20xx核酸檢測基本知識(存儲版)
【正文】 ：使用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離方法以及自動化儀器等商品化試劑或設(shè)備并按說明書操作。使用商品化RTPCR一步法試劑進(jìn)行第一輪擴(kuò)增反應(yīng)。（2）HIV核酸檢測陽性：發(fā)現(xiàn)核酸陽性反應(yīng)，應(yīng)該重復(fù)采集樣品進(jìn)行復(fù)測，復(fù)測結(jié)果呈核酸陽性反應(yīng)則判定為核酸陽性，復(fù)測結(jié)果為核酸陰性反應(yīng)則判為不確定結(jié)果，需進(jìn)一步隨訪檢測。自動化核酸擴(kuò)增儀使用酶聯(lián)比色分析或熒光探針雜交等原理測定。逆轉(zhuǎn)錄cDNA合成反應(yīng)需使用逆轉(zhuǎn)錄引物、dNTPs、逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。bDNA有數(shù)十個覆蓋整個基因組的探針,可以方便地檢測HIV某些變異株,但靈敏度不及PCR，提高bDNA靈敏度是一大難點。將HIV的RNA通過離心從病毒顆粒中釋放出來,然后用捕獲探針1將其捕獲到微孔中。檢測HIVRNA,需要先利用逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)將RNA轉(zhuǎn)錄為cDNA，繼而以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增即可，這樣的反應(yīng)稱為RTPCR。它的原理就是由2段寡核苷酸單鏈DNA探針與目標(biāo)序列雜交,當(dāng)該2段DNA探針與沒有發(fā)生突變的模板褪火后,如果2探針是緊鄰的,中間沒有核苷酸間隔,則可在連接酶作用下連接起來,連接以后的新鏈又可以作為模板,引導(dǎo)下一周期的連接產(chǎn)生新的子鏈。目前主要使用的方法有以下幾種：NASBA是由一對引物介導(dǎo)的、連續(xù)均一的、體外特異性核苷酸序列等溫擴(kuò)增RNA的新技術(shù)。核酸大分子可分為兩類：脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）。RNA平均長度大約為2000個核苷酸，而人的DNA卻是很長的，約有
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