差異和變化規(guī)律 [17]。不同 炮制方法的草果，其臨床療效 、 藥性有所不同，主要表現(xiàn)在化學(xué)成分的差異上 [11]。 傳統(tǒng)分析揮發(fā)油的方法是采 用水蒸氣蒸餾或有機(jī)溶劑提取再進(jìn)行氣相色譜分析。此外 ， 研究還發(fā)現(xiàn)草果中含有淀粉、油脂及 Zn、Mn、 Cu 、 Fe、 Ni、 Sn、 Pb 等微量元素。 including